芍药苷对PFOS致小鼠肝脏氧化损伤的保护研究.docx

    芍药苷对PFOS致小鼠肝脏氧化损伤的保护研究    李赞 严定逸 姜冉 陆康 曹亚利 陈兰华 罗敏 黄春霞【Summary】 目的 研究不同浓度的芍药苷对全氟辛烷磺酸基化合物（PFOS）损伤小鼠肝脏的抑制作用方法 通过给小鼠灌服全氟辛烷酸钾（10 mg/kg，连续 灌胃18 d）建立小鼠肝脏氧化损伤模型建模后，40只小鼠采用随机数表的方法分为模型对照组，高、中、低剂量组[芍藥苷100、50、10 mg/（kg·d）]及阳性对照组[益肝灵片100 mg/（kg·d）]，连续灌胃给药3周分别检测小鼠血清和肝脏各种酶的水平，包括ALT、AST和血清碱性磷酸酶（ALP）以及肝脏丙二醛和超氧化物歧化酶（SOD），另外采用HE染色法检测肝脏中组织学是否发生改变结果 芍药苷不仅使肝脏中的SOD水平升高，而且使丙二醛水平降低（P均< 0.05），进而有效缓解了PFOS导致的肝脏氧化损伤;芍药苷能有效降低小鼠血清ALT、AST及ALP的水平（P均< 0.05），有效缓解PFOS导致的肝脏氧化损伤;在病理学上，芍药苷能有效改善PFOS导致的肝组织淤血、肝脏局部组织紊乱、细胞及组织水肿、炎症细胞浸润、局部组织坏死;PFOS对于小鼠体质量增长起到了抑制作用;在给予芍药苷治疗后，小鼠的体质量抑制得到缓解（P均< 0.05）。

结论 PFOS可以引起肝脏的氧化应激反应，在一定程度上对肝脏组织造成氧化性损伤，芍药苷对于PFOS导致的肝脏氧化损伤具有一定的保护作用Key】 芍药苷;全氟辛烷磺酸基化合物;肝损伤;抗氧化损伤Protective effect of paeoniflorin on PFOS-induced oxidative liver damage in mouse models Li Zan△， Yan Dingyi， Jiang Ran，Lu Kang， Cao yali， Chen Lanhua， Luo Min， Huang Chunxia. △Changsha Medical University，Changsha 410219， ChinaCorresponding author， Huang Chunxia， E-mail： 1923778@【Abstract】 Objective To investigate the effect of perfluorooctane sulfonate （PFOS） in mice. Methods The mouse models of oxidative liver injury were established by gavage of potassium perfluorooctane at a dose of 10 mg/kg for consecutive 18 d. After model establishment， 40 mice were divided into the model control group， high-dose， medium-dose and low-dose paeoniflorin groups （100 mg/（kg·d）， 50mg/（kg·d）， 10mg/（kg·d）） and positive control group （100 mg/（kg·d）， Yiganling tablet） by random number table method， and were given with intragastric administration for consecutive 3 weeks. The serum levels of alkaline phosphatase （ALP）， aspartate aminotransferase （AST） and alanine aminotransferase （ALT）， and the levels of superoxide dismutase （SOD） and malondialdehyde （MDA） in the liver tissues of mice were determined. The histological changes of liver were observed by hematoxylin-eosin staining. Results Paeoniflorin significantly increased the SOD level， whereas decreased the MDA level in the liver tissues （both P < 0.05）， thereby effectively alleviating the oxidative liver damage caused by PFOS. Paeoniflorin could significantly reduce the serum levels of ALT， AST and ALP （all P < 0.05）， and effectively mitigated the oxidative liver damage caused by PFOS. Pathologically， paeoniflorin could effectively alleviate liver tissue congestion， local liver tissue disorder， cell and tissue edema， inflammatory cell infiltration， and local tissue necrosis induced by PFOS. PFOS could also inhibit the weight gain of mice. After paeoniflorin treatment， the inhibitory effect upon mouse weight was significantly alleviated （all P < 0.05）.Conclusions PFOS can provoke oxidative stress responses to the liver， and lead to oxidative liver injury to certain extent. Paeoniflorin exerts certain protective effect on the development of oxidative liver injury caused by PFOS.【Key words】 Paeoniflorin; Perfluorooctane sulfonate compound; Liver injury; Anti-oxidative damage目前，环境污染问题越来越受到重视，其中全氟磺酸类化合物，主要是全氟辛烷磺酸基化合物（PFOS），会对肝脏造成强烈的氧化损伤;因为全氟辛烷磺酸类物质的使用范围非常大，所以在人和动物体内都发现了一定浓度的PFOS，严重危害人类和其他生物的健康[1]。

