肥胖汉族儿童黑皮质素4受体（MC4R）基因筛查研究.pdf

浙江大学硕士学位论文肥胖汉族儿童黑皮质素4受体（MC4R）基因筛查研究姓名：王春林申请学位级别：硕士专业：儿科学（内分泌）指导教师：梁黎20060501浙江大学硕士学位论文肥胖汉族儿童黑皮质素4 受体( M C 4 R ) 基因筛查研究浙江大学医学院硕士研究生导师儿科学( 内分泌)王春林梁黎主任医师中文摘要研究背景随着分子遗传学的进展，基因突变在介导肥胖症发，} ^ 中的作用越来越受到人们的关注，研究发现肥胖是多基因遗传病t 国外研究证实黑皮质索4 受体( M e l a n o c o r t i n 一4r e c e p t o rM C 4 R ) 基因与体重调节密切相关I g C 4 ．, ? 是6 种已被发现的黑皮质素受体( M C ．8 , M e l a n o c o r t i nr e c e p t o r ) 之一它由3 3 2 个氨基酸残基组成，是7 种跨膜G 蛋白耦联受体家族的成员乏一人类M C 4 R 编码基因是一个由9 9 6 个碱基对构成的单一外显子，位于1 8 号染色体长臂上对丁M C 4 R 基因突变在调节人类体重变化中重要性的研究始于1 9 9 8 年。

到目前为止，已有十余个M C 4 R 突变位点被相继报道膨鲫基因突变( 包括多态性) 发生率约为2 ～6 ％随着各国对肥胖患者删P 基因的研究，框架移位，错义突变及无义突变等不断被发现，然而亚洲地区鲜有报道目的我们对浙江省肥胖儿童和青少年进行M c 4 R 基因的突变筛查，以期发现该基因在中国人群中是否存在特异性突变情况、探讨该突变是否与肥胖发生密切相关方法对2 0 0 名肥胖及1 0 0 名正常体重汉族儿童利用P C ／? 及基因测序技术进行1 4 C 4 R浙江大学硕士学位论支基因筛查，同时对2 0 0 名肥胖汉族儿童进行生化检测和空腹口服葡萄糖耐量试验、胰岛素释放试验，观察M C t R 突变组和非突变组的丙氨酸氨基转移酶( A L T ) 、门冬氨酸氨基转移酶( A S T ) 、甘油三酯( T G ) 、胆固醇( C H O ) 、总体胰岛素敏感指数( W B I S I ) 的差异结果( I ) 2 0 0 例肥胖汉旗患几中检出杂合子错义突变、无义突变3 例；1 0 0 例对照组中术检山突变：V a l l 0 3 1 1 e 基因多态性肥胖组和正常体重儿童组分别有6 例和2 例。

