第五章酶的固定化ppt课件.ppt

Chapter 5 The immobile of Enzyme，，Cell and Protoplast 酶、细胞、原生质体固定化酶、细胞、原生质体固定化游离酶的缺陷游离酶的缺陷Ø酶的稳定性差，易受外界要素影响而失活酶的稳定性差，易受外界要素影响而失活Ø酶不易回收利用〔酶的一次性运用〕酶不易回收利用〔酶的一次性运用〕Ø产物不易分纯，且难延续化消费产物不易分纯，且难延续化消费Ø酶的催化效率不够高酶的催化效率不够高Contents of chapter 5Ø概述概述Ø第一节第一节 酶固定化酶固定化Ø第二节第二节 细胞固定化细胞固定化Ø第三节第三节 原生质体固定化原生质体固定化 2 . 什么是固定化酶？什么是固定化酶？水溶性酶水溶性酶水不溶性水不溶性载体载体水溶性酶水溶性酶活化基团固定化酶酶的固定化固定化酶概念固定化酶概念Ø指固定在一定载体上并在一定的空间范围内进展催指固定在一定载体上并在一定的空间范围内进展催化反响的酶化反响的酶Ø经过吸附、偶联、交联、包埋等物理或化学的方法经过吸附、偶联、交联、包埋等物理或化学的方法制备成的具有催化活性的水不溶性酶制备成的具有催化活性的水不溶性酶。

2. 固定化酶的制备方法固定化酶的制备方法吸附法吸附法离子键结合法离子键结合法共价键结合法共价键结合法交联法交联法凝胶包埋法凝胶包埋法半透膜包埋法半透膜包埋法固定化固定化方法方法非共价非共价结合法结合法化学化学结合法结合法包埋法包埋法热处置法热处置法吸附法吸附法Ø1.  吸附作用力吸附作用力Ø2. 固体吸附剂包括活性炭、氧化铝、硅藻土、固体吸附剂包括活性炭、氧化铝、硅藻土、多孔陶瓷、多孔玻璃、硅胶、羟基磷灰石多孔陶瓷、多孔玻璃、硅胶、羟基磷灰石Ø3. 优缺陷优缺陷〔〔3〕包埋法〕包埋法Ø将酶或含酶菌体包埋在各种多孔载体中，使酶固定将酶或含酶菌体包埋在各种多孔载体中，使酶固定化的方法称为包埋法化的方法称为包埋法Ø只适宜作用于小分子底物和产物的酶只适宜作用于小分子底物和产物的酶凝胶包埋法〔网格型〕凝胶包埋法〔网格型〕半透膜包埋法〔微囊型〕半透膜包埋法〔微囊型〕包埋法包埋法1〕凝胶包埋法〔网格型〕〕凝胶包埋法〔网格型〕Ø将酶或含酶菌体包埋在高分子凝胶细微网格中，制将酶或含酶菌体包埋在高分子凝胶细微网格中，制成一定外形的固定化酶，称为网格型包埋法也称成一定外形的固定化酶，称为网格型包埋法。

也称为凝胶包埋法为凝胶包埋法Ø首先被采用的网格包埋法是：首先被采用的网格包埋法是：Ø  固定化胰蛋白酶固定化胰蛋白酶Ø  木瓜蛋白酶木瓜蛋白酶Ø   －淀粉酶－淀粉酶ØEnzyme+N, N-甲叉双丙稀酰胺甲叉双丙稀酰胺, 丙稀酰胺丙稀酰胺Ø引发剂－－引发剂－－inactiation2〕半透膜包埋法〔微囊型〕〕半透膜包埋法〔微囊型〕Ø将酶或含酶细胞包埋在高分子半透膜中的固定化方将酶或含酶细胞包埋在高分子半透膜中的固定化方法界面聚合法界面聚合法Ø是用化学手段制备微囊的方法利用亲水性单体和是用化学手段制备微囊的方法利用亲水性单体和疏水性单体在油水界面上发生聚合反响构成聚合体疏水性单体在油水界面上发生聚合反响构成聚合体而将酶包裹起来而将酶包裹起来〔〔3〕结合法〕结合法1〕共价结合法〕共价结合法   ☆☆      经过共价键将酶与载体结合的方法经过共价键将酶与载体结合的方法①① 结合方法结合方法  ⅰ.将载体有关基团活化，然后将酶有关基因发生偶联将载体有关基团活化，然后将酶有关基因发生偶联反响；反响；  ②② 与载体共价结合的酶的功能基团与载体共价结合的酶的功能基团  ε-氨基，氨基，α-氨基，氨基，α,β或或γ位的羧基、巯基、羟基、咪位的羧基、巯基、羟基、咪唑基、酚基等。

唑基、酚基等③③载体载体天然有机载体〔多糖、蛋白质、细胞等〕天然有机载体〔多糖、蛋白质、细胞等〕无机物〔玻璃、陶瓷等〕无机物〔玻璃、陶瓷等〕合成聚合物〔聚酯、聚胺、尼龙等〕合成聚合物〔聚酯、聚胺、尼龙等〕④④优缺陷优缺陷ⅰ.优点：酶与载体结合结实，普通不会因底物浓度高或优点：酶与载体结合结实，普通不会因底物浓度高或存在盐类等缘由而随便零落存在盐类等缘由而随便零落 ⅱ.缺陷：反响条件苛刻，操作条件复杂；缺陷：反响条件苛刻，操作条件复杂；                  酶蛋白高级构造变化，破坏活性中心，活力酶蛋白高级构造变化，破坏活性中心，活力降低⑤⑤载体活化方法载体活化方法ØA．重氮法．重氮法ØB．叠氮法．叠氮法ØC．烷基化反响法．烷基化反响法ØD．溴化氰法．溴化氰法A．重氮法．重氮法Ø反响表示式反响表示式 NH2NaNO2/HClN2+Cl-酶-TyrN=NOHCH2酶重氮盐衍生物载体固定化酶A．重氮法．重氮法Ø将含有苯氨基的不溶性载体与亚硝酸反响，生成重将含有苯氨基的不溶性载体与亚硝酸反响，生成重氮盐衍生物，使载体引进活泼的重氮基团氮盐衍生物，使载体引进活泼的重氮基团Ø载体活化后，活泼的重氮基团可与酶分子中的酚基载体活化后，活泼的重氮基团可与酶分子中的酚基或咪唑基发生偶联反响而制得固定化酶。

