药物分析课件版第四章药物的含量测定方法与验证.ppt

1第四章 药物的含量测定方法与验证药物分析教研室二、样品分析的前处理方法一、定量分析方法的分类与特点 三、药品质量标准分析方法验证 主要内容 第四章 药物的含量测定方法与验证2第一节 定量分析方法的分类与特点药物含量测定方法容量分析法光谱法(紫外、荧光分析法）色谱法(TLCS、HPLC、GC）3容量分析法 操作简单、快速、结果准确、仪器廉价易得方法专属性差 适用于成分单一无干扰，成分含量较高的试样，广泛应用于化学原料药的含量测定 相对误差在0.2%以下一 、特点 第一节 定量分析方法的分类与特点4容量分析法 滴定度：每1ml规定浓度的滴定液所相当的被测药物的质量，ChP用mg表示 T(/ml) = mb * * Ma二 、计算方法 第一节 定量分析方法的分类与特点ab直接滴定法间接滴定法（生成物滴定法、剩余滴定法）5光谱分析法1、紫外-可见光光度法（UV）2、荧光分析法（FR）3、原子吸收分光光度法(AAS)4、红外分光光度法(IR)第一节 定量分析方法的分类与特点6光谱分析法1、紫外-可见光光度法（UV）特点：灵敏度高，10710-4g/ml 准确度高，RSD 2%-5% 仪器价格较低，操作简单。

缺点：专属性较差，对结构相近的有关物质缺乏选择性；混合成分和辅料有干扰不适用此法第一节 定量分析方法的分类与特点7光谱分析法1、紫外-可见光光度法（UV） 计算方法：注意单位换算 第一节 定量分析方法的分类与特点8C：g/100ml;L: 1cm;A = ECL光谱分析法2、荧光分析法（FR）特点： 灵敏度高，10-12 10-10g/ml； 浓度高易“自熄灭”，低浓度； 干扰因素多，须做空白； 应用范围窄； 取样少，分析速度快 第一节 定量分析方法的分类与特点9色谱分析法1、TLCS2、GC3、HPLC4、GC-MS，HPLC-MS第一节 定量分析方法的分类与特点10色谱分析法1 、HPLC（高效液相色谱法）特点：仪器自动化程度高； 高专属性，同时分离分析多组分； 灵敏度高， 10-15 10-12g/ml； 所需样品量少（5-20ul）； RSD 2%以下第一节 定量分析方法的分类与特点11典型的仪器配置12美国戴安公司液相色谱仪13色谱分析法1 、HPLC（高效液相色谱法）系统适用性试验： （1）理论塔板数 （衡量色谱柱柱效的指标）第一节 定量分析方法的分类与特点1415第一节 定量分析方法的分类与特点色谱分析法系统适用性试验：（2）分离度（也叫色谱图的分辨率）第一节 定量分析方法的分类与特点16系统适用性试验：（3）拖尾因子T拖尾因子T（0.95-1.05）或不对称度：AS=b/aat 10%Heightat 5% Height17第一节 定量分析方法的分类与特点系统适用性试验：（4）重复性（RSD%） 取各品种项下的对照溶液,连续进样5次,除另有规定外,其峰面积测定值的相对标准差应2.0%18第一节 定量分析方法的分类与特点色谱分析法色谱分析法含量计算 a、内标法：避免因样品前处理及进样体积误差对结果的影响第一节 定量分析方法的分类与特点19取含有内标物的供试品溶液进样测定A取内标物和待测组分的对照液进样计算校正因子色谱分析法含量计算b、外标法：标准曲线法、外标一点法第一节 定量分析方法的分类与特点20要求进样量准确及操作条件稳定，用定量环或自动进样器色谱分析法2 、GC（气相色谱法）特点：仪器自动化程度高； 同时分离分析多组分； 样品易被气化（250）； 所需样品量少（1-5l）； RSD 2%以下。

