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waters高效液相色谱.doc

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  • 卖家[上传人]:新**
  • 文档编号:514067276
  • 上传时间:2023-10-22
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    • Waters高效液相色谱操作说明一. 简介本高效液相色谱实验包括: waters1525泵+waters2487双波长检测器+色谱柱+电脑(breeze图谱处理软件)+流动相二. 操作流程0•准备工作确定色谱实验方法,处理好流动相 1,换好流动相,确定色谱柱选择无误1.开机打开泵开关,听到两声“嘀”的响声之后,再打开波长检测器检测器进入预热阶段(此时检测器面板进入 5min倒计时)这期间打开电脑,进入英文 windows操作系统2,待检测器自检完毕(整个自检过程约6~7min ),打开电脑桌面的软件)待程序完全启动,整个开机过程结束系统默认进入上次使用的方案2.建立新方法和新方案2.1新建方案方案主要用来储存你的各个实验方法,数据等内容,你可以把它理解为一个文件夹2.1.1创建步骤选择Manage i BreezeMake a nsvi一丄 t单击"next" t在"projectname"中输入方案界面下T单击ManageBreeze单击单击Pump单击Flow | Events | Solvent$ |名称(如abc), "comments"中可填注释,也可不填t单击 "finish"2.1.2打开创建的方案在abc)T点击"0K",即进入到我们自己的方案中了2.2新建方法在新建的方案中,需要建立不同的试验方法。

      试验方法主要设定的包括洗脱方式, 检测波长等参数2.2.1新建方法步骤(Flow选项卡)t在 programmed flow中设定你的洗脱方式(此步在 2.2.2详述)t单击t单击卡)General Channel 1 Channel 2 \ Analog A | Analog B EvenU |束,保存):单击Edit View Messages HelpExitt输入方法名称如 (abc 1) t单击"save"(cha nnel 1 选项 t在"wavelength"框内设定你的检测波长(如 265nm,280nm,215nm 等等)t(设定结222洗脱方式的设定(重要)在programmed flow 中可看到Pump Mode:Isocratic二GradientIS'UIsocratic其中Isocratic为等度洗脱,Gradient为梯度洗脱以下我们来分述2.2.2.1 若你用等度时(Isocratic): "pump mode"中选择"Isocratic"表格中"Isocratic Flow A"为流动相 A的流速,"Isocratic Flow B"为流动相 B的流速,"Total Flow" 为总流速。

      例如:假设方法要求用乙腈做 A相,用纯水做B相,乙腈占70%,水占30%,等度,则:Pump Mode:Isociatic Tkocratc Flow Ahocratic FlowB :T otal Flow :(ml/rmin)(ml/min)(ml/min)0700.30|1 00 一2222 若你用梯度时(Gradient): "pump mode"中选择"Gradient"表格中第1行默认已有,单击下面空白行处添加新行"Time"为时间,即此行开始时间; "Flow"不作更改,保持1ml/min的总流速;%A处填A相比例;%B处填B相比例;curve处为曲线型号,一般不变例如:假设用方法要求乙腈做 A相,用纯水做B相,0 — 10min乙腈从100%到50%;10 — 30min 乙腈从50%到 40%; 30—60min乙腈从40%到80%;则:Programmed FlowTitb(〔血)Flow (mlAnin)%ACurveT11 00100.00.0T10001 0050.050.06330.001 Q040.06o.aS460.001.0080.06Pump Mode:洗脱设置完毕继续按照 2.2.1完成方案的创建。

      3.洗泵和平衡方法设定完毕,我们还要进行洗泵与平衡两项工作,让机器做好进样前的准备3.1洗泵在更换流动相,第一次使用机器,长时间未使用的情况下需要进行洗泵的工作步骤 如下:单击 ―I (purge pump )宀"next"宀按指示图操作:打开泵面板,取塑料注射器,扭开排液阀旋钮,用注射器抽取泵中液体 10ml左右(无气泡即可),反向扭紧旋钮,取出注 射器根据需要灌洗 AB泵单击"next" 按图示操作:向左打开参比阀,单击 "next" ^(即是对AB泵以默认的5mi/min的流速进行冲洗,若只充一个泵,只选一个即可 )默认冲洗时间5min , 5min后自动停止,向右关紧参比阀宀 "finish"结束洗泵3.2平衡洗完泵后,还要将色谱柱内杂质洗净所以我们需要进行平衡在每次进样前,我们都必须洗平衡步骤如下:单击(equilibrate)宀在弹出的对话框选择所需方法(般为你的实验方法,如 abc1 待基线稳定,且达到小数点后 5位数字4的时候,即可停止洗平衡(一般十几钟到几十分钟不等)t4•进样平衡好之后,即可进样(请先将注射器中样品准备好5)进样步骤如下:单击 (si ngleinjetion) t在出现的对话框中输入进样名称,方法,进样体积(一般为10ul),时间等内容,Specify Single Inject Parameters例如I 设置好之后t 单击 "inject"按钮t等到操作动画出现时,将进样环手柄搬到 load位置,平稳插入微量注射器,均匀恒速注入样品液,除另有规定外,不应立即取下注射器,手柄搬到 inject位置,即开始出现图像T点击(send date to review)出现大视图T等到样品跑结束,自动出现结果图。

