革兰阳性需氧杆菌.ppt

第十第十一一章章 G+需氧杆菌需氧杆菌一、微生物特性一、微生物特性 1.本菌为致病性细菌中最大的本菌为致病性细菌中最大的G+杆菌两端平截，无鞭毛，呈竹节状排列，芽胞位于端平截，无鞭毛，呈竹节状排列，芽胞位于菌体中央，有毒菌株有荚膜菌体中央，有毒菌株有荚膜 2.为需氧或兼性厌氧菌，生长条件不严格为需氧或兼性厌氧菌，生长条件不严格,最适温度为最适温度为30℃～～35℃，形成灰色、扁平干，形成灰色、扁平干燥、不溶血粗糙型菌落，边缘呈卷发状，使燥、不溶血粗糙型菌落，边缘呈卷发状，使明胶表面液化成漏斗状有毒菌株在血琼脂明胶表面液化成漏斗状有毒菌株在血琼脂平板上可产生荚膜，用接种针挑取时呈粘丝平板上可产生荚膜，用接种针挑取时呈粘丝状 3.细菌性抗原(1) 菌体多糖抗原耐热、耐腐败菌体多糖抗原耐热、耐腐败, 经长时间煮经长时间煮 沸仍可与相应免疫血清发生沉淀反应沸仍可与相应免疫血清发生沉淀反应 (Ascoli热沉淀反应热沉淀反应)抗原特异性不高抗原特异性不高,能能 与其他需氧性芽胞杆菌发生交叉反应与其他需氧性芽胞杆菌发生交叉反应,应应 用时应作综合分析。

用时应作综合分析 (2) 荚膜多肽抗原在体内有抗吞噬作用荚膜多肽抗原在体内有抗吞噬作用,称为称为 侵袭因子，有助于病菌在体内繁殖扩散侵袭因子，有助于病菌在体内繁殖扩散 和建立感染荚膜肿胀试验对鉴定本菌和建立感染荚膜肿胀试验对鉴定本菌 有一定意义有一定意义3) 芽胞抗原具有免疫原性和血清学诊断价芽胞抗原具有免疫原性和血清学诊断价 值4. 炭疽毒素 由保护性抗原、致死因子和水肿因由保护性抗原、致死因子和水肿因子三种蛋白质形成的外毒素复合物，子三种蛋白质形成的外毒素复合物，后两者单独不能发挥生物活性作用，后两者单独不能发挥生物活性作用，都必须与保护性抗原组合才能引起实都必须与保护性抗原组合才能引起实验动物的水肿致死验动物的水肿致死5. 抵抗力抵抗力 本菌芽胞的抵抗力很强，在干燥土本菌芽胞的抵抗力很强，在干燥土壤或皮毛中常温下可存活数十年壤或皮毛中常温下可存活数十年, 传传染性可持续数十年之久芽胞对碘及染性可持续数十年之久芽胞对碘及氧化剂较敏感氧化剂较敏感, 1：：2500碘液、碘液、0.5％％过氧乙酸过氧乙酸10min即杀死 1. 取病灶深部标本或痰和血液；肠炭疽取取病灶深部标本或痰和血液；肠炭疽取粪便或呕吐物；置粪便或呕吐物；置65℃水溶水溶30min，将非芽，将非芽胞菌杀死，保留芽胞活性再进行增菌和分离胞菌杀死，保留芽胞活性再进行增菌和分离培养。