或咪唑基发生偶联反响而制得固定化酶B. 叠氮法叠氮法Ø反响表示式反响表示式OCH2COOHOCH2COOCH2CH3OH/HClOCH2CONHNH2NH2NH2〔肼〕OCH2CON3NaNO2/HClOCH2CONH-酶酶酶-NH2B. 叠氮法叠氮法Ø对含有羧基的载体，与肼基作用生成含有酰肼基团对含有羧基的载体，与肼基作用生成含有酰肼基团的载体，再与亚硝酸活化，生成叠氮化合物最后的载体，再与亚硝酸活化，生成叠氮化合物最后与酶偶联与酶偶联 C．烷基化反响法．烷基化反响法Ø含羟基的载体可用三氯三嗪等多卤代物进展活化，构含羟基的载体可用三氯三嗪等多卤代物进展活化，构成含有卤素基团的活化载体成含有卤素基团的活化载体Ø卤素基团可与酶分子上的氨基、巯基、羟基等发生烷卤素基团可与酶分子上的氨基、巯基、羟基等发生烷基化反响，制备成固定化酶基化反响，制备成固定化酶OHO酶OD．溴化氰法．溴化氰法Ø本方法主要用溴化氰〔本方法主要用溴化氰〔CNBr〕活化多糖类〔含有〕活化多糖类〔含有羟基〕物质〔如纤维素、葡聚糖、琼脂糖等，其中羟基〕物质〔如纤维素、葡聚糖、琼脂糖等，其中以琼脂糖为载体的占多数以琼脂糖为载体的占多数<大孔网状构造大孔网状构造>〕，生成〕，生成亚氨基碳酸衍生物。

亚氨基碳酸衍生物D ．溴化氰法．溴化氰法Ø亚氨基碳酸基团在微碱性条件下，可与酶分子上的亚氨基碳酸基团在微碱性条件下，可与酶分子上的氨基反响，制成固定化酶氨基反响，制成固定化酶D ．溴化氰法．溴化氰法Ø用溴化氰法活化琼脂糖制备得到的固定化酶目前运用溴化氰法活化琼脂糖制备得到的固定化酶目前运用很广，特别用作亲和层析，有着良好的性能用很广，特别用作亲和层析，有着良好的性能共价结合法中载体的活化方法共价结合法中载体的活化方法Ø重氮法重氮法Ø叠氮法叠氮法Ø烷基化法烷基化法Ø溴化氰法溴化氰法——含有苯氨基〔亚硝酸〕含有苯氨基〔亚硝酸〕——含有酰肼基含有酰肼基/羧基〔亚硝酸〕羧基〔亚硝酸〕——含有羟基〔三氯三嗪等多卤代物〕含有羟基〔三氯三嗪等多卤代物〕——含有羟基〔溴化氰活化〕含有羟基〔溴化氰活化〕2〕交联法〕交联法Ø借助双功能试剂使酶分子之间发生交联作用，制成借助双功能试剂使酶分子之间发生交联作用，制成网状构造的固定化酶的方法称为交联法也可用于网状构造的固定化酶的方法称为交联法也可用于含酶菌体或菌体碎片的固定化含酶菌体或菌体碎片的固定化Ø常用试剂：戊二醛、异氰酸酯、常用试剂：戊二醛、异氰酸酯、N，，N’乙烯马来亚乙烯马来亚胺、双重氮联苯胺等。

运用最广泛的是戊二醛，它胺、双重氮联苯胺等运用最广泛的是戊二醛，它两个醛基都可以与酶或蛋白质的游离氨基构成席夫两个醛基都可以与酶或蛋白质的游离氨基构成席夫碱〔碱〔shiff〕Ø第一篇报道是：戊二醛交联羧肽酶得到一种分子间第一篇报道是：戊二醛交联羧肽酶得到一种分子间交联的固定化酶交联的固定化酶〔〔4〕热处置法〕热处置法Ø将含酶细胞在一定温度下加热处置一段时间，使酶将含酶细胞在一定温度下加热处置一段时间，使酶稳定在菌体内，而制备得到固定化菌体稳定在菌体内，而制备得到固定化菌体Ø热处置法只适用于热稳定性较好的酶的固定化，在热处置法只适用于热稳定性较好的酶的固定化，在热处置时，要严厉控制好加热温度和时间，以免引热处置时，要严厉控制好加热温度和时间，以免引起酶的变性失活起酶的变性失活步步骤step总体体积Volume(ml)总活力活力Total activity(u)总蛋白蛋白Total protein(mg)比活力比活力Specific activity(u/mg)纯化倍数化倍数Purification(fold)收收 率率Yield(%)粗粗酶酶1040460070168.1乙醇沉淀乙醇沉淀9014257410.9DEAE-Sepharose柱柱层析析11466292.0HiTrap-Q柱柱层析析19422180.3下表是某酶的纯化总结表，试计算比活力，回收率及纯化倍数。

下表是某酶的纯化总结表，试计算比活力，回收率及纯化倍数2736.913080.223314.5140726.714.88.551.410030109实验实验   木瓜蛋白酶的固定化木瓜蛋白酶的固定化 Ø实验原理：实验原理：Ø载体：尼龙载体：尼龙Ø固定化方法：共价结合法固定化方法：共价结合法Ø尼龙长链中的酰胺键经尼龙长链中的酰胺键经HCl水解后，产生游离的水解后，产生游离的-NH基，在一定条件下与双功能试剂戊二醛中的一基，在一定条件下与双功能试剂戊二醛中的一个个-CHO基缩合，戊二醛中的另一个基缩合，戊二醛中的另一个-CHO基那么基那么与酶中的游离氨基缩合，构成尼龙与酶中的游离氨基缩合，构成尼龙(载体载体)-戊二醛戊二醛(交联剂交联剂)-酶，即尼龙固定化酶酶，即尼龙固定化酶实验实验   木瓜蛋白酶的固定化木瓜蛋白酶的固定化 Ø酶的固定化步骤：酶的固定化步骤：Ø〔〔1〕每组取〕每组取5块尼龙布洗净、晾干，浸入含块尼龙布洗净、晾干，浸入含18.6% CaCl2溶液和溶液和18.6%水的甲醇溶液中，在室温下保水的甲醇溶液中，在室温下保温温10s左右，并悄然搅拌至尼龙布发粘取出后用左右，并悄然搅拌至尼龙布发粘。