      中途可以按中止(abort)停止进样5.数据处理得出了色谱图,下一步就是对色谱图各峰的统计,并得出最终结果5.1统计各峰时间,面积,高度等内容步骤如下:单击接着单击TSample Sets| Injection$Methods ]Result SetsResults | Curves|(process ing parameters(channels选项卡)找到你需要处理的内容双击打开6t单击金 St^rt New Processing Paramelerswizard )t选择 ,单击"ok" t可输入统计开始时间和结—Clear Peak Width and Threshold束时间,也可不输,单击 "next" t注意 不要选上,单击"next" t可输入统计最小面积或最小峰高,也可不输,单击 "next" t单击"next" t单击"next"t单击"next" t单击"next" t输入名称,单击"finish" t出现统计表格:此时建议右键选中某些不重要的行,并单击"delete row(s)"进行删除,只留下需要的几行数据即可t点击 ——(saveall),统计操作结束5.2得出结果图。

      步骤如下:FindData点击点击出! Sample SetsInjections|Chennels| j Ft騎lit Sete ]Curves |(results选项卡)找到你需要处理的内容,右键单击那一个结果行t单击eSampleVhInjedicnSempieTypeCharnel DaleDescription AcqiiredAcqdsibon MeffriQdDale ProcessedProcessing Methcdi1 1Unknown1 CI429 35^201110-2137 AMCW29 3UVCM2mkiSOSnol11UnknowncW29 3W2011 5:22:53 PMCW29 3UVCM311UnknownProcess.,..Print...E^pprt.-i!CI429 35^201111-2& 34 AMCM29 3UVOM4tcrgpi2111UnknownWa>1ia:58-45AMdW 3 UV Chi5Eongpi2411llnmowncl4M3W201J 3:30:19 AMcM29 3 UV Chi611UrtnownCopy To Project...cl憾3胡规11知4 orpwdtt9 3IV Chi7tongpi2211UrtnownView As ►CI429 357/Xli 6:25:54 PWcHM 3 LTV ChiStongpi2111UrirownDehta Rm(s)CopyPastePtint TcWeCJ429 357/2011 m+5FXd429 3 LV Chigtcngpn 211UnknownC14M3cM29 3 W ChiIDtongpil 311UrirKwnCI429 357/2011 4:25.35 PMcM29 3 UV Chi11tongpil A11UnfcnownCM2S35/?/2011 2:57.01 PMCI429 3 UV Ch112tiepi2611UnfcftownCI429 3却皿011 2:11.54 PWCM29 3 UV Ch1(preview) t对话框中选(也可以选第三个自己选择显示模式,但一般选择第二个即可) 印出来实验结果(当然也可以保存此实验报告,单击6•关机关机前用纯有机相(最好是甲醇)洗平衡以保存柱子。

      单击0Kt单击Zl (print)即打file t单击 save report 即可)洗干净后停止平衡T单击"file" t单击"exit" t弹出单击"0K",关闭软件,关闭波长检测器,最后关掉泵及总电源注释1~61•流动相的前处理:一般来说,流动相与试液均需过滤与除气泡后才能进入色谱过滤:用 注射器加滤头进行过滤, 或者用专用过滤装置 除气泡:将过滤后的流动相或试样放在超声波里超声30min以上,至无气泡逸出即可2•英文windows系统:学校电脑即是开机的第一个默认的 windows,无需选择,直接按回车进入系统即可3•存储过你的方法之后(如abc 1),下次开机,打开你的方案(如abc)之后,可在"view method" 中找到你保存。

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