重金属检查法标准操作规程.doc

目的： 建立重金属检查法标准操作规程 范围： 本规范适用于重金属检查法检查 职责： 质量控制部全体人员 内容：1. 简述重金属是指在规定实验条件下能与显色剂作用显色的金属杂质 采用硫代乙酰胺试 液或硫化钠试液作显色剂，以铅的限量表示由于实验条件不同，分为 4 种检查方法： 第一法适用于供试品不经有机破坏，在酸性溶液中进行显色的重金属限度检查；第二法 适用于供试品需灼烧破坏，取炽灼残渣项下遗留的残渣，经处理后在酸性溶液中进行显 色的重金属限度检查； 第三法用来检查能溶于碱而不溶于稀酸 （或在稀酸中即生成沉淀） 的药品中的重金属；第四法用微孔滤膜过滤，使重金属硫化物沉淀富集成色斑，用于有 色溶液或重金属限度较低的品种检查时，应根据药典品种项下规定的方法选用四种 方法显示的结果均为微量重金属的硫化物微粒均匀混悬在溶液中所呈现的颜色； 采用滤 膜法可获得“色斑”；如果重金属离子浓度大，加入显色剂后放置时间长，就会有硫化 物聚集下沉重金属硫化物生成的最佳 PH 值是 3.0-3.5，选用醋酸盐缓冲液（ PH3.5） 2.0ml 调节 PH 较好，显色剂硫代乙酰胺试液用量经实验也以 2.0ML 为佳，显色时间一 般为2分钟。

以10-20 g的Pb与显色剂所产生的颜色为最佳目视比色范围在规定实 验条件下，与硫代乙酰胺试液在弱酸条件下产生的硫化氢呈色的金属离子有银、 铅、汞、 铜、镉、铋、锑、锡、砷、锌、钴与镍等由于在药品生产过程中遇到铅的机会较多， 且铅易积蓄中毒，故以铅作为重金属的代表，用硝酸铅配制标准铅溶液2. 仪器与用具2.1 纳氏比色管 50ml 应选玻璃质量好、无色（尤其管底） 、配对、刻度标线高度一 致的纳氏比色管2.2滤器 见中国药典重金属检查法第四法附图，由具有螺纹丝扣并能密封的上、下 两部分以及垫圈、滤膜和辅助滤板组成2.2.1 滤器上盖部分 A 的入口处应能与 50ML 注射器紧密联接，滤器下部 F 的出口 处能套上一合适橡皮管 A 与 F 能通过螺纹丝扣密封2.2.2 垫圈应内径光滑、大小相同，以使斑点边缘圆整、清楚、大小一致在滤器上 加上橡皮垫圈，既可使滤膜与滤板紧密结合，又可避免在旋紧滤器接头时扭曲或损坏滤 膜223滤膜的直径为10MM，孔径为3.0卩m,使用前在水中浸泡24小时以上，可使色斑均匀2.2.4 50ml 注射器，应能与滤器上盖入口处紧密联接3. 试药和试液3.1 标准铅溶液精密称取在105C干燥至恒重的硝酸铅0.160g，置1000ml量瓶中，加硝酸5ml与 水 50ml 溶解后，用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。

临用前，精密量取贮备液 10ml， 置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得（每 1ml相当于10卩g的Pb）3.2硫代乙酰胺试液、硫化钠试液、醋酸盐缓冲液（PH3.5）与抗坏血酸等均按药的 规定3.3稀焦糖溶液取蔗糖或葡萄糖约5g，置磁坩埚中，在玻璃棒不断搅拌下，加热至 呈棕色糊状，放冷，用水溶解成约 25ml，滤过，贮于滴瓶中备用临用时，根据供试液色泽深浅，取适当量调节使用4. 操作方法4.1 第一法4.1.1除另有规定外，取25ml纳氏比色管两支，甲管中加标准铅溶液一定量与醋酸 盐缓冲液（pH3.5） 2ml后加水或各药品项下规定的溶剂稀释成 25ml，乙管中加入按各药 品项下规定的方法制成的供试液 25ml ;若供试液带颜色，可在甲管中滴加少量的稀焦糖溶液或其他无干扰的有色溶液，使之与乙管一致；再在甲乙两管中分别加硫代乙酰胺 试液各2ml，摇匀，放置2分钟，同置白纸上，自上向下透视，乙管中显出的颜色与甲 管比较 ,不得更深4.1.2如在甲管中滴加稀焦糖溶液仍不能使颜色一致时， 可取该药品项下规定的二倍 量的供试品和试液，加水或该药品项下规定的溶剂使成 30ml，将溶液分成甲乙二等份，乙管中加水或该药品项下规定的溶剂稀释成 25ml;甲管中加入硫代乙酰胺试液2ml，摇 匀，放置2分钟，经滤膜（孔径3卩m）滤过，然后甲管中加入标准铅溶液一定量，加水或 该药品项下规定的溶剂使成25ml;再分别在乙管中加硫代乙酰胺试液 2ml，甲管中加水 2ml，照上述方法比较，即得。