取出后用水冲去污物，用吸水纸吸干水冲去污物，用吸水纸吸干Ø〔〔2〕将尼龙布用〕将尼龙布用3.65mol/L HCl溶液在室温下水解溶液在室温下水解45min，用水洗至，用水洗至pH值中性Ø〔〔3〕将尼龙布用〕将尼龙布用5%戊二醛溶液在室温下浸泡偶联戊二醛溶液在室温下浸泡偶联20min实验实验   木瓜蛋白酶的固定化木瓜蛋白酶的固定化 Ø酶的固定化步骤：酶的固定化步骤：Ø〔〔4〕取出尼龙布，用〕取出尼龙布，用0.1mol/L 磷酸缓冲液〔磷酸缓冲液〔pH值值7.8〕反复洗涤，洗去多余的戊二醛，吸干之后，〕反复洗涤，洗去多余的戊二醛，吸干之后，立刻用酶液〔立刻用酶液〔0.5～～1mg/mL〕在〕在4℃下固定下固定3.5h〔〔酶液用量每块尼龙布不宜超越酶液用量每块尼龙布不宜超越0.8mL〕Ø〔〔5〕从酶液中取出尼龙布〔保管剩余酶液作测定〕从酶液中取出尼龙布〔保管剩余酶液作测定用〕，用用〕，用0.5mol/L NaCl溶液〔用溶液〔用0.1mol/L磷酸缓冲磷酸缓冲液〔液〔pH值值7.2〕配制〕，洗去多余的酶蛋白，即为〕配制〕，洗去多余的酶蛋白，即为尼龙固定化酶尼龙固定化酶实验实验   木瓜蛋白酶的固定化木瓜蛋白酶的固定化 Ø酶活力测定：酶活力测定：Ø〔〔1〕溶液酶活力测定：取〕溶液酶活力测定：取0.2mL酶液，参与酶液，参与1.8mL激活剂，于激活剂，于37℃下预热下预热10min，参与，参与37℃预热的预热的0.5%酪蛋白溶液酪蛋白溶液1mL，准确反响，准确反响10min，然后参与，然后参与10%三氯乙酸溶液三氯乙酸溶液2.0mL终止酶反响。

对看管先参终止酶反响对看管先参与与10%三氯乙酸溶液，后加酪蛋白溶液，其他与测三氯乙酸溶液，后加酪蛋白溶液，其他与测定管一样，以定管一样，以4000r/min的转速离心的转速离心5min或过滤，或过滤，取其上清液于波长取其上清液于波长280nm处测定消光值处测定消光值Ø           在上述条件下，每在上述条件下，每10min添加添加0.001个消光值个消光值为为1个酶单位个酶单位(U)(以下同以下同) 实验实验   木瓜蛋白酶的固定化木瓜蛋白酶的固定化 Ø酶活力测定：酶活力测定：Ø〔〔2〕残留酶活力测定：方法同溶液酶活力测定〕残留酶活力测定：方法同溶液酶活力测定Ø〔〔3〕固定化酶活力测定：取一块尼龙布固定化酶，〕固定化酶活力测定：取一块尼龙布固定化酶，参与参与2.0mL激活剂，其他步骤与溶液酶测定一样激活剂，其他步骤与溶液酶测定一样实验实验   木瓜蛋白酶的固定化木瓜蛋白酶的固定化 Ø结果计算：结果计算：Ø                     固定化酶总活力固定化酶总活力Ø活力回收活力回收= ————————×100%Ø                        溶液酶总活力溶液酶总活力 Ø                              固定化酶总活力数固定化酶总活力数Ø相对活力相对活力= ——————————————  ×100%Ø                     溶液酶总活力数溶液酶总活力数-残留酶活力数残留酶活力数3. 固定化酶的性质固定化酶的性质〔〔1〕固定化后酶活力的变化〕固定化后酶活力的变化——酶活力降低，反响酶活力降低，反响速度下降速度下降缘由：缘由：1〕构象改动：酶分子在固定化过程中，空间构象会〕构象改动：酶分子在固定化过程中，空间构象会有所变化，甚至影响了活性中心的氨基酸。

有所变化，甚至影响了活性中心的氨基酸2〕空间位阻：固定化后，酶分子空间自在度遭到限〕空间位阻：固定化后，酶分子空间自在度遭到限制〔空间位阻〕，会直接影响到活性中心对底物的制〔空间位阻〕，会直接影响到活性中心对底物的定位作用定位作用3〕内分散作用：内分散阻力使底物分子于活性中心〕内分散作用：内分散阻力使底物分子于活性中心的接近受阻的接近受阻4〕立体妨碍：包埋时酶被高分子物质包埋，大分子〕立体妨碍：包埋时酶被高分子物质包埋，大分子不能透过膜与酶接近不能透过膜与酶接近〔〔2〕固定化酶的稳定性〕固定化酶的稳定性——大多提高大多提高1〕稳定性大多提高〕稳定性大多提高热稳定性大多提高，有些反而下降热稳定性大多提高，有些反而下降对各种有机试剂及酶抑制剂的稳定性提高对各种有机试剂及酶抑制剂的稳定性提高对不同对不同pH〔酸度〕稳定性，对分解酶的稳定性、储〔酸度〕稳定性，对分解酶的稳定性、储存稳定性和操作稳定性提高存稳定性和操作稳定性提高2〕稳定性提高的缘由〕稳定性提高的缘由固定化后，酶分子与载体多点衔接，可防止酶分子伸固定化后，酶分子与载体多点衔接，可防止酶分子伸展变形；展变形；酶活力的缓慢释放；酶活力的缓慢释放；抑制自降解，提高了酶稳定性。

抑制自降解，提高了酶稳定性青霉素酰化酶：固定化酶在青霉素酰化酶：固定化酶在pH5.5~10.3稳定，稳定，游离酶仅在游离酶仅在pH7.0~9.0稳定〔〔3〕固定化酶的最适温度变化〕固定化酶的最适温度变化——能够提高能够提高Ø固定化酶的最适作用温度普通与游离酶差不多，活固定化酶的最适作用温度普通与游离酶差不多，活化能变化也不大，有些会发生变化；化能变化也不大，有些会发生变化；Ø由于固定化，酶的热稳定性提高，所以最适温度也由于固定化，酶的热稳定性提高，所以最适温度也随之提高；随之提高；Ø固定化酶的最适作用温度能够会遭到固定化方法和固定化酶的最适作用温度能够会遭到固定化方法和固定化载体的影响固定化载体的影响〔〔4〕固定化酶的最适〕固定化酶的最适pH——发生改动发生改动Ø酶经固定化后，对底物作用的最适酶经固定化后，对底物作用的最适pH和酶活力和酶活力-pH曲线经常发生偏移；曲线经常发生偏移；Ø2〕载体性质对最适〕载体性质对最适pH的影响；的影响；Ø普通用带负电荷载体〔阴离子聚合物〕制备的固定普通用带负电荷载体〔阴离子聚合物〕制备的固定化酶，其最适化酶，其最适pH↑Ø普通用带正电荷载体〔阳离子聚合物〕制备的固定普通用带正电荷载体〔阳离子聚合物〕制备的固定化酶，其最适化酶，其最适pH↓。