然而，芍药苷作为药物的主要活性物质之一，具有抗氧化损伤和无副作用的特点，通过探索其对PFOS致肝氧化损伤小鼠模型的保护作用，不仅为其他类型的药物所导致的肝脏损伤治疗提供了借鉴方法，而且为新药物的研制开辟了道路材料与方法一、材 料1.药物与试剂生理盐水、蒸馏水、HE染液、全氟辛烷酸钾（纯度98% 100 g）、芍药苷（纯度98%，HPLC 500 mg）由上海吉至生物科技有限公司生产益肝灵片（有效成分水飞蓟，规格：38.5 mg/片）由陕西利君现代中药有限公司生产检测血清ALT、AST、ALP水平和肝脏丙二醛、超氧化物歧化酶（SOD）水平的试剂盒由湖南圣湘生物科技有限公司生产2.实验动物选择健康雄性昆明小鼠（25～30 g）40只，小鼠由长沙天勤生物技术有限公司提供按照实验动物管理委员会制定的环境标准给小鼠自由喂食、饮水，每日定时称重规律性饲养1周，随后进行实验二、实验方法与流程1.实验动物的建模、分组给小鼠灌服全氟辛烷酸钾（10 mg/kg，连续灌胃18 d）建立小鼠肝脏氧化损伤模型40只小鼠采用随机数表的方式分为模型对照组、阳性对照组、低剂量芍药苷组（低剂量组）、中剂量芍药苷组（中剂量组）及高剂量芍药苷组（高剂量组），分别给予生理盐水、益肝灵片溶液、10 mg/（kg·d）、50 mg/（kg·d）、100 mg/（kg·d）的芍药苷溶液连续灌胃3周，每次给药0.1～0.2 mL，分别记录各组小鼠的体质量变化，同时注意各组小鼠的精神行为学有无差异[2]。

本实验符合动物实验相关伦理规范2.方 法最后1次给药后隔24 h，小鼠称重，从小鼠眼球中抽取2 mL血液，以3000 r/min的速度进行离心处理，10 min后提取上清液，检测血清ALT、AST及ALP的水平，按试剂说明书和生化分析仪的使用方法进行测定后立即颈椎脱臼处死小鼠，取出肝脏用于制备组织匀浆模型，测定丙二醛、SOD以及肝脏HE染色操作方法为用电子秤称取肝脏组织50 mg装入无菌试管中，加入预冷的生理盐水，采用冰浴的方法进行匀浆处理，使肝脏中的匀浆液水平达到10%，然后以3000 r/min的速度进行离心处理，10 min后提取上清液，按试剂盒要求检测小鼠肝组织匀浆丙二醛及SOD的活性，其他剩余肝脏组织用甲醛固定后用于病理学检测三、统计学处理采用SPSS 25.0分析数据，正态分布资料采用 表示，多组间比较采用单因素方差分析，多重比较（各剂量组与对照组）采用LSD-t检验，α=0.05结 果一、芍药苷对PFOS导致的肝脏氧化损伤起保护作用阳性对照组和低剂量组丙二醛水平与模型对照组比较差异均无统计学意义（P均> 0.05）;相反，高剂量组和中剂量组与模型对照组比较差异有统计学意义（P均< 0.05）。

阳性对照组、低、中剂量组SOD水平与模型对照组比较差异均无统计学意义（P均> 0.05），高剂量组SOD水平与模型对照组比较差异有统计学意义（P < 0.05），见表1与模型对照组相比，阳性对照组、中、高剂量组均能降低小鼠血清ALT、AST及ALP的水平（P均< 0.05），与阳性对照组比较，低、中剂量组不能降低血清ALT、AST、ALP水平，差异均无统计学意义（P均> 0.05），高剂量组可以降低血清ALT、AST水平，差异均有统计学意义（P均< 0.05），见表2二、芍药苷改善了PFOS导致的肝脏病理学变化由于PFOS的存在，导致小鼠的肝脏病理学发生了显著改变，在病理学上表现为肝组织淤血、肝脏局部组织紊乱、细胞及组织水肿、炎症细胞浸润、局部组织坏死，见图1A在经给予药物益肝灵片以及芍药苷后，肝脏组织损伤得到缓解，肝脏病理学改变明显减轻随着芍药苷浓度的增加，肝脏修复情况呈现阶梯型变化，图1C、D、E与图1B对比发现，芍药苷同益肝灵片均能对肝脏损伤起到一定的治疗作用三、芍药苷能有效缓解PFOS对小鼠体质量抑制作用模型对照组体质量为（35.54±1.82）kg，阳性对照组为（37.96±1.38）kg，低、中、高剂量组分别为（36.19±2.61）（37.55±1.16）（37.86± 1.75）kg，模型对照组相比其他4组体质量低，以模型对照组为基准，发现除低剂量组外其他3组差异均有统计学意义（P均< 0.05），表明PFOS可能对小鼠的体质量增长具有一定的抑制作用，而芍药苷可能在一定程度上能缓解PFOS对小鼠体质量增长的抑制作用。

讨 论PFOS广泛应用于各行各业，PFOS在广泛运用之时造成了一系列污染问题[3]PFOS在生。