第一节 定量分析方法的分类与特点21色谱分析法第一节 定量分析方法的分类与特点22标准溶液加入法 精密称量被测组分的对照品，配置成适当浓度的对照品溶液，取一定量，精密加入到供试品溶液中，依据内标法或外标法测定含量，再扣除加入对照品的含量，即得 第二节 样品分析的前处理方法 样品前处理 前处理对象 以上药物在进行鉴别、检查及含量测定前,需要经过不同方法处理后,方可进行测定.1.含卤素元素（F、Cl、Br、I）2.金属元素（Ca、Fe、Hg、Zn、Sn、Bi)3.含As、Pb、N、P、S等元素4.生物样本23泛影酸碘番酸碘苯酯 含卤卤元素药药物24 含卤元素药物磺溴酞钠三氯叔丁醇25酒石酸锑钾富马酸亚铁 含金属元素药物26 含As元素药物含重金属有机药物卡巴胂金属有机药物27 样品前处理 前处理样品分类有机卤素药物1 卤素与脂肪链的碳原子相连 结合不牢固2 卤素与芳环相连结合牢固 1 金属离子不直接与碳原子相连 在溶液中可直接离解出金属离子.2 金属离子直接与碳原子以共价键相连.结合状态比较牢固,在溶液中不能直接离解出金属离子.含金属有机药物第二节 样品分析的前处理方法28 样品前处理 根据卤素或金属在分子中结合牢固程度不同处理方法而异不经有机破坏的前处理经有机破坏的前处理1.直接测定法2.经水解后测定法3.经氧化还原后测定法1.湿法破坏法2.干法破坏法前处理方法第二节 样品分析的前处理方法29 样品前处理 1 直接测定法2 经水解后测定法3 经氧化还原后测定法不经有机破坏的分析方法第二节 样品分析的前处理方法30 样品前处理 （1 ）金属离子不直接与碳原子相连乳酸钙1 直接测定法第二节 样品分析的前处理方法例1：乳酸钙含量测定 0.3g+水100ml 放冷+NaOH 15ml EDTA滴定 钙紫红素指示剂31 样品前处理 (2)金属离子直接与碳原子以共价键相连富马酸亚铁 例2：富马酸亚铁含量测定 富马酸亚铁溶于热硫酸,同时分解释放出亚铁离子,可选用铈量法进行测定.邻二氮菲为指示剂.第二节 样品分析的前处理方法32适用于卤素原子与脂肪链的碳原子相连,结合不牢固药物.CCl3C(CH3 ) 2 OH 三氯叔丁醇 不经有机破坏的方法 2 经水解后测定法第二节 样品分析的前处理方法33将含卤素的有机药物溶于适当溶剂（如乙醇）中,加氢氧化钠溶液或硝酸银溶液后,加热回流使其水解,将有机结合的卤素,经水解作用转变为无机的卤素离子,然后选用间接银量法进行测定. 不经有机破坏的方法 （1）直接回流后测定法（碱水解法）第二节 样品分析的前处理方法34 三氯叔丁醇CCl3C(CH3 ) 2 OH + NaOH (CH3 ) 2 CO+NaCl + HCOONa NaCl + AgNO3 AgCl+NaNO3 AgNO3 + NH4SCN AgSCN+NH4NO335 六氯对二甲苯（Hexachloro-p-xylene） +6AgNO3+6H2O 加入AgNO3加热回流完全后,可用硫氰酸铵标准溶液直接滴定剩余的硝酸银,以求得含量. 36 不经有机破坏的方法 硬脂酸镁与定量硫酸共沸、水解生成硬脂酸和硫酸镁,剩余的酸以氢氧化钠滴定 Mg(C17H35COO)2 +H2SO4 MgSO4 + 2 C17HCOOH H2SO4 + NaOH Na2SO4 + H2O 适用于金属原子与脂肪链的碳原子相连,结合不牢固药物.（2）用硫酸水解后测定法第二节 样品分析的前处理方法37 不经有机破坏的方法 3 经氧化还原后测定法（1）碱性还原后测定 卤素结合于芳环上,由于碘原子的结合较牢固,需在碱性溶液中加还原剂（如锌粉）,加热回流,使碳-碘键断裂,形成无机碘化物后测定. 第二节 样品分析的前处理方法38泛影酸（卤素原子与芳环相连,化学键牢固） +3NaI+2CH3COONa+3Na2ZnO2+3H2O Zn粉NaI+AgNO3 AgI +NaNO3曙红钠为吸附指示剂 黄色玫瑰红色39 不经有机破坏的方法 （2）利用药物中可游离的金属离子的氧化性测定含量含锑药物Sb5+具有氧化性,在酸性下氧化KI定量析出I2，可用Na2S4O6 滴定例如：葡萄糖锑钠 Sb5+2KI Sb3+ +I2 I2 +2Na2S2O3 2NaI +2Na2S4O6 第二节 样品分析的前处理方法40经有机破坏的方法 有机卤素及金属的药物结构中的卤素或金属离子与碳原子结合牢固者,用水解或氧化还原难以成为无机形式,此时必须采用有机破坏的方法,使之转变为可测定的无机离子,方可进行测定.