培养 2. 直接镜检发现直接镜检发现G+大杆菌、两端平截、竹大杆菌、两端平截、竹节状排列形成长链，并有明显荚膜，可见芽节状排列形成长链，并有明显荚膜，可见芽胞，芽胞为卵圆形，位于菌体中央菌体不膨胞，芽胞为卵圆形，位于菌体中央菌体不膨大，可作初步报告大，可作初步报告 3. 分离培养分离培养 一般接种血琼脂平板，一般接种血琼脂平板，35℃、、18-24h后可观察到较大、灰白色、边缘不整后可观察到较大、灰白色、边缘不整齐和有轻微溶血的菌落齐和有轻微溶血的菌落 二、微生物检验二、微生物检验(1)(1)形态学特征：包括镜检形态和菌落形态形态学特征：包括镜检形态和菌落形态 （如上）2)(2)生化试验：能分解葡萄糖、麦芽糖、蔗生化试验：能分解葡萄糖、麦芽糖、蔗 糖有些菌株迟缓发酵甘油和水杨素，糖有些菌株迟缓发酵甘油和水杨素， 产酸不产气能水解淀粉不发酵鼠李产酸不产气能水解淀粉不发酵鼠李 糖、半乳糖等其他糖类能还原硝酸盐糖、半乳糖等其他糖类能还原硝酸盐 为亚硝酸盐为亚硝酸盐VPVP试验不定不产生吲哚试验不定不产生吲哚 和硫化氢，不利用枸橼酸盐和分解尿素。

和硫化氢，不利用枸橼酸盐和分解尿素 在牛乳中生长在牛乳中生长2-42-4天牛乳凝固后缓慢融天牛乳凝固后缓慢融 化卵磷脂酶弱阳性、触酶阳性卵磷脂酶弱阳性、触酶阳性鉴定 取用取用37 ℃ 37 ℃ 、、4-6h4-6h待检肉汤培养物，待检肉汤培养物，涂布于普通琼脂平板，将涂布于普通琼脂平板，将AP631AP631炭疽噬炭疽噬菌体菌体1 1滴，于平板中央划一直线滴，于平板中央划一直线, ,置置37℃37℃18h18h，出现噬菌斑或噬菌带者为阳性，，出现噬菌斑或噬菌带者为阳性，每份标本应作每份标本应作2-32-3个同样的试验，同时个同样的试验，同时滴种肉汤液作阴性对照滴种肉汤液作阴性对照 (3) 噬菌体裂解试验噬菌体裂解试验 将待检菌接种于含青霉素将待检菌接种于含青霉素0.05—0.5U/ml的培养基经的培养基经37℃培养培养 6 h后，炭疽杆菌可后，炭疽杆菌可发生形态变化，显微镜下见大而均匀的发生形态变化，显微镜下见大而均匀的圆球状菌体呈成串样排列，类炭疽杆菌圆球状菌体呈成串样排列，类炭疽杆菌无此现象无此现象 (4) 串珠试验串珠试验 将待检菌分别接种于青霉素将待检菌分别接种于青霉素5、、10、、100U／／ml的普通琼脂平板，的普通琼脂平板，37 ℃培培养养24h，炭疽芽胞杆菌一般在含，炭疽芽胞杆菌一般在含5U／／ml的青霉素平板上仍能生长，在含的青霉素平板上仍能生长，在含10、、100U／／ml青霉素的平板上受到青霉素的平板上受到抑制而不生长。

抑制而不生长 (5) 青霉素抑制试验青霉素抑制试验 将待检菌新鲜肉汤培养物将待检菌新鲜肉汤培养物0.1ml滴于预滴于预温的兔血琼脂平板上，用温的兔血琼脂平板上，用L形玻棒均匀涂形玻棒均匀涂布，干后用含青霉素布，干后用含青霉素1 U／片纸片贴于平／片纸片贴于平板，板，37℃1—2h，低倍镜下观察，可见纸，低倍镜下观察，可见纸片周围有一无菌生长的抑菌环，其外周青片周围有一无菌生长的抑菌环，其外周青霉素浓度低霉素浓度低,菌体细胞壁受抑而成为串珠菌体细胞壁受抑而成为串珠平板继续平板继续37℃孵育孵育8-12h, 测量抑菌环直径测量抑菌环直径6) 串珠青霉素抑制联合试验串珠青霉素抑制联合试验（7）重碳酸盐生长毒力试验 将待检菌接种于含将待检菌接种于含O O．．5 5％％NaHCO3NaHCO3和和1010％马血清的琼脂平板上，置％马血清的琼脂平板上，置1010％％CO2CO2环境环境37℃24-48h37℃24-48h，有毒株形成荚，有毒株形成荚膜，菌落呈粘液型，无毒株不形成荚膜，菌落呈粘液型，无毒株不形成荚膜，呈粗糙型菌落膜，呈粗糙型菌落 炭疽芽胞杆菌是惟一具有致病力，致病炭疽芽胞杆菌是惟一具有致病力，致病物质为炭疽毒素，故对该毒素的检测显得物质为炭疽毒素，故对该毒素的检测显得十分重要十分重要 取纯培养接种于肉汤培养液取纯培养接种于肉汤培养液37℃37℃24h,24h,吸吸取取0.1m10.1m1接接种种小小鼠鼠皮皮下下, ,小小鼠鼠于于72—72—96h96h发病并死亡发病并死亡 接种部位呈胶样水肿，肝脾肿接种部位呈胶样水肿，肝脾肿大出血，血液黑色且不凝固：取心血、肝脾大出血，血液黑色且不凝固：取心血、肝脾涂片染色镜检分离培养，可检出炭疽杆菌。

