《动物毒理实验》课件：实验3 皮肤刺激性试验.ppt

实验三 急性皮肤刺激试验目目 录录试验原理原理试验目的目的试验材料材料试验方法方法结果分析果分析方法方法评价价试验原理试验原理局部刺激局部刺激试验是毒理学是毒理学试验中的一中的一项重要内容，重要内容，对可能具有局部刺激作用的化学物必可能具有局部刺激作用的化学物必须进行此行此项试验，但，但对具有具有强酸（酸（pH≤pH≤2￿ ￿））或或强碱碱（（pH≥pH≥11.5￿ ￿）性）性质的化学物不需做本的化学物不需做本试验，因，因为这些化学物属于腐些化学物属于腐蚀性物性物质另外，已知具另外，已知具有高毒性的化学物也不必有高毒性的化学物也不必进行皮肤刺激行皮肤刺激试验皮肤刺激皮肤刺激试验又称皮肤原又称皮肤原发性刺激性刺激试验试验目的试验目的了解受了解受试化学物化学物对皮肤的直接刺激作用皮肤的直接刺激作用以及刺激以及刺激强度试验材料试验材料——实验动物实验动物实验动物：成年白色家兔或白色豚鼠，物：成年白色家兔或白色豚鼠，首首选白色家兔白色家兔在皮肤刺激在皮肤刺激试验中，中，动物品种的物品种的选择很很重要目前多重要目前多选用兔和豚鼠，用兔和豚鼠，对于于强刺刺激或无刺激作用的化学物激或无刺激作用的化学物选用家兔用家兔检测效果好，但效果好，但对作用作用缓和的刺激性化学物，和的刺激性化学物，选用豚鼠所用豚鼠所获得的得的试验结果果较准确。

准确试验材料试验材料——受试化学物受试化学物受受试化学物：化学物：应用受用受试化学物化学物原液原液或或根据需要原液稀根据需要原液稀释成若干个不同成若干个不同浓度度的的稀稀释液液，也可，也可应用受用受试化学物的化学物的细粉粉每小区皮肤的每小区皮肤的应用用剂量量为液体受液体受试化化学物学物0.3~0.5 ml（（84液液），粉状受），粉状受试化学物化学物0.1~0.5 g （（洗衣粉洗衣粉）试验材料试验材料——其他其他脱毛脱毛剂大大头针、、纱布、棉球、胶布、塑料薄膜布、棉球、胶布、塑料薄膜移液器、天平移液器、天平试验方法试验方法——脱毛脱毛在在动物物脊柱两脊柱两侧或或躯干中部躯干中部用化学用化学药品脱去被毛准品脱去被毛准备好脱毛区好脱毛区脱毛方法：先将被毛剪短，然后在所脱毛方法：先将被毛剪短，然后在所需部位涂上一薄需部位涂上一薄层脱毛脱毛剂，，2~3min后用玻璃棒刮去被毛，并用温水清洗后用玻璃棒刮去被毛，并用温水清洗脱毛脱毛剂，，纱布擦干采用采用局部全封局部全封闭斑斑贴法法或或局部半封局部半封闭斑斑贴法法进行皮肤刺激行皮肤刺激试验试验方法试验方法——局部全封闭斑贴法局部全封闭斑贴法当以当以动物背部脊柱两物背部脊柱两侧的皮肤的皮肤做受做受试部位部位时，先将其两，先将其两侧脱毛区分成若干个小区，小区面脱毛区分成若干个小区，小区面积的的总和和应约为动物体表物体表面面积的的1/10 。

将其中一将其中一侧的各个小区，分的各个小区，分别用大用大头针在皮在皮肤上划一肤上划一““#””字形擦字形擦伤，以，以观察受察受试化学物化学物对损伤皮肤皮肤的的刺激作用；另一刺激作用；另一侧用以用以观察受察受试化学物化学物对完整皮肤完整皮肤的刺激的刺激作用将受将受试化学物化学物原液原液及不同及不同浓度的度的稀稀释液液，分，分别直接涂敷于直接涂敷于受受试皮肤的若干个小区，然后在各区皮肤上放一皮肤的若干个小区，然后在各区皮肤上放一块4~6层的的纱布布块或其他半吸水性惰性物（或其他半吸水性惰性物（1cm×1cm或直径或直径为1cm）试验方法试验方法——局部全封闭斑贴法局部全封闭斑贴法固体固体药剂可直接加到皮肤上，再用湿可直接加到皮肤上，再用湿纱布覆盖或是放于布覆盖或是放于预先浸湿的先浸湿的皮肤上，也可将糊状受皮肤上，也可将糊状受试化学物涂于化学物涂于纱布布块上，再将其上，再将其贴于皮肤上，于皮肤上，然后在然后在纱布布块上覆盖一上覆盖一层较大的大的不透气的塑料薄膜不透气的塑料薄膜，用胶布和，用胶布和绷带固定经4~8h后，除去斑后，除去斑贴物，物，每每24h观察一次察一次各小区皮肤的局部反各小区皮肤的局部反应，，连续观察察4d，按皮肤刺激反，按皮肤刺激反应评分（表分（表1），定量地），定量地评定受定受试化学化学物物对皮肤局部刺激作用的皮肤局部刺激作用的强度。