有机破坏方法第二节 样品分析的前处理方法411 湿法破坏法2 干法破坏法经有机破坏的方法1 湿法破坏法 硝酸-硫酸法 适于大多数有机物质破坏硫酸-硫酸盐法 常用于含砷、锑有机药物 硝酸-高氯酸法 破坏力强,不适于含氮杂环第二节 样品分析的前处理方法42经有机破坏的方法注意事项1 取样量 含金属元素在10 100g范围内,取样10 g 生物样品 血10 15ml;尿50ml2 所用仪器凯氏烧瓶3 空白试验4 通风橱中进行 第二节 样品分析的前处理方法43经有机破坏的方法 适用于含氮杂环,不适于含汞、砷 药物的测定.2 干法破坏1.高温炽灼法 将有机物灼烧灰化以达到分解目的，常加无水碳酸钠或轻质氧化镁以助灰化第二节 样品分析的前处理方法44注意：应控制温度420以下 灰化完全2.氧瓶燃烧法经有机破坏的方法 氧瓶燃烧法是将有机药物放入充满氧气的密闭烧瓶中进行燃烧,并将燃烧所产生的待测物质吸收于适当吸收液中,然后根据欲测物质的性质,采用适当分析方法进行鉴别、检查或含量测定.第二节 样品分析的前处理方法45特点氧瓶燃烧法 快速分解有机药物的最简单方法 不需复杂设备,能使有机结合中的待测元素定量地分解成无机离子状态 适用于含卤素及硫、磷、硒等有机药物分析的前处理,特别适用于微量样品的测定.第二节 样品分析的前处理方法46氧瓶燃烧法仪器装置第二节 样品分析的前处理方法47氧瓶燃烧法 样品 吸收液 测定方法含氟有机药物 H2O 茜素氟蓝 分光光度法含氯有机药物 NaOH溶液 银量法 汞量法 分光法 含溴有机药物 H2O-NaOH液 银量法 分光法 含碘有机药物 H2O-NaOH液 银量法 碘量法 -SO2 饱和溶液 汞量法 分光法氧瓶燃烧法 容量大小随样品量而定,一般500、1000ml. 含氟药物用石英制或聚氯乙烯制的燃烧瓶,因样品燃烧后,产生HF,对玻璃有腐蚀作用,与玻璃中的硼生成氟化硼,BF3在水中不能完全解离,而使测定结果偏低. 硬质玻璃碘瓶第二节 样品分析的前处理方法49氧瓶燃烧法 铂丝下端做成螺旋状,长度约为瓶身的2/3铂丝作用 a 固定样品 b 催化使样品分解完全 瓶塞底部熔封一根铂丝第二节 样品分析的前处理方法50氧瓶燃烧法操作加吸收液通氧燃烧吸收测定取样10-20mg第二节 样品分析的前处理方法51氧瓶燃烧法注意事项 充氧气要充分 使样品燃烧完全,一般急速通氧气12分钟,燃烧完全时没有黑色炭化物.第二节 样品分析的前处理方法52吸收完全一般振摇30,燃烧瓶看不到烟雾Cl、F白色烟雾 Br棕色 I紫色氧瓶燃烧法防爆 样品燃烧时,温度很高,燃烧瓶内压力很大,有爆炸的可能性,必须采取防护措施防护措施戴防护眼镜瓶外包湿毛巾第二节 样品分析的前处理方法53氧瓶燃烧法卤素化合物的燃烧产物氟化物、氯化物 氟或氯以离子状态存在,吸收后可直接测定第二节 样品分析的前处理方法54氧瓶燃烧法溴化物碘化物 溴化物或碘化物,燃烧后以多种价态存在,吸收后应转化为统一价态再测定.第二节 样品分析的前处理方法555656第三节 药品质量标准分析方法验证 药品质量标准分析方法验证指导原则药品质量标准分析方法验证指导原则 收载于中国药典收载于中国药典20102010年版二部附录年版二部附录 化学药物质量控制分析方法验证技术指化学药物质量控制分析方法验证技术指导原则导原则 国食药监注国食药监注20051062005106号号关于发布化学药物稳定性研关于发布化学药物稳定性研究等究等1616个技术指导原则的通知个技术指导原则的通知 二二五年三月十八日五年三月十八日发布发布方法验证方法验证在分析方法建立过程中具有重要在分析方法建立过程中具有重要的作用，并成为质量研究和质量控制的组的作用，并成为质量研究和质量控制的组成部分。

成部分只有经过验证的分析方法才能用于控制药只有经过验证的分析方法才能用于控制药品质量，因此方法验证是制订。