肥胖组年¨对照组中各检出一例变异( t e u 2 3 A r g ) ，L e u 2 3 A r g 可能为新发现的№4 R 基因多态性肥胖组中发现了3 个新的杂合子突变位点V a l l 6 6 I l e 、C y s 2 7 7 S t o p 、A r 9 3 l O L y s 2 ) M C 4 R 突变组和非突变绍的肥胖汉族儿童B M I 、A L T 、A S T 、T G 、C H O 、W B I S I 比较均无统计学意义( 尸> 0 ．0 5 ) 汉族肥胖儿童M C 4 R 基因突变率为1 ．5 ％’‘ 结论( 1 ) 首次在汉族人群中发现了M C 4 R 基因3 个新的杂合子突变位点( V a l l 6 6 1 1 e 、C y s 2 7 7 S t o p 、A r 9 3 1 0 L y s ) 2 ) L e u 2 3 A r g 可能是汉族人群g C 4 R 的基因多态性2新扛大学硕士学位论文S e v e r a lM u t a t i o n si nt h eM e l a n o c o r t i n4R e c e p t o rG e n ea r eA s s o c i a t e dw i t hO b e s i t yi nC h i n e s eC h i l d r e na n dA d o l e s c e n t sD e p a r t m e n to f E n d o c r i n o l o g y , T h eC h i l d r e n §H o s p i t a lo f Z h e j i a n gI n t r o d u c t i o nU n i v e r s i t yS c h o o lo f M e d i c i n eP o s t g r a d u a t eS t u d e m ：W a n gC h u n l i nS u p e r v i s o r ：L i a n gL iA B S T R A C TT h eg e n e t i cb a s i sf o rh u m a no b e s i t yi sl a r g e l yu n k n o w n ．R e c e n t l ym u t a t i o n si nt h eg e n ee n c o d i n gt h em e l a n o c o r t i n4r e c e p t o r ( M C 4 R ) a r er e p o r t e dt ob ea s s o c i a t e dw i t ht h em o s tc o m m o nm o n o g e n i cf o r mo fo b e s i t yi nb o t hh u m a n sa n dr o d e n t s ．T h eM C 4 Rb e l o n g st ot h el a r g es u p e r f a m i l yo fGp m m i n - e o u p l e dr e c e p t o r s ( O P C 鼬) ．I ti sf o u n dt h a t2 - 6 ％o fs e v e r e l yo b e s ei n d i v i d u a l sa r eh e t e r o z y g o u sf o rf u n c f i o n a I l yr e l e v a n tn o n - s y n o n y m o u s , f r a m e s h i f ta n dn o n s e n s eM C 4 Rm u t a t i o n s ．U pt on o wm o s ts c r e e n i n gf o rM C 4 Rm u t a t i o n sh a v eb e e nd o n ei nC a u c a s i a ni n d i v i d u a l s ．O n l yt h l ℃es t u d i e si n v o l v e di n d i v i d u a l sf r o mA s i a ．T h u st h ei m p a c to fM C 4 Rm u t a t i o n so nt h ed e v e l o p m e n to fo b e s i t yi nA s i a np o p u l a t i o n si so u r r e n t l yu n k n o w n ．T h ef r e q u e n c yo f M C 4 Rm u t a t i o n si nC h i n e s ep o p u l a t i o nh a sn o tb e e nr e p o r t e d ．O b j e c t i v eT os e a r c hf o rm u t a t i o n si nt h eM C 4 Ri no b e s ea n dn o r m a lw e i g h tC h i n e s ec h i l d r e na n da d o l e s c e n t s ．3————；塑望奎堂堡主兰垡笙奎M a t e r i a I sa n dM e t h o d sT h r e eh u n d r e dC h i n e s ec h i l d r e nm a da d o l e s c e n t s , i n c l u d i n g2 0 0o 嘁a n d1 0 0n o r m a lw e i g h ti n d i v i d u a l s ，w e r ee v a l u a t e d ．T h ec o d i n gr e g i o no ft h eM C 4 Rg e n ew a sa m p l i f i e db yP C Ra n ds e q u e n c e d ．I nt h eo b e s eg r o u p ，o r a lg l u c o s et o l e r a n c et e s t s ( O G T T ) w e r ep e r f o r m e db yi n g e s t i o no f1 ．7 S g ／k gg l u c o s e ( m a x i m u m7 5 曲a f t e ra no v e r n i g h tf a s ta n ds u b s e q u e n tm e a s u r e m e n to fp l a s m ag l u c o s el e v e l sb yt h eg l u c o s eo x i d a s em e t h o dS e r u mi n s u l i nl e v e l sw e r ed e t e r m i n e db yr a d i o i m m u n i t ya s s a y ．A n dp l a s m aa l a n i n ea m i n o t r a n s f e r u s e ( A L T ) ，a s p a r t a t ea m i n o t r a n s f e r a s e( A S T ) 。

t r i g l y c e r i d e ( T G ) a n dc h o l e s t e r o l ( C H O L ) w e r em e a s u r e db yr o u t i n el a b o r a t o r yt e s t ．T h ew h o l eb o d yi n s u l i ns e n s i t i v i t yi a d e xW a sc a l c u l a t e d ．R e s u l t s( 1 ) I no b e s ei n d i v i d u a l s ，w ed e t e c t e dt w on o v e lh e t e r o z y g o u sn o n - s y n o n y m o u sm u t a t i o n s( c ．4 9 6 G > A ，r e s u l t i n gi nV a i l 6 6 1 1 e ；c ．9 2 9 G 姐，r e s U a n gi nA r 9 3 1 0 L y s ) a n dan o v e lh e t e r o z y g o u sn o n s e r l ∞m u t a t i o n ( c ．8 3 l T > A ，r e s u l t i n gi nap r e m a t u r es t o pc o d o nC y s 2 7 7 S t o p ) ．I nb o t ho b e s ei n d i v i d u a l sa n dt h ec o n t r o l s ，an o v e lh e t e r o z y g o u sn o n - s y n o n y m o u sm u t a t i。