涂片染色镜检分离培养，可检出炭疽杆菌8) 毒素动物试验毒素动物试验(9)植物凝集试验 炭疽杆菌菌体多糖是某些植物凝集炭疽杆菌菌体多糖是某些植物凝集素受体，用凝集素试验检测炭疽杆菌素受体，用凝集素试验检测炭疽杆菌常用的方法有荧光标记试验和酶联凝常用的方法有荧光标记试验和酶联凝集素吸附试验本试验可与其他类炭集素吸附试验本试验可与其他类炭疽芽胞杆菌相鉴别疽芽胞杆菌相鉴别 (五) 药物敏感性试验 本菌对磺胺类、青霉素、链霉本菌对磺胺类、青霉素、链霉素、四环素、红霉素、氯霉素和素、四环素、红霉素、氯霉素和环丙沙星均敏感，大多能抑制芽环丙沙星均敏感，大多能抑制芽胞和繁殖体的生长胞和繁殖体的生长 第二节第二节 蜡样芽胞杆菌蜡样芽胞杆菌 属属于于需需氧氧芽芽胞胞杆杆菌菌属属中中的的一一种种革革兰兰阳阳性性杆杆菌菌，，因因在在普普通通营营养养琼琼脂脂平平板板上上能能形形成成芽芽胞胞，，其其菌菌落落表表面面粗粗糙糙似似白白蜡蜡状状，，故故名名，，简简称称蜡蜡样样杆杆菌菌广广泛泛分分布布于于水水、、土土壤壤、、尘尘埃埃、、淀淀粉粉制制品品、、乳乳及及乳乳制制品品等等食食品品，，并并可可在在其其中中生生长长繁繁殖殖，，引引起起食食物物中中毒毒。

近近年来国内也有引起菌血症的报道年来国内也有引起菌血症的报道  一、临床意义一、临床意义 蜡蜡样样芽芽胞胞杆杆菌菌引引起起的的食食物物中中毒毒有有腹腹泻泻型型和和呕呕吐吐型型两两型型, ,由由不不耐耐热热的的和和耐耐热热的的肠肠毒毒素素引引起起，，以以夏夏秋秋季季最最为为多多见见，，中中毒毒食食物物大大多多无无腐腐败败变变质质, ,表表现现为为完完全全正正常的感官性状，这点应引起注意常的感官性状，这点应引起注意二、微生物特性1. G+大杆菌，多数呈链状排列形成椭圆大杆菌，多数呈链状排列形成椭圆 形芽胞，位于菌体中心或次极端，不小形芽胞，位于菌体中心或次极端，不小 于菌体，引起食物中毒的菌株多为周毛菌于菌体，引起食物中毒的菌株多为周毛菌, 有动力，不形成荚膜有动力，不形成荚膜2. 为需氧或兼性厌氧，营养要求不高，在普为需氧或兼性厌氧，营养要求不高，在普 通平板上通平板上35℃生长良好菌落较大，表面生长良好菌落较大，表面 粗糙似白蜡状，粗糙似白蜡状， 3. 能分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、能分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、 水杨素、果糖等能胨化牛乳水杨素、果糖等。

