梅毒的血清学试验.ppt

梅毒的血清学试验梅毒的血清学试验检验科 李修敏梅毒的病原学梅毒的病原学l苍白螺旋体：细长螺旋形，原核微生物，长7-14微米，不易着色，普通显微镜不易看到，可用暗示野显微镜观测到人体的免疫学反应人体的免疫学反应l非特异性抗心脂质抗体可用牛心脂质检测出l抗梅毒螺旋体抗体可用梅毒螺旋体检出梅毒的血清学试验梅毒的血清学试验l非螺旋体抗原血清试验（抗原：心磷脂 胆固醇 卵磷脂） 临床意义：初筛 疗效评价 复发及再感染的判断l螺旋体抗原血清试验（抗原：精选的梅毒螺旋体抗原片段） 临床意义： 诊断试验 是否感染过梅毒 无法评价疗效非螺旋体抗原血清试验非螺旋体抗原血清试验 镜下判读结果l性病研究实验室试验（VDRL）Venereal Disease Research Laboratoryl非加热血清反应素试验（USR）Unheated Serum Reaging 肉眼判读结果l快速血浆反应素试验(RPR)Rapid Plasma Reagingl甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)Toludine Red Unheated Serum Test试验方法（试验方法（TRUST)l试剂复温（23℃-29℃）l试剂与血清等量混匀，水平转动8分钟。

l结果判断：中等或大的红色凝聚物为阳性反应；较小的红色凝聚物为弱阳性反应；无凝聚物为阴性反应存在的问题存在的问题◆假阳性 1、生物学假阳性：见于瘤型麻风、疟疾、系统性红斑狼疮、硬皮病、雅司病、回归热、钩端螺旋体病、血吸虫病、包虫病、旋毛虫病、支原体肺炎、传染性单核细胞增多症、结核病等疾 2、人为因素：试剂与血清反应后放置时间过长，因干燥在纸片上留下假性凝集；没有做阴性对照，肉眼判定错误；标本错误 ◆假阴性 反应时间不足、反应方式不正确、反应温度不够、前带现象 螺旋体抗原血清试验螺旋体抗原血清试验l荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验(FTA-ABS)l梅毒螺旋体血球凝集试验（TPHA)l梅毒螺旋体被动微粒凝集试验(TPPA)lELISA法梅毒抗体检测l胶体金法梅毒抗体检测ELISA法梅毒抗体检测法梅毒抗体检测l全自动酶免仪、全自动洗板机l半自动酶免仪、半自动洗板机l手工法l操作步骤及原理同其它免疫项目注意的问题注意的问题l实验器材的计量（酶免仪、洗板机、恒温箱、冰箱、空调、生物安全柜、精确移液器、量筒、振荡器、温度计）l环境温度：室温（18℃-23℃）l人员培训l样本的要求l实验前试剂的复温l精确的加样：移液器的正确使用续移液器的使用续移液器的使用l吸液的操作 : 1、连接恰当的吸嘴；2、按下控制钮至第一档； 3、将移液器吸嘴垂直进入液面下 1-6mm （视移液器容量大小而定）； 0.1-10ul 容量的移液器进入液面下1-2mm 2-200ul 容量的移液器进入液面下 2-3mm 1-5ml 容量的移液器进入液面下 3 -6mm 注：为使测量准确可将吸嘴预洗 3 次，即反复吸排液体 3 次。

4、使控制钮缓慢滑回原位； ---！！！5、移液器移出液面前略等待 1-3 秒； 1000ul 以下停顿 1 秒 5-10ml 停顿 2-3 秒 . 6、缓慢取出吸嘴，确保吸嘴外壁无液体续移液器的使用续移液器的使用l排液的操作 : 1、将吸嘴以一定角度抵住容量内壁； 2、缓慢将控制钮按至第一档并等待约 1 － 3 秒； 3、将控制钮按至第二档过程中，吸嘴将剩余液体排净； 4、慢放控制钮； 5、按压弹射键弹射出吸嘴 续移液器的使用续移液器的使用l养护： 1、如液体不小心进入活塞室应及时清除污染物； 2、移液器使用完毕后，把移液器量程调至最大值，且将移液器垂直放置在移液器架上； 3、根据使用频率所有的移液器应定期用肥皂水清洗或用 60 ％的异丙醇消毒，再用双 蒸水清洗并晾干； 4、避免放在温度较高处以防变形致漏液或不准； 5、发现问题及时找专业人员处理 注意的问题注意的问题l加样：l加酶标液：l加底物：l加终止液：l震荡：l盖膜：l洗板：l洗涤液的要求l握板的要求注意的问题注意的问题l比色：l孵育时间：l操作时差的问题：l质控问题：内部质控、外部质控l影响ELISA测定结果的干扰因素外源性干扰因素：溶血、细菌污染、标本保存不当、标本凝集不全、添加剂内源性干扰因素：RF、补体、嗜异性抗体等结果解释结果解释l图标演示三种梅毒血清三种梅毒血清 学试验的结果解释学试验的结果解释试验结果意义RPR+FTA-ABS+TPPA+梅毒RPR+FTA-ABS-TPPA-生物学假阳性RPR-FTA-ABS+TPPA-极早期梅毒RPR-FTA-ABS+TPPA+治愈梅毒RPR-FTA-ABS-TPPA-排除梅毒、AIDS合倂感染先天性梅毒的确证指标先天性梅毒的确证指标l暗示野查到梅毒螺旋体l患儿RPR滴度持续上升（出生后6个月内每隔1个月查1次滴度）lRPR滴度高于其母亲l患儿检出抗梅毒19s-IgMl具备以上指标之一即可诊断神经梅毒的实验室诊断神经梅毒的实验室诊断l脑脊液VDRL+(不是RPR)l血清特异性螺旋体抗体+ 谢谢大家谢谢大家。