1〕〕pH对酶活性的影响：对酶活性的影响：改动酶的空间构象改动酶的空间构象影响酶的催化基团的解离影响酶的催化基团的解离影响酶的结合基团的解离影响酶的结合基团的解离改动底物的解离形状，酶与底物不能结合或结合后改动底物的解离形状，酶与底物不能结合或结合后不能生成产物不能生成产物3〕产物性质对最适〕产物性质对最适pH的影响；的影响；产物酸性，其最适产物酸性，其最适pH↑产物碱性，其最适产物碱性，其最适pH↓产物中性，其最适产物中性，其最适pH不变〔〔5〕底物特异性〕底物特异性——发生改动发生改动Ø对作用于低分子底物的酶，固定化前后的底物特异对作用于低分子底物的酶，固定化前后的底物特异性没有明显变化；性没有明显变化；Ø对于可作用于大分子底物，又可作用于小分子底物对于可作用于大分子底物，又可作用于小分子底物的酶，固定化酶的底物特异性往往会发生变化的酶，固定化酶的底物特异性往往会发生变化Ø固定化酶底物特异性的改动，是由于载体的空间位固定化酶底物特异性的改动，是由于载体的空间位阻作用引起的阻作用引起的〔〔6〕固定化酶的米氏常数〔〕固定化酶的米氏常数〔Km〕〕——发生改动发生改动Ø当酶结合于电中性载体时，由于分散限制，呵斥表当酶结合于电中性载体时，由于分散限制，呵斥表观观Km↑；；Ø由于高级构造变化及载体影响引起酶与底物亲和力由于高级构造变化及载体影响引起酶与底物亲和力变化，从而使变化，从而使Km变化。

当载体与底物电荷相反，变化当载体与底物电荷相反，固定化酶的表观固定化酶的表观Km↓；当载体与底物电荷一样，固；当载体与底物电荷一样，固定化酶的表观定化酶的表观Km显著添加显著添加ØKm值又受载体的疏水性及溶液中离子强度的影响值又受载体的疏水性及溶液中离子强度的影响——改动改动——能够改动能够改动——发生变化发生变化固定化酶的性质固定化酶的性质Ø固定化酶活力固定化酶活力Ø固定化酶的稳定性固定化酶的稳定性Ø固定化酶的最适温度固定化酶的最适温度Ø固定化酶的最适固定化酶的最适pHØ固定化酶的底物特异性固定化酶的底物特异性Ø固定化酶的米氏常数〔固定化酶的米氏常数〔Km〕〕——活力降低活力降低——大多提高大多提高——能够提高能够提高Ø载体性质载体性质Ø带负电荷：固定化酶带负电荷：固定化酶pH↑pH↑Ø带正电荷：固定化酶带正电荷：固定化酶pH↓pH↓Ø产物性质产物性质Ø产物酸性：固定化酶产物酸性：固定化酶pH↑pH↑Ø产物碱性：固定化酶产物碱性：固定化酶pH↓pH↓Ø产物中性：固定化酶产物中性：固定化酶pHpH不变不变Ø作用于小分子底物的酶－作用于小分子底物的酶－不变不变Ø可作用于小分子及大分子可作用于小分子及大分子底物的酶－改动底物的酶－改动Ø载体与底物电荷相反载体与底物电荷相反－－Km降低降低Ø载体与底物电荷一样载体与底物电荷一样－－Km升高升高5.4 细胞和原生质体固定化细胞和原生质体固定化1、细胞固定化、细胞固定化细胞的固定化：经过各种方法将细胞与水不溶性载体细胞的固定化：经过各种方法将细胞与水不溶性载体结合，制备固定化细胞的过程。

结合，制备固定化细胞的过程固定化细胞：指被限制自在挪动的细胞，即细胞遭到固定化细胞：指被限制自在挪动的细胞，即细胞遭到物理、化学等要素的约束或限制在一定的空间界限物理、化学等要素的约束或限制在一定的空间界限内，但细胞仍保管催化活性并具有能反复或延续适内，但细胞仍保管催化活性并具有能反复或延续适用的活力用的活力〔〔1〕〕 固定化细胞的分类固定化细胞的分类①①按细胞类型分类按细胞类型分类固定化微生物细胞固定化微生物细胞固定化植物细胞固定化植物细胞固定化动物细胞固定化动物细胞②②按生理形状分按生理形状分固定化死细胞固定化死细胞固定化活细胞固定化活细胞固定化静止细胞和饥饿细胞固定化静止细胞和饥饿细胞固定化生长细胞〔增殖细胞〕固定化生长细胞〔增殖细胞〕：完好细胞、细胞碎片、细胞器：完好细胞、细胞碎片、细胞器：较适宜于单酶反响：较适宜于单酶反响：更适宜于多酶反响：更适宜于多酶反响〔〔2〕固定化〔增殖〕细胞的优点和缺陷〕固定化〔增殖〕细胞的优点和缺陷①①优点优点Ⅰ.有利于提高细胞的存活率和稳定性；有利于提高细胞的存活率和稳定性；Ⅱ.缩短发酵周期，提高消费才干〔产率〕；缩短发酵周期，提高消费才干〔产率〕；Ⅲ.提高发酵稳定性，可在较长时间内反复和延续运提高发酵稳定性，可在较长时间内反复和延续运用；用；Ⅳ.易与培育液与产物分开，利于产品的分别纯化，易与培育液与产物分开，利于产品的分别纯化，提高产质量量。

