实验五DMEM培养液的配制.ppt

实验五实验五 DMEM培养液的配制培养液的配制【【能力目标能力目标】】熟练掌握DMEM细胞培养液的配制500mL大烧杯 玻璃棒 250mL/500mL盐水瓶 酸度计 50mL小烧杯3个 孔径0.22μm微孔滤膜 一次性滤器 一次性滤纸 去离子水 灭活的小牛血清 DMEM干粉 青霉素 链霉素 NaHCO3 超净工作台 磁力搅拌器 电子天平 药匙【【实验材料实验材料】】DMEM干粉干粉 1瓶瓶(1,000mL量量)NaHCO3 3.7gL-谷氨酰胺谷氨酰胺 0.2g超纯水超纯水 1,000mL【【配方配方】】õõ取清洗干净的500mL大烧杯一个，加入新鲜制备的三蒸水约300mL，加热至15~30℃；õõ将DMEM干粉袋竖立轻弹，使袋中粉下沉，剪开袋口，将干粉倒入500mL的大烧杯中，用超纯水冲洗袋2~3次；õõ放入清洗干净的磁子，在磁力搅拌器充分搅拌，以确保培养基干粉充分溶解；【【配制方法配制方法】】õõ根据配方要求，加入准确称取的NaHCO31.85g，L-谷氨酰胺0.1g，充分摇匀至完全溶解；õõ加入已经制备好的双抗溶液，使青霉素和链霉素的最终使用浓度达到100μg/mL；õõ加入培养基总体积约10％的已灭活的小牛血清；【【配制方法配制方法】】õõ用浓度为7.4％的NaHCO3溶液调整溶液的pH值为7.2~7.4，加超纯水定容，并将培养液转入盐水瓶；õõ用一次性滤器过滤上述培养液到灭菌的盐水瓶，封口，4℃保存备用。

配制方法配制方法】】实验五实验五 1M HCl的配制的配制 1M NaOH的配制的配制250mL烧杯 玻璃棒 250mL盐水瓶 一次性滤纸 去离子水 电子天平 药匙 5mL移液器 5mL吸头 NaOH 浓HCl【【实验材料实验材料】】 用5mL的移液器准确移取盐酸21mL，加入到279mL超纯水中HCl的配制过程的配制过程】】【【NaOH的配制过程的配制过程】】NaOH 10g超纯水超纯水 250mL边加边搅拌，溶解过程会产热边加边搅拌，溶解过程会产热【【课程安排课程安排】】1、每组确定本组的、每组确定本组的D-Hank’s液是否有？液是否有？是否已过滤除菌；是否已过滤除菌；2、每组的、每组的EDTA需要高压灭菌；需要高压灭菌；3、需要配制新鲜的、需要配制新鲜的1M HCl和和1M NaOH溶液，以及溶液，以及7.4％的％的NaHCO3溶液；溶液；4、需要重新灭菌、需要重新灭菌5mL枪头；枪头；5、每组准备一铝饭盒，内放小剪刀一把，、每组准备一铝饭盒，内放小剪刀一把，小镊子一把，手术钳一把，大剪刀一把，小镊子一把，手术钳一把，大剪刀一把，高压灭菌；高压灭菌；【【课程安排课程安排】】6、每组准备培养皿两套，干烤灭菌；、每组准备培养皿两套，干烤灭菌；7、需要重新配制双抗溶液。

需要重新配制双抗溶液。