能胨化牛乳, 液化明胶液化明胶VP试验阳性，卵磷试验阳性，卵磷 脂酶阳性脂酶阳性4. 抵抗力强抵抗力强, 能耐受能耐受100℃30min1. 采取可疑食物、粪便和呕吐物进行采取可疑食物、粪便和呕吐物进行 检验，必须作活菌计数暴露空气检验，必须作活菌计数暴露空气 中的食品都受本菌污染中的食品都受本菌污染2. 标本直接涂片革兰染色镜检，其形标本直接涂片革兰染色镜检，其形 态待征为态待征为G+大杆菌、呈链状排列、大杆菌、呈链状排列、 芽胞圆形位于菌体中央或次极端，芽胞圆形位于菌体中央或次极端， 不大于菌体不大于菌体三、微生物检验三、微生物检验 将菌稀释液将菌稀释液0．．1ml注入空的无菌平皿，注入空的无菌平皿，将溶化冷至将溶化冷至45℃营养琼脂适量倾人并立即营养琼脂适量倾人并立即混均，冷凝后置混均，冷凝后置35℃培养培养24—48h，计数，计数产生蜡样光泽菌落乘以稀释倍数，即为每产生蜡样光泽菌落乘以稀释倍数，即为每毫升样品所含活菌数认为毫升样品所含活菌数认为105个／个／g或／或／ml时，即有发生食物中毒的可能时，即有发生食物中毒的可能。

3．活菌计数．活菌计数4. 分离培养分离培养 为需氧或兼性厌氧，营养为需氧或兼性厌氧，营养 要求不高，在普通营养琼脂平板上即要求不高，在普通营养琼脂平板上即 能生长能生长,最适温度最适温度35℃,最适最适pH7.0-7.4, 菌落表面有蜡光似毛玻璃状蜡样菌落菌落表面有蜡光似毛玻璃状蜡样菌落, 进行生化反应鉴定必要时做血清学鉴进行生化反应鉴定必要时做血清学鉴 定和噬菌体分型定和噬菌体分型  对氯霉素、红霉素和庆大对氯霉素、红霉素和庆大霉素敏感，对青霉素、磺胺类霉素敏感，对青霉素、磺胺类和呋喃类耐药和呋喃类耐药四、药物敏感性试验第二节第二节 李斯特菌属李斯特菌属 包括产单核细胞、伊氏、无害、包括产单核细胞、伊氏、无害、格氏、斯氏、威氏李斯特菌等，只格氏、斯氏、威氏李斯特菌等，只有产单核细胞李斯特菌对人和动物有产单核细胞李斯特菌对人和动物致病 广泛分布于自然界，常伴随广泛分布于自然界，常伴随EBEB病毒病毒引起传染性单核细胞增多症，也可引引起传染性单核细胞增多症，也可引起脑膜炎，菌血症等污染奶制品引起脑膜炎，菌血症等。

污染奶制品引起食物中毒也可感染新生儿致病起食物中毒也可感染新生儿致病物质是溶血素和菌体表面成分机体物质是溶血素和菌体表面成分机体上靠细胞免疫清除李斯特菌上靠细胞免疫清除李斯特菌一、临床意义一、临床意义二、微生物特性1．．为G+短小杆菌，成双排列偶尔可见双球状，有动力，不产生芽胞，在含血清的葡萄糖蛋白胨水中能形成粘多糖荚膜2．为兼性厌氧菌，营养要求不高，在含有血液、血清、腹水等培养基上生长更好最适生长温度为30℃～37℃，因在4℃能生长故可进行冷增菌在血琼脂平板上于35℃经18-24h培养，形成狭窄的β-溶血环，灰白色菌落 3．生化反应可发酵多种糖类，如葡萄糖、果糖、蕈糖、麦芽糖和水杨素，产酸不产气，甲基红和V-P反应阳性，触酶阳性，可使石蕊牛乳缓慢产酸并使其脱色，能水解精氨酸产氨： 不还原硝酸盐，不形成吲哚，不液化明胶和凝固血清，不分解尿素，有时可产生硫化氢25℃有动力，37℃无动力或缓慢4．抗原性分为4个血清型，1型主要感染啮齿动物，各型对人类均可致病，但以1a和lb最为多见，本菌与葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌及大肠埃希菌等具有共同抗原、 5．抵抗力 在土壤、粪便、饲料中能长期存活。

