溶液各种配制.doc
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附录：常用试剂配制及应用一、常用缓冲液、试剂的配制碳酸盐缓冲液（Carbonate-Bicarbonate Buffer）由于碳酸盐pH值偏碱，因此，常用于pH>9的缓冲液配制（附表1）附表碳酸盐缓冲液（pH9.2〜10.7 ）pH0.2mol/LNaCO(ml)0.2mol/L NaHCO (ml)pH0.2mol/LNaCO(ml)0.2mol/LNaHCO(ml)9.24.046.010.027.522.59.37.542.510.130.020.09.49.540.510.233.017.09.513.037.010.335.514.59.616.034.010.438.511.59.719.530.510.540.59.59.822.028.010.642.57.59.925.025.010.745.05.0磷酸缓冲液(Phosphate Buffers , PB)磷酸盐是使用最广泛的一种缓冲剂，由于它们是二级解离，有二个 pKa值, 所以用它们配制的缓冲液，pH范围最宽NaHPO4 pKa1= 2.12，pKa2= 7.21 ; N&HPO4 pKa仁 7.21，pKa2= 12.32。
另外，磷酸盐还有钾盐分子形式，一般来说，低温时钠盐难溶，钾盐易溶， 因此，配制细胞培养用试剂时常常添加钾盐试剂，但若配制十二烷基硫酸钠（SDS -聚丙烯酰胺凝胶电泳的缓冲液时，只能用钠盐而不能用钾盐，因为 SDS会与磷酸钾生成难溶的十二烷基硫酸钾磷酸缓冲液的优点为：①可配制成不同离子强度的缓冲液；②适用 pH缓冲 范围较宽；③受温度影响缓冲液pH值变化较小；④离子强度对缓冲液pH影响较 小，如0.1mol/L缓冲液稀释10倍其pH变化小于0.1 0磷酸缓冲液的缺点是：①磷酸盐易与钙离子（CsT）、镁离子（Mg+）及重金 属离子结合生成不溶的沉淀物；②可能干扰某些生物化学反应过程， 如对某些酶的催化活性具有一定程度的抑制作用NaHPQ的pH值偏酸性，可用作pH<4的缓冲液NaHPO的pH值偏碱性，可用作pH>10的缓冲液而pH= 6〜8的中性缓冲液是更常用的缓冲液，需要NaHPQ与NaHPQ两种磷 酸盐混合配制（附表2）附表2. 0.2 mol/L 磷酸盐缓冲液（pH5.7〜8.2 ）pH0.2mol/LNaHPO (ml)0.2mol/LNqH pq (ml)pH0.2mol/LNaHPQ (ml)0.2mol/LNqH PQ (ml)5.793.56.57.039.061.05.892.08.07.133.067.05.990.010.07.228.072.06.087.712.37.323.077.06.185.015.07.419.081.06.281.518.57.516.084.06.377.522.57.613.087.06.473.526.57.710.589.56.568.531.57.88.591.56.662.537.57.97.093.06.756.543.58.05.394.76.851.049.08.14.295.86.945.055.08.23.097.0磷酸盐缓冲溶液(Phosphate-buffered saline, PBS)磷酸盐缓冲液是在磷酸缓冲液基础上添加 NaCI以维持溶液的渗透压，因此,PBS适用于做细胞缓冲液，常用PBS配制如下。
NaCl8gKCl0.2gNaHPQ1.44gKHPQ0.24g在800ml蒸馏水中溶解，用HCI调节溶液的pH值至7.2〜7.4加水定容至1L, 15psi ( 1.05kg/cm2 )高压灭菌20min,室温保存备用Tris 缓冲液(Tris-HCI Buffer, TB )Tris的pH值偏于碱性，因此，通过添加 HCI调节pH至所需值，Tris-HCl 缓冲液的离子强度(mol/L )是专指Tris的浓度，如某一特定pH的0.05 mol/L Tris缓冲液的配制是将50ml 0.1 mol/L Tris碱溶液与附表3所示相应体积(ml) 的0.1 mol/L HCl 混合，加水至将体积 100ml，即为0.05 mol/L Tris 缓冲液另外，按附表3制备的缓冲液，由于试剂来源的不同，缓冲液 pH可能与所 需略有差异，此时可通过稍许减少或增加 HCI用量，精细调节pH至所需值附表4. 0.05 mol/L Tris 缓冲液pH需 0.1 mol/L HCI (ml)pH需 0.1 mol/L HCI (ml)7.145.78.126.27.244.78.222.97.343.48.319.17.442.08.417.27.540.38.514.77.638.58.612.47.736.68.710.37.834.58.88.57.932.08.97.08.029.2Tris盐缓冲液(TBS :Tris盐缓冲液是在Tris缓冲液基础上添加NaCI以维持溶液的渗透压，因 此，TBS也适用于做细胞缓冲液，常用 TBS配制如下。
