葡萄糖测定-葡萄糖氧化酶法.doc

葡萄糖氧化酶法测定血清（浆）葡萄糖【原理】葡萄糖氧化酶 (glucose oxidase ， GOD) 利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧化氢过氧化物酶 (peroxidase ， POD) 在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解为水和氧， 并使色原性氧受体 4- 氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物，即 Trinder 反应红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比试剂】1．0.1mol/L磷酸盐缓冲液 (pH7.0)称取无水磷酸氢二钠8.67g 及无水磷酸二氢钾 5.3g溶于蒸馏水 800ml 中，用 1mol/L 氢氧化钠 (或 1mol/L 盐酸 )调 pH 至 7.0，用蒸馏水定容至 1L2．酶试剂 称取过氧化物酶 1 200U，葡萄糖氧化酶1 200U ， 4- 氨基安替比林 10mg ，叠氮钠 100mg ，溶于磷酸盐缓冲液 80ml中，用 1mol/L NaOH调pH 至 7.0 ，用磷酸盐缓冲液定容至100ml ，置 4 ℃保存，可稳定 3 个月3．酚溶液 称取重蒸馏酚 100mg 溶于蒸馏水 100ml中，用棕色瓶贮存。

4．酶酚混合试剂 酶试剂及酚溶液等量混合，4 ℃可以存放 1个月5．12mmol/L 苯甲酸溶液 溶解苯甲酸 1.4g于蒸馏水约 800ml中，加温助溶，冷却后加蒸馏水定容至 l L 6． 100mmol/L 葡萄糖标准贮存液 称取已干燥恒重的无水葡萄糖1.802g ，溶于 12mmol/L 苯甲酸溶液约 70ml 中，以 12mmol/L 苯甲酸溶液定容至 100ml 2h 以后方可使用7 ．5mmol/L 葡萄糖标准应用液 吸取葡萄糖标准贮存液 5.0ml 放于 100ml 容量瓶中，用 12mmol/L 苯甲酸溶液稀释至刻度，混匀操作步骤】1 ．自动分析法 按仪器说明书的要求进行测定2 ．手工操作法取试管 3 支，按下表操作葡萄糖氧化酶法测血糖操作步骤加入物 (ml)空白管标准管测定管血清－－0.02葡萄糖标准应用液－0.02－蒸馏水0.02－－酶酚混合试剂3.03.03.0混匀，置 37 ℃水浴中，保温 15min ，在波长 505nm 处比色，以空白管调零，读取标准管及测定管吸光度计算】【参考范围】 空腹血清葡萄糖为 3.89 ～ 6.11mmol/L 。

临床意义】1 ．生理性高血糖可见摄入高糖食物后，或情绪紧张肾上腺分泌增加时2 ．病理性高血糖(1) 糖尿病：病理性高血糖常见于胰岛素绝对或相对不足的糖尿病患者可编辑修改 -2) 内分泌腺功能障碍： 甲状腺功能亢进， 肾上腺皮质功能及髓质功能亢进 引起的各种对抗胰岛素的激素分泌过多也会出现高血糖 注意升高血糖的激素增多引起的高血糖，现已归入特异性糖尿病中3) 颅内压增高：颅内压增高刺激血糖中枢，如颅外伤、颅内出血、脑膜炎等4) 脱水引起的高血糖：如呕吐、腹泻和高热等也可使血糖轻度增高3 ．生理性低血糖 见于饥饿和剧烈运动4 ．病理性低血糖 ( 特发性功能性低血糖最多见，依次是药源性、肝源性、胰岛素瘤等 )(1) 胰岛 β 细胞增生或胰岛 β 细胞瘤等，使胰岛素分泌过多2) 对抗胰岛素的激素分泌不足， 如垂体前叶功能减退、 肾上腺皮质功能减退和甲状腺功能减退而使生长素、肾上腺皮质激素分泌减少3) 严重肝病患者， 由于肝脏储存糖原及糖异生等功能低下， 肝脏不能有效地调节血糖注意事项】1 ．葡萄糖氧化酶对 β - D 葡萄糖高度特异，溶液中的葡萄糖约 36% 为 α 型，64% 为 β 型。

葡萄糖的完全氧化需要 α 型到 β 型的变旋反应 国外某些商品葡萄糖氧化酶试剂盒含有葡萄糖变旋酶， 可加速这一反应， 但在终点法中， 延长孵育时间可达到完成自发变旋过程 新配制的葡萄糖标准液主要是 α 型，故须放置 2h 以上 ( 最好过夜 ) ，待变旋平衡后方可应用2 ．葡萄糖氧化酶法可直接测定脑脊液葡萄糖含量， 但不能直接测定尿液葡萄糖含量因为尿液中尿酸等干扰物质浓度过高， 可干扰过氧化物酶反应， 造成结果假性偏低3 ．测定标本以草酸钾－氟化钠为抗凝剂的血浆较好 取草酸钾 6g ，氟化钠 4g 加水溶解至 100ml 吸取 0.1ml 到试管内，在 80 ℃以下烤干使用， 可使 2 ～ 3ml 血液在 3 ～ 4 天内不凝固并抑制糖分解4 ．本法用血量甚微，操作中应直接加标本至试剂中，再吸试剂反复冲洗吸管，以保证结果可靠5 ．严重黄疸、溶血及乳糜样血清应先制备无蛋白血滤液，然后再进行测定评价】 线性范围至少可达 22.24mmol/L ，回收率 94% ～ 105% ，批内 CV 为 0.7% ～ 2.0% 批间 CV 为 2% 左右，日间 CV 为 2% ～ 3% 葡萄糖氧化酶法与己糖激酶法比较， 73 份标本葡萄糖氧化酶法均值为 8.31mmol/L ，已糖激酶法均值 8.21mmol/L ，相关系数为 0.9986 ，回归方程 y=1.0026x － 2.29 。

本法测定葡萄糖非常特异， 从原理反应式中可知第一步是特异反应， 第二步特异性较差误差往往发生在反应的第二步一些还原性物质如尿酸、维生素 C 、胆红素和谷胱甘肽等， 可与色原性物质竞争过氧化氢， 从而消耗反应过程中所产生的过氧化氢，产生竞争性抑制，使测定结果偏低然而，在本法的测定条件下，溶血标本血红蛋白的浓度达 10g/L ，黄疸标本胆红素浓度达342μ mol /L ，维生素 C 小于 30mg/L ，均不影响测定结果氟化钠浓度达2g/L不干扰测定结果标本中含尿素浓度达 46.7mmol/L ，尿酸浓度达 2.95mmol/L，肌酐浓度达 4.42mmol/L 半胱氨酸浓度达 3.30mmol/L ，甘油三酯浓度达 5.6mmol/L ，胆固醇 4.40 mmol/L ，对测定结果均无显著影响左旋多巴 100mg/L ，维生素 C 5mg/L 以上，谷胱甘肽 100mg/L 时，可引起负误差；半胱氨酸达 10mmol/L 时，产生相当 0.72mmol/L 葡萄糖的正误差可编辑修改 -欢迎您的下载，资料仅供参考！致力为企业和个人提供合同协议， 策划案计划书， 学习课件等等打造全网一站式需求-可编辑修改 -。