提高产质量量〔〔2〕固定化〔增殖〕细胞的优点和缺陷〕固定化〔增殖〕细胞的优点和缺陷②②缺陷缺陷Ⅰ.利用的仅是胞内酶，副产物多；利用的仅是胞内酶，副产物多；Ⅱ.细胞膜、细胞壁及载体存在分散限制造用；细胞膜、细胞壁及载体存在分散限制造用；Ⅲ.载体构成的孔隙大小影响高分子底物和产物的通载体构成的孔隙大小影响高分子底物和产物的通透性〔〔3〕固定化细胞的制备〔〕固定化细胞的制备〔P169-178〕〕Ø普通说，对于一步和两步反响的转化过程，用固定普通说，对于一步和两步反响的转化过程，用固定化酶较适宜；对多步转化，采用整体细胞有利化酶较适宜；对多步转化，采用整体细胞有利固定固定方法方法吸附法吸附法包埋法包埋法：制备固定化细胞的主要方法制备固定化细胞的主要方法凝胶包埋法是运用最广泛的方法凝胶包埋法是运用最广泛的方法ü琼脂凝胶包埋法琼脂凝胶包埋法ü海藻酸钙凝胶包埋法海藻酸钙凝胶包埋法ü角叉菜胶包埋法角叉菜胶包埋法ü明胶包埋法明胶包埋法ü聚丙烯酰胺凝胶包埋法聚丙烯酰胺凝胶包埋法ü光交联树脂包埋法光交联树脂包埋法研讨热点研讨热点——光交联树脂包埋法光交联树脂包埋法Ø例：相对分子量为例：相对分子量为1000-3000的光交联聚氨酯预聚物等，的光交联聚氨酯预聚物等，参与参与1%左右的光敏剂，加水配成一定浓度，加热至左右的光敏剂，加水配成一定浓度，加热至50℃，然后与一定浓度的细胞悬浮液混合均匀，摊成，然后与一定浓度的细胞悬浮液混合均匀，摊成一定厚度的薄层，用紫外照射一定厚度的薄层，用紫外照射3min，就可制得。

就可制得活性炭固定化产脂肪酶的发酵性丝孢酵母细胞的研讨活性炭固定化产脂肪酶的发酵性丝孢酵母细胞的研讨Ø摘要：以活性碳为载体，采用吸附培育的方法将发摘要：以活性碳为载体，采用吸附培育的方法将发酵性丝孢酵母细胞固定化，确定了吸附培育固定化酵性丝孢酵母细胞固定化，确定了吸附培育固定化的适宜条件，并测定了固定化细胞的保管稳定性和的适宜条件，并测定了固定化细胞的保管稳定性和运用稳定性运用稳定性Ø结果阐明，在结果阐明，在100mL发酵培育基中发酵培育基中(250mL摇瓶摇瓶)添添加加1.0 g活性碳于活性碳于30％、％、160 r/min吸附培育吸附培育48h，可，可吸附较多细胞将固定化细胞于吸附较多细胞将固定化细胞于40℃保管保管30 d脂肪脂肪酶活力无明显下降用固定化细胞催化人豆油转酯酶活力无明显下降用固定化细胞催化人豆油转酯化反响，延续催化化反响，延续催化5批后酯化率仍超越批后酯化率仍超越50％载体的预处置载体的预处置Ø将一定量活性炭颗粒置于将一定量活性炭颗粒置于lmol/L HCl溶液中，于溶液中，于50℃搅拌搅拌1h后除去酸液，用去离子水反复冲洗至洗后除去酸液，用去离子水反复冲洗至洗液液pH值为中性，然后于值为中性，然后于130％烘干待用。

％烘干待用固定化细胞的吸附培育与处置固定化细胞的吸附培育与处置Ø在在l00mL发酵培育基中发酵培育基中(250mL摇瓶摇瓶)参与一定量经参与一定量经预处置的载体，接入预处置的载体，接入10％的液体种子，于％的液体种子，于30℃、、160r/min摇床发酵，滤出载体，用去离子水和摇床发酵，滤出载体，用去离子水和50mmol/L磷酸缓冲液磷酸缓冲液(pH 7.0)洗涤洗涤3次，风干制得固次，风干制得固定化细胞定化细胞固定化细胞的保管稳定性固定化细胞的保管稳定性Ø将固定化细胞置于将固定化细胞置于4℃保管，定期取样测定胞内脂保管，定期取样测定胞内脂肪酶活力，以游离细胞作对照旧肪酶活力，以游离细胞作对照旧固定化细胞的运用稳定性固定化细胞的运用稳定性Ø用固定化细胞催化大豆油进展转酯化反响，每反响用固定化细胞催化大豆油进展转酯化反响，每反响一批后，回收固定化细胞，用丙酮充分洗涤，风干，一批后，回收固定化细胞，用丙酮充分洗涤，风干，参与新的反响体系中，继续进展转酯化反响参与新的反响体系中，继续进展转酯化反响5.4  细胞和原生质体固定化细胞和原生质体固定化2. 原生质体的固定化原生质体的固定化〔〔1〕原生质体的制备〕原生质体的制备1〕制备过程〕制备过程      将对数生长期的细胞搜集将对数生长期的细胞搜集→悬浮在含有浸透压稳定悬浮在含有浸透压稳定剂的高渗缓冲液中剂的高渗缓冲液中→参与水解酶参与水解酶→分别分别→得到原生得到原生质体质体2〕细胞壁水解酶〕细胞壁水解酶细菌：溶菌酶细菌：溶菌酶酵母菌：蜗牛消化酶酵母菌：蜗牛消化酶霉菌：几丁质酶霉菌：几丁质酶植物：纤维素酶，果胶酶植物：纤维素酶，果胶酶〔〔2〕原生质体固定化〕原生质体固定化    将原生质替制备好后，把离心搜集到的原生质体重将原生质替制备好后，把离心搜集到的原生质体重新悬浮在含有浸透压稳定剂的缓冲液中，配成一定新悬浮在含有浸透压稳定剂的缓冲液中，配成一定浓度的原生质体悬浮液，然后采用包埋法制成固定浓度的原生质体悬浮液，然后采用包埋法制成固定化原生质体。

