实验八 Fulgen反应与Brachet反应.ppt

实验八 Fulgen反应与Brachet反应一 实验目的了解Fulgen、 Brachet反应的原理，掌握有关的操作方法二 实验原理（ Fulgen反应）nDNA是由许多单核苷酸聚合成的多核苷酸，每个单 核苷酸又由磷酸、脱氧核糖和碱基构成nDNA经1N盐酸水解，其上的嘌呤碱和脱氧核糖之间 的双键打开，使脱氧核糖的第一碳原子上形成游离 的醛基，这些醛基与Schiff试剂反应nSchiff试剂是由碱性品红和偏重亚硫酸钠相作用， 形成无色的品红液，当无色品红与醛基结合形成紫 红色的化合物n紫红色的产生，是由于反应产物的分子内含有醌基 ，醌基是一个发色基团，所以具有颜色nFeulgen反应具有专一性二 实验原理（ Brachet反应）n甲基绿—派洛宁（Methyl green-Pyronin） 为碱性染料，它能分别与细胞内的DNA、 RNA结合而呈现不同颜色n当甲基绿与派洛宁作为混合染料时，甲基绿 和染色质中DNA选择性结合显示绿色或蓝色 ；派洛宁与核仁、细胞质中的RNA选择结合 显示红色三 实验用品（ Fulgen反应）n1 器材：显微镜、恒温水浴锅等n2 材料：洋葱鳞茎或根尖。

n3 试剂：⑴ 1mol/L盐酸⑵ Schiff试剂⑶ 亚硫酸水三 实验用品（ Brachet反应）n1 器材：显微镜等n2 材料：洋葱鳞茎表皮n3 试剂：⑴ Unna试剂： 甲基绿—派洛宁染 液⑵ 1mol/L乙酸缓冲液四 实验方法（ Fulgen反应）n1．将洋葱根尖或鳞茎内表皮放在1N HCl中，加热到 60℃水解8～10 min n2．蒸馏水水洗 n3．Schiff试剂遮光染色30min n4．用新鲜配制的亚硫酸水溶液洗3次，每次1min n5．水洗5min n6．将根尖放在载玻片上，镊子捣碎，盖上盖玻片，压 片（洋葱表皮可省去压片这一步） n7．显微镜检查 n结果：细胞中凡有DNA的部位应呈现紫红色的阳性反 应 四 实验方法（ Brachet反应）n1．用镊子撕取洋葱鳞茎内表皮一小块，置 于载玻片上 n2．滴一滴Unna试剂，染色30min n3．蒸馏水洗两次，吸水纸吸去多余的水分 n4．盖上盖玻片，镜检 五 作业nFulgen反应绘图示洋葱根尖细胞或鳞茎表皮细 胞DNA的分布部位nBrachet反应绘图示细胞中RNA和DNA的分布。