除菌过滤知识讲座.ppt

除 菌 过 滤内 容n除菌过滤相关国际法规及关注 点n完整性监测n除菌过滤验证第一部分 除菌过滤相关国际法规及 关注点无菌生产工艺相关文件n美国食品及药品管理局行业规范指南—— 无菌工艺下的无菌药品生产：Good Manufacturing Practice(2004)n欧盟生产质量管理规范指南 附录Ⅰ(修订 版)无菌药品的生产nPDA技术报告26 液体除菌过滤(2008年 新版)nPDA——Parenteral Drug Association ，注射用药物协会 除菌级过滤器—术语定义的历史 演变n 1987年n 2004年通过适当验证，能从流体中滤除全部微生物的过滤器通过107/cm3缺陷假单胞菌（P.diminuta）挑战，下游滤出液无菌的过滤器一 般 概 念n过滤是一种通用的药品溶液灭菌方法 n除菌级过滤器的有效性应当得到验证 ，从而可再现性地去除生产流体中的 活性微生物，生成无菌滤出液n目前除菌级过滤器的标称孔径通常是 0.2um或更低一般认为：标称孔径等级为0.22um 或0.2um的过滤器可以互换。

除菌过滤＆无菌工艺——降 低风险GMP关于产品灭菌工艺 的说明n EU guidelines to GMP Annex 1n FDA “Sterile Drug Products Produced by AsepticProcessing”Se ptember,2004 条件具备时，应采用热灭菌110.如果具备在最终容器中进行灭菌的条件，则应 在最终容器中进行灭菌，仅仅进行过滤是不够的只有在无法进行终端灭菌的情况下方可采用无菌 工艺来制造无菌药物这已经成为一条公认的原则选择灭菌方法的决策图（水溶液 药品）在121℃下进行15分钟湿热灭菌， 是否能够完成此药品的灭菌处理？是在121℃下进行15 分钟高温高压灭菌否对此药品进行湿热灭菌 （F0值≥8分钟），无菌 保证水平是否能够≤10-6否是对此药品进行湿热灭菌 （（F0值≥8分钟）选择灭菌方法的决策图（水溶液 药品）n 此剂型是否能够通过 微生物截留过滤器是否组合利用除菌过滤与 无菌灌装对独立部件进行预灭菌 处理，采用无菌配料与 无菌灌装除菌过滤应用n法规建议热灭菌仅仅用于最终 产品n除菌过滤可以应用于整个工艺 过程中除菌过滤应用n最终产品n培养基过滤n层析和洗滤的缓冲液n水过滤n其它流体如化学品，溶剂，清洁剂等最终产品除菌过滤n EU guidelines to GMP Annex 1ISPE评论—对于不能进行除菌过滤的 悬浮液和疫苗可能是个问题。

建议：当最终产品不能进行除菌过滤， 每种组分必须无菌检测及无菌混合80.所有溶液，特别是大容量注射剂，必须进行除菌 过滤，如果可能得话，应在现场过滤后立即灌装过滤器一次性使用EU guidelines to GMP Annex 1FDA “Sterile Drug Products Produced by Aseptic Processing”September,2004114.同一过滤器的使用时间不得超出 一个工作日（除非经过验证）单批处理完毕后，无菌过滤器应当定期报废然而， 如果重复使用的合理性能够得到论证，验证无菌过滤 器的有效性时应当体现最大数量的处理批次PDA TR26：“重复使用”n多批次使用◆ 无需移动、冲洗、清洗、消毒 或者再次灭菌 ◆ 仅在批次间进行冲洗◆ 批次间冲洗和再次灭菌◆ 批次间冲洗、清洁和再次灭菌◆ 间歇使用并批次间烘干关于重复使用PDA TR26 Sterilizing Filtration of Liquids,2008过滤器重复使用通常不实际，也不被推荐 用于制药但是，如果一个除菌过滤器要重 复使用，则需要提交评估报告，重复使用的 参数也需验证。

过滤工艺验证EU guidelines to GMP Annex 1FDA “Sterile Drug Products Produced by Aseptic Processing”September,200483.所有灭菌工艺均需通过有效性验证使用单只过滤器（或过滤器组合）时的有效性验 证应当包括：微生物挑战性试验，以模拟待过滤 原料的最恶劣生产条件……工艺条件n生产过程中以下因素可能影响过滤性 能：＊ pH，温度＊ 料液性质＊ 压差＊ 流速，最大使用时间n验证必须涵盖最恶劣生产条件工艺条件EU guidelines to GMP Annex 1113.验证时，应测定过滤已知体积药液所需的 时间，以及过滤器的压差；在日常生产中，发 现任何显著差异（与验证所得相应数据对比）， 应记录下来，然后进行调查过滤时间n EU guidelines to GMP Annex 1FDA “Sterile Drug Products Produced by AsepticProc essing”September,200479 从开始配制岛灭菌完成（或除菌过滤），处理时间应尽可能缩短。