化原生质体〔〔3〕固定化原生质体的特点〕固定化原生质体的特点1〕添加细胞的通透性，利于氧气及营养物质的传送〕添加细胞的通透性，利于氧气及营养物质的传送和吸收，利于胞内产物的释放，可显著提高产率和吸收，利于胞内产物的释放，可显著提高产率2〕有载体的维护作用，具有较好的操作稳定性和保〕有载体的维护作用，具有较好的操作稳定性和保管稳定性，可反复运用或延续运用较长时间，利于管稳定性，可反复运用或延续运用较长时间，利于延续化消费延续化消费3〕易与发酵产物分开，有利于产物的分别纯化，提〕易与发酵产物分开，有利于产物的分别纯化，提高产质量量高产质量量4〕固定化原生质体发酵的培育基中需添加浸透压稳〕固定化原生质体发酵的培育基中需添加浸透压稳定剂，以坚持原生质体的稳定性定剂，以坚持原生质体的稳定性辅酶、细胞及原生质体的固定化方法辅酶、细胞及原生质体的固定化方法Ø辅酶辅酶Ø多采用共价结合法多采用共价结合法Ø细胞细胞Ø吸附法吸附法Ø凝胶包埋法凝胶包埋法Ø原生质体原生质体Ø包埋法包埋法上节课主要内容上节课主要内容Ø固定化酶的性质固定化酶的性质Ø辅酶的固定化辅酶的固定化Ø细胞及原生质体的固定化细胞及原生质体的固定化——改动改动——能够改动能够改动——发生变化发生变化固定化酶的性质固定化酶的性质Ø固定化酶活力固定化酶活力Ø固定化酶的稳定性固定化酶的稳定性Ø固定化酶的最适温度固定化酶的最适温度Ø固定化酶的最适固定化酶的最适pHØ固定化酶的底物特异性固定化酶的底物特异性Ø固定化酶的米氏常数〔固定化酶的米氏常数〔Km〕〕——活力降低活力降低——大多提高大多提高——能够提高能够提高Ø载体性质载体性质Ø带负电荷：固定化酶带负电荷：固定化酶pH↑pH↑Ø带正电荷：固定化酶带正电荷：固定化酶pH↓pH↓Ø产物性质产物性质Ø产物酸性：固定化酶产物酸性：固定化酶pH↑pH↑Ø产物碱性：固定化酶产物碱性：固定化酶pH↓pH↓Ø产物中性：固定化酶产物中性：固定化酶pHpH不变不变Ø作用于小分子底物的酶－作用于小分子底物的酶－不变不变Ø可作用于小分子及大分子可作用于小分子及大分子底物的酶－改动底物的酶－改动Ø载体与底物电荷相反载体与底物电荷相反－－Km降低降低Ø载体与底物电荷一样载体与底物电荷一样－－Km升高升高辅酶、细胞及原生质体的固定化方法辅酶、细胞及原生质体的固定化方法Ø辅酶辅酶Ø多采用共价结合法多采用共价结合法Ø细胞细胞Ø吸附法吸附法Ø凝胶包埋法凝胶包埋法Ø原生质体原生质体Ø包埋法包埋法评价固定化酶〔细胞〕的目的评价固定化酶〔细胞〕的目的1、固定化酶〔细胞〕的活力、固定化酶〔细胞〕的活力2、偶联率及相对活力、偶联率及相对活力3、固定化酶〔细胞〕的半衰期、固定化酶〔细胞〕的半衰期    5.5 固定化酶〔细胞〕的运用固定化酶〔细胞〕的运用Ø固定化酶在根底实际研讨中运用固定化酶在根底实际研讨中运用Ø固定化酶和亲和色谱固定化酶和亲和色谱Ø固定化酶〔细胞〕在工农业消费上的运用固定化酶〔细胞〕在工农业消费上的运用Ø固定化酶在医药治疗上的运用固定化酶在医药治疗上的运用Ø固定化酶在分析化学中运用固定化酶在分析化学中运用Ø固定化酶与环境维护固定化酶与环境维护Ø固定化酶在新能源开发中的运用固定化酶在新能源开发中的运用1. 在根底实际研讨中的运用在根底实际研讨中的运用〔〔1〕阐明酶反响的机理〕阐明酶反响的机理在多酶反响中，将酶固定化后装成酶柱，阐明每一在多酶反响中，将酶固定化后装成酶柱，阐明每一个酶的作用。

个酶的作用〔〔2〕酶亚基性质的研讨〕酶亚基性质的研讨采用固定化方法，控制一定的条件，使多亚基酶中采用固定化方法，控制一定的条件，使多亚基酶中只需一个亚基与载体相连，再经过一定的方法，只需一个亚基与载体相连，再经过一定的方法，除去未被固定的亚基，从而研讨单亚基的性质除去未被固定的亚基，从而研讨单亚基的性质活化载体活化载体  载载        体体+活化活化+例如：醛缩酶亚基活力的测定例如：醛缩酶亚基活力的测定8mol/L尿素尿素透析透析醛缩酶亚基活力测定醛缩酶亚基活力测定固定化衍生物固定化衍生物活力活力/U蛋白质蛋白质/mg比活力比活力/U·mg-1全酶全酶1001004.5亚基亚基9.827.51.6〔〔3〕提示酶原激活机理〕提示酶原激活机理有时酶原激活并不涉及蛋白水解有时酶原激活并不涉及蛋白水解如：酪氨酸酶，固定化后，不需水解就可活化至天然如：酪氨酸酶，固定化后，不需水解就可活化至天然酶活的酶活的20％～％～30％阐明蛋白酶构造重排后可激活酶的一些活力阐明蛋白酶构造重排后可激活酶的一些活力〔〔4〕研讨蛋白质〕研讨蛋白质-核酸分子构造核酸分子构造如：用双功能试剂测定酶侧链基团之间的间隔；如：用双功能试剂测定酶侧链基团之间的间隔；        用交联法分析寡聚蛋白的四级构造。

用交联法分析寡聚蛋白的四级构造2. 亲和分别系统亲和分别系统〔〔1〕生物亲和技术的根底：生物活性化合物特异性〕生物亲和技术的根底：生物活性化合物特异性信息的综合信息的综合〔〔2〕亲和分别〕亲和分别    利用生命景象中生物分子间特有的高亲和力、高专利用生命景象中生物分子间特有的高亲和力、高专注性，可逆结合而设计的一种非常巧妙的纯化方法，注性，可逆结合而设计的一种非常巧妙的纯化方法，是独一的一种可以表达待分别物质间生物学功能差是独一的一种可以表达待分别物质间生物学功能差别的分别方法别的分别方法〔〔3〕亲和分别种类〕亲和分别种类1〕将某种作为配基的生物分子偶联于固相载体上制〕将某种作为配基的生物分子偶联于固相载体上制成亲和吸附剂，用作色谱的填充剂来分别与之特异成亲和吸附剂，用作色谱的填充剂来分别与之特异结合的配体，然后将配体洗脱下来并回收结合的配体，然后将配体洗脱下来并回收-亲和色亲和色谱法2〕将配基偶联于载体上，用于选择性地去除某些污〕将配基偶联于载体上，用于选择性地去除某些污染物3〕将细胞外表抗原分子对应的抗体偶联于载体上用〕将细胞外表抗原分子对应的抗体偶联于载体上用于细胞的标志、分别及性质研讨。

