英文文献还原性纳米胶束中文版.doc

题目：--种有潜力的抗肿瘤紫杉醇药物载体：基于含有二硫键的PEG共轨聚合物 的聚离子复合物纳米胶束的制备一起还原皱感性摘要：这项工作的目的是开发一种用于传递抗肿瘤药物紫杉醇（PTX）的还原敏感型药物 载体N, N■二（丙烯酰）胱胺（CBA）与乙醇胺（AEOL）通过Michael加成反应生成 含二硫键的阳离子聚CBA-AEOL （PCA）接着，将聚己酸内酯（PLC）接枝于PCA ± 形成了一个新型还原敏感型聚合物即PCA-g-PLC接枝共聚物PCA-g-PLC共聚物自组 装成为平均粒径为108nm的球形胶束观察模拟还原条件下逐步聚合发现：PCA-g-PLC 共聚物中的二硫键使胶束具有还原敬感性为了提高PCA-g-PLC在水溶液中的稳定性， 具有竣基端的聚乙二醇甲棊醯（mPEG・COOH）通过静电作用与PCA-g-PLC接枝聚合物 共价连接形成具有亲水性PEG表而的聚离子复合物胶束在体外，PTX从 mPEG-PCA-g-PLC胶束的釋放农现出还原敏感性，也就是：药物的释放速率与还原剂的 浓度有很人的关系在正常条件下，PTX的禅放率低于30%,, 40mMolDTT的还原性条件下，药物几乎在9小时内完全释放。

综上所述，具有述原控制释放性的 mPEG-PCA-g-PLC胶束在提高紫杉醇的治疗效果方面有巨大的潜力1、刖吕日前，化疗一种是用于治疗癌症的常规方法但是，传统应用于临床的抗癌化疗药 物一般都是非特异性且毒性较高，因此会产生许多副作用包括恶心、神经病变、肾功能 哀竭，这使得所用化疗药物的剂量搜到限制从而严重影响了化疗效率抗肿瘤药物的水 溶性、体内稳定性以及生物利用度等问题使得化疗方案也难以确定自纽装聚合物胶束 作为化疗药物的传递系统很有前景，它可以增强药物的水溶性，控制药物的释放速率, 降低药物毒副作用，延长药物在血液中的循环时间并口有特定靶向性此外，已经有一 系列胶束制剂类的抗癌药物进入了临床试验阶段具有牛物相容性的聚酯类已经广泛用作药物传递载体的材料，因为它们在体内经过 几天到几周的时间内就可逐渐降解而不需要加入额外的物质来去除它们聚酯类是用于 口组装的聚合物的疏水部分，是在水溶液中进行的口组装胶朿的核心而将会将疏水性药 物包封于其中FDA已批准可用丁•临床应用的常用的聚酯类有聚己酸内酯（PLC）、聚 乳酸（PLA）、聚乙醉酸（PGA）、聚丙交酯（PLGA）为了避免复合抗药性，当载药胶 束到达靶向肿瘤细胞之后需要将药物快速地禅放。

PH、温度刺激感应型胶束在特定PH、 温度条件下能够很快的禅放药物与传统的PH、温度刺激感应型胶束药物载体相比， 含有二硫键的生物可降解聚合物一类很有前景的载药材料其在细胞内环境内通过筑基 —二硫化物交换反应在还原皱感性断裂上显示出独特的优势，且其降解速率比传统聚合 物的酯水解速率更为迅速研究发现，虽然在体内低谷胱II•肽（GSH）沐度（ca.2-20 uM） 下二硫键是非常稳定的，但在高的谷光氨肽浓度（0.5-lOmM）还原性条件下二硫键可以 快速断裂（断裂时间范围山儿分俳到儿小时）作为接枝、嵌段节点和交联剂作用的可 还原聚合物中的二硫键常位于聚合物的主链以及支链上二硫键在还原聚合物的位置以 及分布会冇•接影响到自组装胶束的解组装、和应的药物释放行为胶束的亲水性微环境 也是一个影响二硫键断裂以及药物释放的重要因索此次工作中中，我们合成了一种以 具有牛物相容性的聚己酸内酯为支链的主链含有较多二硫键的新型还原敏感型聚合物 随后，対还原敬感型聚合物的组装行为进行了研究，包括为了使得胶束在水溶液中更加 稳定引入了可与还原墩感共聚物通过静电作用连接的亲水性共聚物（聚乙二醇）同吋， 通过调整DTT浓度模拟体内不同的还原条件以考察合成聚合物的还原应答行为、聚合 物组装形成的胶束、和典型抗肿瘤药物紫杉醇（PTX）的还原-感应性解放行为。