度红斑斑通通过肉眼肉眼观察，察，水水肿通通过轻轻触摸的方法来触摸的方法来评分表表1 皮肤刺激强度反应评分皮肤刺激强度反应评分皮肤反应强度皮肤反应强度评分评分A.红斑和焦痂形成无红斑0极轻微红斑（勉强可见）1边界清晰的红斑（明显红斑，淡红至鲜红色）2中等至严重的红斑（鲜红至深红色）3极严重红斑（深红至紫红色），并有焦痂形成（真皮层受损）4B.水肿形成无水肿0极轻微水肿（勉强可见）1轻度水肿（边缘明显地高出周围皮肤）2中度水肿（水肿区高出边缘皮肤约1mm）3严重水肿（水肿区高出边缘皮肤1mm以上，面积超出斑贴区）4试验方法试验方法——局部局部半半封闭斑贴法封闭斑贴法本法与局部全封本法与局部全封闭斑斑贴法不同之法不同之处在于：在于：1.每每组的白色家兔数不的白色家兔数不应少于少于3只；只；2.采采用用纱布布作作斑斑贴物物，，在在无无刺刺激激作作用用的的前前提提下下，，用用半半封封闭敷料敷料固定；固定；3.斑斑贴不需要在擦不需要在擦伤皮肤上皮肤上进行；行；4.斑斑贴4h，，然然后后去去掉掉斑斑贴并并清清洗洗皮皮肤肤，，观察察0.5h、、1h、、￿ ￿ ￿ ￿ ￿ ￿ ￿ ￿ ￿ ￿ ￿ ￿24h、、48h和和72h后后的皮肤反的皮肤反应。

皮肤刺激反皮肤刺激反应评分同全封分同全封闭法结果分析结果分析将将表表1中中A项和和B项评分分结果果相相加加，，凡凡总分分低低于于2分分者者可可视为无无刺刺激激性性或或轻度度刺刺激激性性；；2~6分分之之间者者具具有有中中等等刺刺激激性性；；6分分以以上上者者具有具有强刺激性刺刺激激性性极极强的的物物质，，试用用前前需需经适适当当稀稀释后后再再进行行斑斑贴，，如如稀稀释用用的的溶溶剂本本身身具具有有刺刺激激作用，作用，则需作溶需作溶剂对照照试验另外，也可按表另外，也可按表2中的中的标准来判断准来判断试验结果表表2 皮肤刺激强度分级标准皮肤刺激强度分级标准皮肤刺激强度分级皮肤刺激强度分级皮肤局部反应皮肤局部反应评分评分无刺激性无异常改变0轻度刺激性充血、红斑<2中等刺激性红斑，少量小出血点，水肿，少量丘疹以及小水疱2~6强刺激性红斑，皮下出血，水肿，有很多小水疱并有可能合并成大水疱，糜烂，表皮剥落，有溃疡形成等>6方法评价方法评价皮肤刺激皮肤刺激试验的的结果不果不仅与与检测技技术有关，有关，也与也与试验过程中的程中的质量控制相关量控制相关凡是凡是杀虫虫剂、、杀真菌真菌剂、、杀鼠鼠剂以及具有刺以及具有刺激性的激性的兽药等化学物均需等化学物均需进行局部皮肤刺激行局部皮肤刺激试验，以保，以保护接触人接触人员的健康。

的健康试验药物的量一般以物的量一般以0.5ml或或0.5g为宜，宜，评价固体受价固体受试化学物化学物时不一定要将其配成溶液，不一定要将其配成溶液，具体可酌情而定具体可酌情而定。