4 . 1 .3供试品如含高铁盐影响重金属检查时， 可取该药品项下规定方法制成的供试溶 液，加抗坏血酸0.5〜1.0g,并在对照液中加入相同量的抗坏血酸，再照上述方法检查4.1.4配制供试品溶液时， 如使用的盐酸超过 1.0m（l 或与盐酸 1.0ml 相当的稀盐酸）， 氨试液超过2ml，或加入其他试剂进行处理者，除另有规定外，对照液中应取同样同量的 试剂置瓷皿中蒸干后，加醋酸盐缓冲液（pH3.5） 2ml与水15ml,微热溶解后，移置纳氏比色管中，加标准铅溶液一定量，再用水稀释成 25ml4.2 第二法421除另有规定外，取炽灼残渣项下遗留的残渣，加硝酸 0.5ml,蒸干，至氧化氮蒸气除尽后（或取供试品一定量，缓缓炽灼至完全炭化，放冷，加硫酸 0.5〜1.0ml,使恰湿润,用低温加热至硫酸除尽后，力卩硝酸0.5ml，蒸干，至氧化氮蒸气除尽后，放冷，在500〜 600E炽灼使完全灰化），放冷，加盐酸2ml，置水浴上蒸干后加水15ml,滴加氨试液至 对酚酞指示液显中性，再加醋酸盐缓冲液（pH3.5） 2ml，微热溶解后，移置纳氏比色管中， 加水稀释成 25ml；4.2.2另取配制供试品溶液的试剂，置瓷皿中蒸干后，加醋酸盐缓冲液（ pH3.5） 2ml 与水15ml，微热溶解后，移置纳氏比色管中，加标准铅溶液一定量，再用水稀释成25ml; 照上述第一法检查，即得。

4.3第三法除另有规定外，取供试品适量 ,加氢氧化钠试液 5ml 与水 20ml 溶解后，置 25ml 纳 氏比色管中， 加硫化钠试液 5滴，摇匀，与一定量的标准铅溶液同样处理后的颜色比较， 不得更深4.4第四法4.4.1 标准铅斑的制备精密量取标准铅溶液一定量，置小烧杯中，加水或各品种项下规定的溶剂稀释成 ， 加入醋酸盐缓冲液（PH3.5） 2.0ml与硫代乙酰胺试液1ml，摇匀，放置10分钟，用50ml 注射器转移至过滤器中进行压滤（滤速约为每分钟 1ml），滤毕，取下滤膜，放在滤纸上千燥，即得4.4.2检查法照各品种项下规定方法制成的供试液 10ml，照441标准铅斑的制备，自“醋酸盐 缓冲液（ PH3.5） 2.0ml ”起，依法操作，将生成的色斑与标准铅斑比较，不得更深4.4.3若供试溶液有颜色或浑浊， 应用滤膜进行预滤， 如滤膜上有污染， 应换滤膜再 滤，直至滤膜不再染色；然后取滤液，照标准铅斑的制备，自“醋酸盐缓冲液（PH3.5） 2.0ml ”起，依法操作所得供试液的铅斑与标准铅斑比较，不得更深5. 注意事项5.1 标准铅溶液应在临用前精密量取标准铅贮备液新鲜稀释配制，以防止硝酸铅水 解而造成误差，配制与贮存标准铅溶液使用的玻璃容器，均不得含有铅。