2、试剂与方法2.1试剂胱胺二盐酸盐、甲醇钠、平均分子量为1900的聚（乙二醇）甲基醸（AlfaAesar公 司）；DTT （产自 Aladdin）； DMF、琥珀酸肝、AEOL（乙醇胺）（产自 SinopharmChemical Reagent有限公司，DMF在使用前应用4A的分子筛干燥并进行再蒸锚）；MTT> £-己 内酯（e -CL） （Sigma-Aldrich公司，£・CL在使用之前要从氢化鈣中进行减压蒸绸）2.2N,N-二丙烯酰胺胱胺（CBA）的合成根据资料，CBA可有图.1所示的途径进行合成将1 Ommol的半胱氨酸二盐酸盐溶 于15mL3.5MNaoH与l（）ml氯仿的混合液中将溶液加热至5（）°C,保持此温度在15分 钟内不断搅拌的情况下，逐滴加入20mmol的丙烯酰氯趁热进行相分离，弃去水相 余下有机相冷却至室温后沉淀即为产物通过过滤、重结晶后的产物为口色晶体，产率 为 50% o2.3具有竣基端的聚（乙二醇）甲基瞇的合成具有竣基端的聚（乙二醇）「卩基瞇（mPEG-COOH ）可根据文献［31］中的方法制备 将平均分子量为1900的聚（乙二醇）甲基醯（mPEG-1900） （4.95g,2.5mmol）、甲苯置 于烧瓶中在140°C下共沸干燥除去水分。

相混合物中加入琥珀酸酉T （10g,lOmmol）, T 150°C搅拌反应5h反应完成待混合物冷却后，加入二氯甲烷和乙瞇进行沉淀在使川 CH2CL2/乙瞇沉淀两次纯化产物mPEG-COOHo2.4聚CBA-AEOL的介成聚CBA-AEOL (PCA)是由CBA与AEOL氨基通过Michael加成形成的聚合物 通常情况卜，向以棕色反应烧瓶中加入CBA (2.60g,10mmol)、AEOL (0.61 g, 1 Ommol), 用10ml体积比为10:1的甲醇/水溶液将其溶解在45°C. N2环境、机械搅拌的条件下， 并置于暗处反应10天进行聚合反应接着，向体系中加入过量的AEOL以消耗未反应 的丙烯酰胺，此反应持续两天反应全部完成后，加入lOOmL水稀释，并H加入3M的 HCL水溶液调节体系PH为3,用截留分子量为3500的分析膜进行聚合物的纯化经冷 冻干燥后，所得聚合物以盐酸盐的固体粉末形式保存2.5 PCA-g-PLC共聚物的合成PCA-g-PLC共聚物是在不同进料比例的下单体/引发剂体系(如：不同的摩尔比的 PCA、e-CL)中由Sn (Oct) 2催化发生的开环聚合反应合成而成。

典型的聚合反应过 程描述如下：向烧瓶中加入一定量的PCA和25ml的甲苯，通过在140°C熬发15mL的 甲苯进行共沸干燥除去水分在经过旋转蒸发除去过量的甲苯后，向烧瓶内加入DMF、 PCA,在室温下搅拌5min使其溶解随后，向反应烧瓶内加入含有一定量Sn (Oct) 2 催化剂和£・CL的DMF溶液，催化剂Sn( Oct)2的量一般固定取单体e -CL的().lmol%0 对溶液氮气通气鼓泡30min进行脱气后，在110°C,液氮保护下回流24小时液体冷却 后，将其倒入100ml乙離中进行沉淀(此过程反复两次)川冷甲醉洗涤沉淀并在40°C 下进行真空干燥，得到黄色粉末状的PCA-g-PCL02.6 PCA-g-PCL胶束的制备利用透析的方法在水溶液中制备PCA-g-PCL胶束：将20.0mg的PCA-g-PCL共聚 物粉末溶于2.0ml的THF中，轻微震荡lho缓慢加入1.0ml蒸饰水，搅拌条件下反应 2h,最后在室温下用截留分子量为3500的Spectra/Pro UM透析三天得到胶束粒子川陀作为荧光探针确定PCA-g-PCL胶束的临界胶束浓度(CMC)o分别向小瓶中加 入浓度范围为6.4 x 1B6 -0.1 mg/mL的PCA-g-PCL共聚物，陀的浓度固定在6.0 x 10-7mol/Lo将小瓶在室温下震荡24h后进行测定，用激发波长为390nm的F-4500荧光 分光光度计(口立-4500)记录其荧光光谱。