产品过滤总时间应限制在一个确定的时间内，防止微生物穿透到下游 同时该时间限制能避免上游生物负荷和内毒素的显著增加 在上游工艺中用于溶液过滤或去除颗粒物的过滤器的最大使用时间也 应确定及确认，因为它们提供了微生物附着的基础缩短工艺路线111.……一旦完成最终无菌过滤，应当紧随 其后，尽可能快地开始灌装EU guidelines to GMP Annex 1完整性检测——何时？113. 经过灭菌处理后的过滤器，其完整性应 当通过确认方可投入使用；另外，使用完毕， 应当立即利用适当的方法，对其完整性予以 确认EU guidelines to GMP Annex 1生物负荷控制生物负荷-“特定物品灭菌前，其相关微生物的总量”生产工艺控制的宗旨：将未过滤制品的生物负荷 降至最低 对于未经灭菌处理的散装溶液，应当测定其生物 负荷，以了解生物潜在污染源的特征倾向FDA “Sterile Drug Products Produced by AsepticProcessing”September,2004生物负荷控制64 在工艺流程的各个阶段（包括灭菌前），应采取 各种预防措施，以尽可能降低污染64 在工艺流程的各个阶段（包括灭菌前），应采取 各种预防措施，以尽可能降低污染。

80. 应监控灭菌前产品的生物负荷……不管是无 菌灌装还是最终灭菌的药品，每批产品的微生物污 染水平均应测定对参数放行系统，微生物污染水 平应每批进行，并作为工艺控制的一项测试EU guidelines to GMP Annex 1生物负荷控制n对于过滤灭菌而言，必须在申请文件中注 明过滤之前容许的生物负荷最大值n大多数情况下，每100毫升药品中允许存 在10CFU单位的生理微生物群（取决于待 过滤药品体积与过滤器直径的相对比例） n如果达不到上述要求，有必要利用细菌截 留过滤器进行预过滤，以获得足够低的生 物负荷EMEA Committee for Proprietary Medicinal Products(CPMP）Note for Guidance on Manufacture of the Finished Dosage From(CPMP/QWP/486/95)April,1996双重过滤器111. 利用经过灭菌处理后的微生物截留过滤器施 行二次过滤，随后立即灌装，可能不失为明智之举EU guidelines to GMP Annex 1在许多情况下，都应该考虑使用双重除菌级过滤器。

FDA “Sterile Drug Products Produced by AsepticProcessing”September,2004双重除菌过滤的优势n接近灌装点的第二级过滤器保护无 菌生产工艺中产品不受污染n如果第一级过滤器完整性失败，第 二级能提供额外保障n第一级过滤器作为预过滤能降低微 生物负荷，使终过滤前达到 10cfu/100ml注射用药物协会PDA评论（2006 年4月）n在溶液灌装操作实践中，利用两只串 联的灭菌级过滤器，可以加强无菌保 障我们已经建议修订57条款（新版 ），在其中对上述改进有所涉及n串联使用两只过滤器时，我们认为以 下做法是适当的：每间隔一段适当的 时间，可能才需要对生物负载进行监 控双重过滤器n“单级”过滤过滤器完整性一旦失效，减轻批损 失的风险■ 如果1号过滤器有效，对批放行2号过滤器忽略不计■ 如果1号过滤器失效，测试2号过 滤器■ 如果2号过滤器有效，对批放行双重过滤器n“二级”过滤■ 1号过滤器用途：降低高生物负 载，或灭菌(?)■ 2号过滤器用途：无菌保证■ 只有1号和2号过滤器都通过完整 性试验，才能对批放行无菌气体过滤膜式过滤器…经常用于产生生产操作中所需 的无菌气体。

例如，这些无菌膜过滤器可用于高压锅气体管路，冻干机存放无菌溶液的储罐FDA “Sterile Drug Products Produced by AsepticProcessing”September,2004无菌气体过滤气体过滤器（包括呼吸过滤器）应当干燥 气体过滤器中的冷凝液可能导致使用时发生 堵塞，或者主张微生物的滋生 使用疏水性过滤器，并在适当的时候对其 进行加热处理，可以避免发生潮湿残留问题FDA “Sterile Drug Products Produced by AsepticProcessing”September,2004过滤器灭菌“对于装配好的系统采用蒸汽灭菌（SIP） 能很大程度上消除无菌操作过程中的隐患FDA “Sterile Drug Products Produced by AsepticProcessing”September,2004高压锅灭菌＆无菌连接n过滤器主要的灭菌方法n出口连接处包裹透蒸汽材料n使用预先抽真空和缓慢排气n灭菌结束后无菌连接灭菌（SIP）主要优点n系统预先组装n蒸汽灭菌后无需对连接进一步操作 主要缺点n整个过程可能较长n材料和系统在一定压力必须能耐受蒸汽典型应用于不锈钢系统第二部分 完整性检测发展历史n60年代以前—采用深层过滤器（石棉 、纤维、烧结玻璃、烧结陶瓷等）进 行“除菌”过滤。

n60年代—0.45um过滤精度的“除菌” 滤膜＊ 对滤膜进行“泡点完整性”检测＊ David B.Pall,U.S.注册专利 #3,007,334 Filed Nov.30,1956n1970-80年—0.2um细菌挑战和完整 性数据关联＊ P.diminuta(假单胞菌)挑战＊ 用完整性数据和细菌拦截参数区分 0.2um和0.45um＊ Forward Flow（前进流）完整性检测 用于检测大面积过滤器＊ David B.Pall,”Qualitu Control of Absolute Bacteria Removal Filters,”Bull.Parenteral Drug Assoc.,29,392-204(1975),注册专利＊ 1987, FDA首次发布《无菌工艺验证 指南》，明确泡点/前进流方法可以进行完整性检测的滤芯种类n除菌级过滤器（亲水性、疏水性）n除病毒过滤器n部分预过滤器完整性检测通常只用于膜式过滤器完整性检测目的n确认正确安装n检测破损n确认过滤系统达到验证性能不是检测滤膜微孔的“孔径”分 布完整性检测对于保证产品质量和批次 放行。