肠球菌属纸片扩散法药物敏感试验标准操作规程.doc

肠球菌属纸片扩散法药物敏感试验标准操作规程1．目的规范肠球菌属纸片扩散法药物敏感试验标准操作规程，确保药敏结果的准确2．适用范围 本操作规程适用于肠球菌属的细菌3．选药原则3.1现行版本的CLSI M02和M100对肠球菌属细菌纸片扩散法药物敏感试验的要求3.2本单位处方手册中的抗菌药物名册3.3本单位上一年度肠球菌属细菌耐药监控数据4．质控纸片药敏试验应使用金黄色葡萄球菌ATCC25923进行质量控制，质控菌株可接受的抑菌圈范围参见现行版本的CLSI M100-A195．材料和仪器M-H培养基，无菌生理盐水，药敏纸片，无菌棉签，35℃孵育箱，测量尺、标准比浊管或比浊仪6．操作步骤参见《药物敏感性试验标准操作规程》7．判断标准见表5-51.表5-51 肠球菌属细菌纸片扩散试验判断标准 判断标准（mm） 药敏纸片 备注敏感（S） 中介(I) 耐药(R)氨苄西林（10g） ≥17 ≤16 参见结果解释9.1、9.2万古霉素（30g） ≥17 15~16 ≤14 参见结果解释9.3替考拉宁（30g） ≥14 11~13 ≤10 庆大霉素（120g） ≥10 6 参见结果解释 9.4、9.5左氧氟沙星（5g） ≥17 14~16 ≤13 呋喃妥因（300g） ≥17 15~16 ≤14 利奈唑胺（30g） ≥23 21~22 ≤20 磷霉素（200g） ≥21 13~15 ≤12 氯霉素（30g） ≥18 13~17 ≤12 8．注意事项8.1抑菌圈直径量取的范围为包括药敏纸片在内的被药物完全抑制的区域（肉眼判断）。

药敏平板应置于无反光的黑色背景下，用反射光源肉眼观测但万古霉素的抑菌圈应该用透视光源量取测量区域应为肉眼观察无明显可见菌落生长的区域，忽略只有用放大镜才能观察到的位于抑菌圈外缘的细菌菌落如在抑菌圈内任何可辨别的菌落生长，则报告该菌株对万古霉素耐药8.2对肠球菌属细菌而言，头孢菌素、氨基糖苷类（高浓度除外）、克林霉素和复方新诺明体外药敏试验结果可能敏感，但临床治疗无效，因此不应报告为敏感9．结果解释9.1氨苄西林的药物敏感试验结果可代表细菌对氨苄西林和阿莫西林的敏感性在非产酶的肠球菌中，氨苄西林敏感提示菌株对阿莫西林-克拉维酸、氨苄西林-舒巴坦、哌拉西林、哌拉西林-他唑巴坦敏感9.2 纸片扩散法和稀释法均无法准确判断菌株是否由于产β-内酰胺酶而引起对氨苄西林和青霉素的耐药性，因此对于从血液和脑脊液分离的菌株需要用头孢噻吩进行检测菌株是否产β-内酰胺酶，见产色素头孢菌素试验标准操作规程 9.3 在进行肠球菌的万古霉素药物敏感试验时，药敏平板孵育要足24小时，须用透视光源量取抑菌圈直径，对于万古霉素中介的肠球菌应用MIC进行检测，有关耐万古霉素肠球菌的检测参见《万古霉素肠球菌筛选试验标准操作规程》。

9.4 氨苄西林、青霉素或万古霉素与一种氨基糖苷类抗菌药需要先进行菌株对高浓度氨基糖苷类的药物敏感试验（庆大霉素和链霉素），其他氨基糖苷类抗菌药的效果并不比这两种更好，因此无需检测9.5 敏感提示可以与细胞壁活性的抗菌药（如氨苄西林、青霉素和万古霉素等）抗菌药联合使用，7~9mm为不确定，应进行琼脂稀释法或肉汤稀释法进行确认，耐药表明不能与细胞壁活性抗菌联合使用参考文献 [1]CLSI.Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing;Nineteenth Informational Supplement. CLSI document M100-S19.Wayne,PA:Clinical and Laboratory Standards Institute,2009[2] 叶应妩，王毓三，申子瑜主编.全国临床检验操作规程.第三版.南京：东南大学出版社，2006 编写人：AAA、BBB 操作人： 本室操作人员 批准人： 。