将在高、低浓度的1339/1337的强度比进行 外推得到的交叉点认为是CMCo2.7 PCA-g-PCL胶束的还原每攵感性在进行PCA-g-PCL胶束的还原皱感性研究2前，首先研究了 PCA-g-PCL共聚物在 lOmMDTT的还原降解行为固定DTT在PCA-g-PCL、DTT的THF溶液中浓度为10mM, 搅拌条件下向其中加入催化剂量的CH3Na无水甲醇溶液25°C下，反应6h后用 Agilent 1200凝胶渗透色谱(GPC)测量被降解的PCA-g-PCL共聚物的分子暈由于 PCA-g-PCL共聚物具有还原降解性，PCA-g-PCL胶束在加入还原剂的模拟还原条件下 (在pH为7.4的磷酸盐缓冲液中加入DTT)极有可能是不稳定的通常，向 0.5mIPCA-g-PCL胶束PBS (50mM, pH7.4)溶液中加DTT,控制DTT的加入量使其浓 度为10mMo将混合物放置在摇床上，保持3丁C、转速为80rpmo特定吋间间隔下，用 动态光散射(DLS)测定PCA-g-PCL胶束粒径的变化2.8聚离子mPEG PCA-g-PCL胶束的制备为了提高PCA-g-PCL胶束在水溶液中的稳定性，在组装过程中加入mPEG-COOH, mPEG-COOH通过静电作用与PCA-g-PCL共聚物共价结合。

首先，将PCA-g-PCL共聚 物、mPEG-COOH分别溶于THF中，轻微震荡混合lh随后将混合物逐滴加入水中， 空气吹扫除去THFo胶束根据mPEG-COOH、mPEG-COOH白勺摩尔比进行纠•装(比例在 括号内表示)，例如 mPEG@PCA-g-PCL(0.2:l),mPEG@PCA-g-PCL(0.5:l) and mPEG@PCA■斗PCL(1:1)通过DLS研究mPEG片段的引入对H组装胶在水溶液中稳主 性的彩响将mPEG@PCA-g-PCL胶束溶液贮存在37°C下以观察特定吋间间隔教书粒径 的变化载紫杉醇mPEG@PCA-g-PCL胶束的制备过程如F：首先，将PTX、PCA-g-PCL 共聚物、mPEG・COOH (摩尔比1:1)分别溶于THF,轻微震荡lh进行混合；将混合物 逐滴加入水中；通过透析除去THF以在水溶液中制备载药mPEG@PCA-g-PCL (1:1) 胶束测定得，载药mPEG@PCA・g-PCL (1:1)胶束的载药率和包封率分别为7.8%和 78.6%o2.9表征用Bruker Avmce TM500NMR波谱仪测定^HNNIR谱，样品浓度为35mg/ml在D2O 或CDCL3o用Hitachi F-4500激发波长为390nm荧光光谱，以吒作为荧光探针进行荧光 测定。

用配有示差折光检测器的Agilent 1200凝胶渗透色谱(GPC)于35°C下测量分子 量流动相为THF,流速l.Oml/min,进样体枳15L分子量已知范围较窄的聚苯乙烯 为分子量的校准标准组装胶朿的粒径及其粒径分布通过动态光散射仪(Zclasizcr NanoZS, Malvern Instruments, UK)测定使用透射电镜(TEM)观察组装胶朿的形态将涂有碳膜的铜 栅在一滴样品液中浸渍60秒，室温干燥35min,在JEM-10() C II显微镜(LIBRA 120, Carl Zeiss,德国)下观察2.10紫杉醇胶束在体外的释放特性X'j Opanasopit记载的方法稍作修改研究PTX从mPEG@PCA-g・PCL(l: 1)的释放特性 将载紫杉醇mPEG@PCAgPCL(l:l)胶束的磷酸盐缓冲液置于在三种不同坏境中浸没 30min的截留分子量为3500的透析管中，三种坏境分别为：不加DTT的PBS (pH7.4) 溶液；含 10mM DTT 的 PBS (pH7.4)溶液;含 40 mM DTT 的 PBS (pH7.4)溶液；温 度都为37 土 0.5°C。