8g NaCI、0.2g KCI以及3g Tris 溶解于800ml蒸馏水中，加入 0.015g酚 红并用HCI调pH至7.4用蒸馏水定容至1L，分装后在15psi( 1.05kg/cm2 )高 压火菌20min，室温保存现在常用Tris盐缓冲液通常不加pH指示剂，而且该溶液如果不用于细胞培 养，通常不加KCI及酚红Hank' s 液(Ha nk ' s Bala need Salt Solutio n)Hank's液是一种平衡盐溶液，主要用于细胞培养取材时组织块的漂洗、细 胞的漂洗等贮存液A液：(I) NaCI 80gKCI 4gMgSO 7H2O 1gMgC2 - 6H2O 1g用双蒸馏水定容至450mlII) CaCl 2 1.4g ( 或 CaC - 2I4O 1.85g)用双蒸馏水定容至50ml将I和II液混合，即成A液贮存液B液：NaHPO・ 12I4O 1.52g ，KHPQ0.6g,酚红0.2g,葡萄糖10.0g,酚红应先置研钵内磨细，然后按配方顺序一一溶解，用双蒸馏水定容至500ml3)应用液：A、B储存液分别经112.6 C湿热灭菌20min,取A和B液各25ml， 加无菌双蒸馏水至450ml，使用前用无菌的3.5%或5.6% NaHCO调至所需pHo注意：药品必须全部用A.R试剂，并按配方顺序加入，用适量双蒸水溶解， 待前一种药品完全溶解后再加入后一种药品，最后补足水到总量。
无 Ca2+、 Mg+Hank's 液(Hank' s Solution without calcium, magnesium sulfate )NaCl 80g,KCl 4g,NaHPOT2HO 1.52g ，KHPO 0.6g,葡萄糖 10g,用双蒸馏水溶解后，加入 0.4 %酚红溶液50ml，再加入双蒸水至1000ml,112.6 C湿热灭菌20min, 4C冰箱保存临用前将原液用无菌双蒸水作 1 : 10倍稀释，用无菌的3.5%或 5.6% NaHCO调至所需pHopH7.2柠檬酸盐缓冲液(Citrate Buffer)柠檬酸 0.327g柠檬酸钠 2.63g磷酸氢钠 0.222葡萄糖 0.00255mg蒸馏水加至100mlopH3.3 枸橼酸-磷酸盐缓冲液(Citric acid- Phosphate Buffer)0.131mol/L citrate acid , 0.066mol/L NstHPQ,等量混合，调节 pH至 3.30.5 mol/L EDTA, pH 8.0EDTA 2fO 186.1 gNaOH 〜20 g将EDTA 2H2O加入800ml水中，在磁力搅拌器上剧烈搅拌。
用NaOH调节pH 至8.0，EDTA直到接近pH 8.0才完全溶解，定容至1L分装后高压蒸汽灭菌0.4%酚红溶液取酚红0.4g置于研钵中逐滴加入1mol/L NaOH溶液11.28ml，边研磨边使酚红转变为钠盐溶于水中，加双蒸水至 100ml，过滤后，4°C冰箱保存醋酸钾(Potassium Acetate )在60ml 5mol/L醋酸钾溶液中，加入11.5ml冰醋酸和28.5ml水该溶液用于碱性裂解3mol/L 醋酸钠(Sodium Acetate ) ， pH5.2 和 pH7.0在800ml水中溶解408.1g三水醋酸钠，用冰乙酸调pH至5.2或用稀释乙酸调pH至7.0，加双蒸水至1L分装后高压灭菌柠檬酸钠缓冲液(Sodium Citrate Buffer)柠檬酸钠 1.8gHCl(1mol) 4ml无水乙醇 95ml先用100ml去离子水溶解柠檬酸钠，然后加入HCI和无水乙醇，再补充去离子水至总量200ml饱合硫酸铵溶液(Saturated Ammonium Sulfate Solution)取500ml双蒸馏水，加入约400克硫酸铵，水浴加热至70C，磁力搅拌器 充分搅拌，直到加入的硫酸铵不再溶解，以氨水(也可用 NaOH调pH7.2，室温 保存。
二、酶免疫检测常用试剂配制包被液(Coating Buffer) (pH9.5碳酸盐缓冲液)NqCO・10HO 8.58gNaHCO 5.8g溶于双蒸水至1000ml封闭液(Confining liquid) (5%兑脂乳-PBS溶液，pH7.4)脱脂乳 50g力卩0.02mol/L pH7.4 磷酸盐缓冲液(PBS至1000ml溶解洗液(washi ng liquid)氯化钠 8.0g磷酸二氢钾 0.2g磷酸氢二钠(12HC) 2.9g吐温-20 0.5ml加去离子水至1000ml溶解即可终止液(stop buffer) (2mol/L H 2SO):21.7ml H 2SQ加去离子水至200ml缓冲甘油(glycerine buffer)甘油 9 份PB (pH8.0) 1 份将9份甘油与1份PB合并，充分混匀0.5%H2Q-甲醇液(Hydrogen Peroxide-Methanol Solution) (总体积 120ml)20ml3%H2Q甲醇 100mlDAB-H2Q底物缓冲液(DAB- H2Q Substrate Buffer)取 6mg二氨基联苯胺(3,3 ' -Diaminobenzidine Tetrahydrochloride DAB) 溶解于 10ml 0.05mol Tris-HCl pH7.6 。
使用前取 0.3%HO 0.1ml 加入到 DAB。