5.2硫代乙酰胺试液与重金属反应的最佳 PH值是3.5,故配制醋酸盐缓冲液（PH3.5） 时，要用 PH 计调节，硫代乙酰胺试液加入量以 2.0 时呈色最深；第四法中的检测范围 为2-5卩g的Pb,且因体积小，所以硫代乙酰胺试液的用量为1.0ml硫代乙酰胺试液显 色剂的最佳显色时间为 2 分钟，除第四法由于检测限量低，且为了方便过滤，显色时间 为 10 分钟外，第一、二法均为放置 2 分钟5.3为了便于目视比较，第一、二和三法中的标准铅溶液用量以 （相当于20卩g的Pb）为宜，小于1.0ml或大于3.0ml，呈色太浅或太深，均不利于目视比较5.4 如需将炽灼残渣项下遗留的残渣作重金属检查时，则炽灼温度必须控制在500-600r实验证明，炽灼温度在 700r以上时，多数重金属盐都有不同程度的损失5.5 在炽灼时能腐蚀瓷坩埚而带入较多的重金属，应改用石英坩埚或铂坩埚操作炽灼残渣加硝酸处理，必须蒸干，至氧化氮蒸气除尽，否则会使硫代乙酰胺水解生成的 硫化氢， 因氧化析出乳硫， 影响检查 蒸干后残渣加盐酸处理， 使重金属转化为氯化物， 在水浴上蒸干以赶除多余的盐酸， 加水溶解，加入酚酞指示液 1 滴，再逐滴加入氨试液， 边加边搅拌，直到溶液刚显浅红色为止，再加醋酸盐缓冲液（ PH3.5），使供试液的PH调节至 3.5。

5.6 供试品中如含有高铁盐，在弱酸性溶液中会使硫代乙酰胺水解生成的硫化氢进 一步氧化析出乳硫， 影响检查，可加入抗坏血酸将高铁离子还原为亚铁离子而消除干扰5.7 如供试品自身为重金属的盐，在检查这类药品中的其他重金属时，必须先将供 试品本身的金属离子除去，再进行检查如在枸橼酸铁铵中检查铅盐时，利用在一定浓 度的盐酸中形成 ，用乙醚提取除去，再调节供试液至碱性，用氰化钾试液掩蔽微量的 铁后进行检查；右旋醣酐铁注射液中重金属检查，也是在一定浓度的盐酸中，用醋酸异 丁酯提取除去铁盐后进行检查5.8 药品本身生成的不溶性硫化物，影响重金属检查，可加入掩蔽剂以避免干扰 如硫酸锌和葡萄糖酸锑钠中铅盐检查，是在碱性溶液中加入氰化钾试液，或在中性溶液 中加入酒石酸，使锌离子或锑离子生成稳定的络合物，再依法检查5.9 为了消除盐酸或其他试剂可能夹杂重金属，故在配制供试品溶液时，如使用盐 酸超过1.0ml （或与盐酸1.0ml相当的稀盐酸）或使用氨试液超过 2.0ml，以及用硫酸或 硝酸进行有机破坏，或加入其他试剂进行处理者，除另有规定外，对照溶液应取同样量 试液蒸干后，依法检查5.10当采用第四法时，将注射器套于滤器上后，让注射器内管自然下降，产生的压 力比较均匀，而且对于大多数样品溶液过滤速度达到每分钟左右；对于较粘稠的样品溶 液，可施加一均匀压力使达到该速度，以保证色斑上色调的均匀性。

滤过时如滤器中存 在气泡则会影响色斑质量，故在装置辅助滤板(尼龙垫网) 、滤膜和垫圈时应以水排除 气泡滤器上端与注射器连接处的尺寸大小应以两者能严密嵌合为宜，以免滤过时溶液 溢漏；必要时可改用乳胶管连接6. 记录与计算6.1 记录必须记录所采用的方法，供试品取样量，标准铅溶液取用量，操作过程中使用的特 殊试剂，试液名称和用量或对检查结果有影响的试剂用量，实验过程中出现的现象及实 验结果等6.2 计算6.2.1标准铅溶浓度计算1mol的硝酸铅的质量为331.2g,含铅为207.2g,称取硝酸铅0.1598g配制1000ml 贮备液，含铅量为：(2072 X 0.1598 X 1000)-( 331.2 X 1000) =0.1000mg/ml贮备液依法稀释10倍后所得标准铅溶液为每1ml含10卩g的Pbo6.6.2重金属限量计算进行检查时，如取供试品1.0g,与标准铅溶液2.0ml制成的对照液比较，计算重金 属限量重金属限量%=［标准铅溶液体积X标准铅溶液浓度/供试品量］X 100% 6.2.3标准铅溶液取样量计算根据取供试品量及限量计算公式：V=(重金属限量X供试品重/标准铅溶液浓度),7. 结果判定7.1第一、二、三法，甲管与乙管比较，乙管所呈颜色浅于甲管，判为符合规定。

7.2第四法，供试液所得斑点浅于标准铅瘫的颜色，判为符合规定附件：无相关文件与记录：无培训范围： 质量控制部全体人员 参考文献：《中华人民共和国药典》 2010年版第一增补本， 2012年8月 第1版，中国医药科技出版社《中国药品检验标准操作规范》2010版，2010年9月 第一版，中国医药科技出版社 编制历史与变更原因：本规程属于海南**制药有限公司第一版文件版次号修订内容描述生效日期00初建。