氢－ATP酶H -ATPase酶酶联免疫分析试剂盒使用说明书.docx

氢一 ATP酶(H+・ATPase)酶酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用检测范围：96TOgmol/L -3.0nmoi/L使用目的：本试剂盒用于测定微生物样本中氢一ATP酶(H+-ATPase)酶含量 实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中氢一ATP酶(H+-ATPase)水平用纯化的氢一ATP 酶(H+-ATPase)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入氢一ATP随 (H+-ATPase),再与HRP标记的氢一ATP酶(H+-ATPase)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体 更合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色TMB在HRP前的催化卜转化成蓝色，并在酸 的作用下转化成最终的黄色颜色的深浅和样品中的氢一ATP酶(H+-ATPase)呈正相关用 酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，通过标准曲线计算样品中氢一ATP酶 (H+-ATPase)浓度试剂盒组成标本要求130倍浓缩洗涤液20ml X 1 瓶7终止液6ml XI 瓶2酶标试剂6ml X 1 瓶8标准品(4pmol/L)0.5ml XI 瓶3酶标包被板12孔X8条9标准品稀释液1.5ml XI 瓶4样品稀释液6ml XI 瓶10说明书1份5显色剂A液6ml XI 瓶11封板膜2张6显色剂B液6ml XI/瓶12密封袋1个1 .标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。

若不能 马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2 .不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性操作步骤.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释2.0|4mol/L5号标准品150pl的原倍标准品加入150”标准品稀释液1 .Opmol/L4号标准品150^11的5号标准品加入150m标准品稀释液0.5pmol/L3号标准品150m的4号标准品加入150m标准品稀释液0.25pmol/L2号标准品150|11的3号标准品加入150^1标准品稀释液0.125gmol/L1号标准品150m的2号标准品加入150m标准品稀释液.加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、标准孔、 待测样品孔在酹标包被板上标准品准确加样50必待测样品孔中先加样品稀释液40小 然后再加待测样品(样品最终稀释度为5倍)加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀1 .温育：用封板膜封板后置37c温育30分钟2 .配液：将3（）倍浓缩洗涤液用蒸馈水30倍稀释后备用.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此 重复5次，拍干。

3 .加酶：每孔加入酶标试剂50N，空白孔除外4 .温育：操作同35 .洗涤：操作同56 .显色：每孔先加入显色剂A50W，再加入显色剂B50可，轻轻震荡混匀，37℃避光显色 15分钟.7 .终止：每孔加终止液50可，终止反应（此时蓝色立转黄色）1L测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）测定应在加终止 液后15分钟以内进行操作程序总结：准备试剂，样品和标准品加入准备好的样品和标准品，37℃反应30分钟:，屈洗板5次，加入酶标试剂，37℃反应30分钟:R洗板5次，加入显色液A、B, 37c显色10分钟加入终止液15分钟之内读0D值计算计算以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的 OD值由标准曲线查出相应的浓度：再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标 准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数, 即为样品的实际浓度注意事项.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未 用完，板条应装入密封袋中保存1 .浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

2 .各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差一次加样时间最好 控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样3 .请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔如标本中待测物质含量过高（样本OD值 大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计 算时请最后乘以总稀释倍数（XnX5）4 .封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染5 .底物请避光保存6 .严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.7 .所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理8 .本试剂不同批号组分不得混用保存条件及有效期.试剂盒保存::2-8℃o1 .有效期：6个月。