于细胞的标志、分别及性质研讨〔〔4〕运用〕运用1〕物质分别〕物质分别2〕微量物质的分析〕微量物质的分析3〕肽库及抗体库的挑选〕肽库及抗体库的挑选4〕制药工业〔亲和色谱用于药用重组蛋白的纯化〕〕制药工业〔亲和色谱用于药用重组蛋白的纯化〕5〕核酸分别〔碱基配对〕〕核酸分别〔碱基配对〕色谱固定化金属离子亲和色谱法纯化猪铜锌超氧化物歧化酶Ø以Cu+-Sepharose 4B固定化金属离子亲和色谱法纯化猪铜锌超氧化物歧化酶，调查丁不同的洗脱缓冲溶液及其pH 对纯化效率的影响，显示了方法的有效性色谱固定化铜离子亲和膜色谱柱吸附血红蛋白的研讨Ø将纤维素滤纸进展碱处置及环氧活化、偶联亚氨基二乙酸、固定化铜离子等处置，并将其装入自制的色谱柱管，制得固定化铜离子亲和膜色谱柱该柱可用于吸附血红蛋白(hemoglobin，Hb)，吸附率可到达90％以上3. 药物控释载体药物控释载体——从时间和空间分布上控制药物的释放从时间和空间分布上控制药物的释放〔〔1〕一些药物不能用于临床的缘由〕一些药物不能用于临床的缘由1〕很多药物尤其是蛋白质类药物，口服易被胃酸破〕很多药物尤其是蛋白质类药物，口服易被胃酸破坏或沉淀。

坏或沉淀2〕单纯注射后瞬时血药浓度提高，但马上被肝脏及〕单纯注射后瞬时血药浓度提高，但马上被肝脏及血液中的酶系统所消除，需求反复注射，不仅添加血液中的酶系统所消除，需求反复注射，不仅添加治疗费用，而且添加感染的时机治疗费用，而且添加感染的时机3〕肿瘤化疗用细胞毒性物质选择性较差，全身毒副〕肿瘤化疗用细胞毒性物质选择性较差，全身毒副作用严重作用严重4〕有些药物亲水性强，难于穿过细胞膜〕有些药物亲水性强，难于穿过细胞膜5〕蛋白质类药物易引起免疫反响〕蛋白质类药物易引起免疫反响6〕很多药物稳定性差，不耐储存〕很多药物稳定性差，不耐储存药物控制释放技术：将药物或其他的活性物质与适当的载体按一定的方式制成制剂，控制药物在人体内吸收、代谢以及排泄的过程使药物按设计的剂量，在要求的时间范围内以一定的方式在体内释放或使药物在指定部位释放而到达治疗某种疾病的目的〔〔2〕处理方法〕处理方法1〕聚合物修饰〕聚合物修饰    多用于蛋白质类药物这类药物生物半衰期短，免多用于蛋白质类药物这类药物生物半衰期短，免疫性强，可用适当的水溶性高分子聚合物加以修饰疫性强，可用适当的水溶性高分子聚合物加以修饰以改善其性能。

以改善其性能2〕凝胶包埋〕凝胶包埋    ——希望药物可以较长时间内维持一个稳定浓度希望药物可以较长时间内维持一个稳定浓度    用生物相容性好的高分子聚合物与药物混合制成含用生物相容性好的高分子聚合物与药物混合制成含有药物的凝胶，植入人体内特定部位，以到达缓释有药物的凝胶，植入人体内特定部位，以到达缓释给药效果给药效果3〕微球制剂〕微球制剂    用高聚物微球包埋或化学偶联药物可制成微球制剂，用高聚物微球包埋或化学偶联药物可制成微球制剂，它具有靶向性、缓释性及减少抗药性等特点微球它具有靶向性、缓释性及减少抗药性等特点微球与靶细胞接触，可以经过胞饮进入胞内发生作用，与靶细胞接触，可以经过胞饮进入胞内发生作用，不影响细胞膜通透性，不会产生抗药性不影响细胞膜通透性，不会产生抗药性4〕脂质体〕脂质体    脂质体是磷脂双分子层在水溶液中自发构成的超微脂质体是磷脂双分子层在水溶液中自发构成的超微型中空小泡，具有靶向性、长效性并且可以经过型中空小泡，具有靶向性、长效性并且可以经过胞饮作用胞内释放药物，从而防止抗药性；此外还胞饮作用胞内释放药物，从而防止抗药性；此外还具有更好的生物相容性和可生物降解性，并且无毒具有更好的生物相容性和可生物降解性，并且无毒性，无免疫原性。

性，无免疫原性5〕导向药物〕导向药物    导向药物具有自动靶向性，将针对肿瘤细胞的单克导向药物具有自动靶向性，将针对肿瘤细胞的单克隆抗体与化疗药物化学偶联，可以直接作用于肿瘤隆抗体与化疗药物化学偶联，可以直接作用于肿瘤细胞而产生杀伤作用，并且降低全身毒性细胞而产生杀伤作用，并且降低全身毒性高分子通报生物可降解聚酯用作蛋白质药物控释载体Ø聚乳酸PLA及乳酸与羟基乙酸的共聚物PLGA，由于其良好的生物相容性以及生物降解性，可用作蛋白质类药物控释体系的载体资料，同时可延伸蛋白质药物的释放Ø本文综述了几种生物相容性聚酯及其衍生物以及它们的构成方法：(1)在PLGA的分子链中引入亲水性的含醚键的分子如PEO、PEG，来提高聚合物的亲水性，构成PLGA嵌段共聚物；(2)将细胞可接受的片段或多肽固定在聚合物支架外表，来加强PLGA与细胞间的粘附力，得到靶向的PLGA衍生物；(3)改动PLGA载体内的酸性环境，提高蛋白质药物在载体中的稳定性，开展了支化聚酯PVA-g-PLGA，并得到均速的药物释放以上这些方法所得到的聚酯及其衍生物，均可作为蛋白质类药物平安、可靠的载体资料4. 生物传感器生物传感器Ø由固定化酶〔或细胞、细胞器等〕与适当的换能器由固定化酶〔或细胞、细胞器等〕与适当的换能器〔电极、场效应管、离子选择场效应管等〕亲密结〔电极、场效应管、离子选择场效应管等〕亲密结合而构成的分析系统，由感受器、换能器和电子线合而构成的分析系统，由感受器、换能器和电子线路三部分组成。