耐盐耐碱耐酸对热敏感，对—般消毒剂敏感，70％的乙醇5min即可杀 死本菌 三、微生物检验1．采集患者血液，脑脊液，分泌物或脓液，咽喉拭子；病死畜、禽病变组织等标本2．标本直接检查 为G+小杆菌，多数菌体一端膨大呈两极着色，易误认为双球菌3．分离培养 将标本置4℃中冷增菌后再行分离，在血平板上形成较小圆形、光滑而有狭窄β-溶血环的菌落4.鉴定当遇到25℃培养有动力的杆菌，而不符合G-杆菌鉴定时，应考虑到李斯特菌本菌因培养条件而呈链状，37℃培养动力阴性，CAMP试验阳性，常误判为B群链球菌,产单核细胞李斯特菌触酶试验为阳性本菌具有耐碱耐盐的特点，易误判为粪肠球菌，粪肠球菌为触酶试验阴性，而产单核细胞李斯特菌为阳性5.药物敏感性试验 本菌对多种抗生素敏感，以氨苄青霉素为首选，尚有青霉素、链霉素、四环素、氯霉素和红霉素等敏感，对磺胺、杆菌肽和多粘菌素耐药第三节丹毒丝菌属第三节丹毒丝菌属1．．包括红斑丹毒丝菌、产单核细胞丹毒丝菌、扁桃体丹毒丝菌，其中红斑丹毒担菌是丹毒丝菌属中的代表菌种2．红斑丹毒牡菌为红丹毒丝菌病的病原，主要发生在鱼类、家畜、家禽和兔类，人类也感染发病，接触动物或其产品经皮肤损伤而引起类丹毒。

以局部感染为主，继而发展成淋巴管炎，可转变成关节炎也可引起急性败血症或心内膜炎 3．细菌学检查是诊断该病的重要依据G+杆菌，厌氧或微需氧菌初次分离要在厌氧环境中培养，在血琼脂平板菌落周围有绿色溶血环，触酶及氧化酶反应均阴性液化明胶，形成硫化氢 4．本菌对湿热及化学消毒剂很敏感对青霉素、头孢菌素、红霉素和四环素等均敏感第四节阴道加特纳菌第四节阴道加特纳菌加特纳菌属仅有一个菌种阴道加特纳菌DNA中G+Cmol％为42～44在阴道内过度生长，造成阴道正常菌群微生态平衡失调，而引起非特异细菌性阴道病 可导致妇产科多种严重并发症如子宫全切术后感染、绒毛膜炎等本菌还能引起新生儿败血症和软组织感染正常妇女阴道内也能检出本菌，因此，一般情况下，不作阴道加特纳菌分离 　　 1 1．．革革兰兰阳阳性性无无芽芽胞胞、、无无荚荚膜膜和和鞭鞭毛毛，，具具多形性2 2．．营营养养要要求求较较高高，，兼兼性性厌厌氧氧，，在在25℃25℃～～41℃41℃中中生生长长，，在在5 5％％人人血血琼琼脂脂上上，，置置3 3％％～～5 5％％CO2 CO2 35℃35℃培养培养48h48h，可形成针尖大小的菌落。

可形成针尖大小的菌落3 3．．pHpH测定测定 若若pH﹥4pH﹥4．．5 5为可疑4 4．．胺胺试试验验 将将lOOglOOg／／L L KOH KOH l l～～2 2滴滴滴滴在在待待检检物上，若发出鱼腥样胺臭味即胺试验阳性物上，若发出鱼腥样胺臭味即胺试验阳性所有菌株对氨苄青霉素、羧苄青霉素、苯唑青霉素、青霉素、万古霉素和甲硝唑敏感；对萘啶酸、新霉素、粘菌素和磺胺嘧啶耐药。