路三部分组成Ø运用：葡萄糖氧化酶电极，青霉素酶电极运用：葡萄糖氧化酶电极，青霉素酶电极ØPellinen等研讨了一种发光的大肠杆菌(Escherichia coli K12)用于丈量鱼肉样品中四环素等抗菌素的含量Ø该生物传感器是将一种带荧光素酶支配子的质粒导人大肠杆菌中，可检测鱼肉中的四环素和土霉素的浓度，丈量极限分别为20 ng ·kg-1 和50 ng ·kg-1 5. 其他方面的运用〔其他方面的运用〔P165-169，，172-174，，176，，178，，181〕〕〔〔1〕工业催化剂〕工业催化剂〔〔2〕工程菌的培育〕工程菌的培育〔〔3〕化学分析和临床诊断〕化学分析和临床诊断〔〔4〕临床治疗〕临床治疗〔〔5〕环境中微量有毒物质的含量测定，进展环境监〕环境中微量有毒物质的含量测定，进展环境监测测〔〔6〕新化学能源的开发〕新化学能源的开发 固定化酶在工农业消费上的运用固定化酶在工农业消费上的运用 产 物 酶或细胞 固定化方法 原 料L-氨基酸果糖浆6APAL-门冬氨酸L-苹果酸低乳糖牛奶乳糖干蛋白果汁脱苦啤酒植物白脱脂肪酸氨基酰化酶葡萄糖异构酶或含该酶之菌体青霉素酰胺酶含有门冬氨酸的菌体含有反丁烯二酸酶的菌体乳糖酶碱性蛋白酶葡萄糖氧化酶和氧化氢酶柚苷酶木瓜蛋白酶脂肪酶脂肪酶载体结合法载体结合法或交联法载体结合法胶格包埋法胶格包埋法载体结合法载体结合法胶格包埋法载体结合法载体结合法或包埋法胶格包埋法载体结合法乙酰-DL-氨基酸葡萄糖青霉素G反丁烯二酸反丁烯二酸牛奶牛奶蛋白桔类果汁生啤酒植物油植物油 产 物 酶或细胞 固定化方法 原 料类固醇L-丙氨酸D-苯甘氨酸ATP核苷酸类味精乙醇啤酒L-亮氨酸乙酸乳酸淀粉酶杆菌肽氢气含脱氢酶及羟化酶的菌体含有L-门冬氨酸、β-脱羧酶的菌体氨基酰化酶乙酰激酶5’-磷酸二酯酶，5’-腺苷酸脱氨酶Sacharomyces carlsbergensie或S.Cerevisiae同上Serratia marcescensAectobcter.sp.乳酸杆菌与酵母Bacillus substilisBacill sp.Clostridium butyicum Rhodospirillium rubrum胶格包埋法包埋法载体结合法载体结合法载体结合法角叉胶或聚丙烯酰胺胶包埋聚乙烯氯或多孔砖吸附或海藻酸包埋角叉胶包埋水合氧化钛吸附明胶包埋聚丙烯酰胺胶包埋聚丙烯酰胺胶包埋聚丙烯酰胺或琼脂包埋类固醇前体L-门冬氨酸乙酰-DL-苯基苷氨酸ADPRNA葡萄糖培养基 苏氨酸培养基乙醇培养基 固定化酶在医药治疗上的运用固定化酶在医药治疗上的运用Ø例：制造人工肾例：制造人工肾Ø利用固定化脲酶透析液和活性炭一同制成的体外循利用固定化脲酶透析液和活性炭一同制成的体外循环安装，大大提高了疗效。

环安装，大大提高了疗效固定化生长菌体在三废处置上的运用固定化生长菌体在三废处置上的运用应用内容应用内容       菌菌  体体  固定化方法固定化方法  毒毒  物物废水处理废水处理脱氮作用脱氮作用Candida tropicalisPsendomonas Putida各种微生物混合培养各种微生物混合培养Pseudomonas sp  Micrococcus deritrificans聚丙烯酰胺胶包聚丙烯酰胺胶包埋埋聚丙烯酰胺胶包聚丙烯酰胺胶包埋埋皂土和皂土和Mg＋＋＋＋或聚或聚氨基甲酸乙酯海氨基甲酸乙酯海绵绵活性炭吸附液膜活性炭吸附液膜酚酚苯苯废水废水亚硝酸、亚硝酸、硝酸硝酸新能源开发中的运用新能源开发中的运用ØH2是重要的能源物质，虽然有许多微生物可以产是重要的能源物质，虽然有许多微生物可以产生生H2，但产氢系统不稳定有人利用固定化丁酸，但产氢系统不稳定有人利用固定化丁酸梭菌延续产氢，稳定性比天然细胞好梭菌延续产氢，稳定性比天然细胞好 Ø将植物的叶绿体中的铁氧复原蛋白氧化酶系统用胶将植物的叶绿体中的铁氧复原蛋白氧化酶系统用胶原膜包被，可用于水的光介产生氢气和氧气原膜包被，可用于水的光介产生氢气和氧气。

小小     结结Ø固定化酶〔细胞、原生质体〕的定义固定化酶〔细胞、原生质体〕的定义Ø固定化酶〔细胞、原生质体〕的方法固定化酶〔细胞、原生质体〕的方法Ø固定化酶的性质固定化酶的性质Ø固定化酶〔细胞、原生质体〕的运用固定化酶〔细胞、原生质体〕的运用思索题思索题一、简答题一、简答题1、简述常用的固定化方法及其运用范围简述常用的固定化方法及其运用范围2、何谓固定化酶？固定化酶的特性与游离酶比较有、何谓固定化酶？固定化酶的特性与游离酶比较有哪些改动？哪些改动？3、举例阐明固定化酶在工业消费上的运用举例阐明固定化酶在工业消费上的运用4、何谓固定化细胞？固定化细胞有何特点和运用？、何谓固定化细胞？固定化细胞有何特点和运用？5、简述固定化原生质体的制备方法与特点简述固定化原生质体的制备方法与特点二、综合分析题二、综合分析题1、试分析固定化酶与固定化细胞的异同试分析固定化酶与固定化细胞的异同2、固定化细胞与固定化原生质体有哪些异同点？、固定化细胞与固定化原生质体有哪些异同点？。