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高龄妊娠进行胎儿染色体非整倍体疾病筛查和诊断的相关研究.docx

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  • 卖家[上传人]:杨***
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    •     高龄妊娠进行胎儿染色体非整倍体疾病筛查和诊断的相关研究    Summary:目的:探讨非损伤性DNA产前检查(NIPT)对老年孕妇进行早期诊断的可行性方法:采用回顾性研究的方式,收集本院自2021年1月至2003年1月的NIPT检查对经NIPT检查发现有染色体异常者,行羊膜腔穿刺,观察其染色体组型及 CNV情况,随访妊娠结局结果:在1200名老年妇女中,有22名(1.83%)患有较高的染色体异常在所有患者中,21-三体有10个(0.83%),18-三体有5个(0.42%),13-三体有3个(0.25%),2个(XYY)有2个(XYY)和2个(2个(XYY),其它2个(0.17%)常染色体的改变对20名高危妊娠妇女进行了染色体组型检测,发现15名(75.00%)染色体异常,其中21-三体占100.00%,18-三体占75.00%,13-三体占33.33%,性染色体占50.00%,其它常染色体占50.00%结论:对高龄产妇而言,NIPT已经证明了它作为一种筛查工具的有效性因此,它可以大幅降低对侵入性产前诊断的要求尽管如此,NIPT检测中也有错误的阳性结果,因此,对于具有高危筛查结果的个体来说,干预性产前诊断仍然是必要的,以防止假阳性或无根据的引产。

      Keys:高龄妊娠;无创DNA产前检测;染色体核型分析近几年来,国家对计划生育进行了一系列的调整从2016年开始,国家开始全面放开二孩与此同时,高龄孕妇(advanced maternal age,AMA)人数急剧增加[1]调查显示,我国AMA的比例在2011年为10.1%[2],2016年增加到20.5%[3]人们已经认识到,AMA的妇女将对母亲和婴儿产生不利影响,结果表明:妊娠率降低,自然流产,胎儿染色体异常,高血压等并发症及胎儿死亡率增加[4]特别是,AMA是胎儿染色体异常的重要危险因素面对越来越多的AMA女性,中国的出生缺陷预防形势极其严峻自20世纪70年代以来,羊膜腔穿刺术和胎儿染色体分析一般在AMA的中期进行[5]在我国,这一策略已经实施了10多年,提高了胎儿染色体异常的检测率[6]但产前诊断检测技术较为复杂,女性在做完子宫内注射后可能会出现流产的情况近年来,基于基因工程技术的快速发展,无创性的产前诊断(NIPT)在临床上得到了越来越多地使用,是目前最常用的产前检查手段[8]相对于传统的检查手段, NIPT对21-三体,18-三体,1-3三体,性染色体等基因变异更为敏感,也更为特异。

      且NIPT除了具有优于传统筛查形式的准确性外,还具有检测其他常染色体非整倍性及染色体微缺失/微重复的能力,并提供有关产妇基因组的附带信息等优点为了评价NIPT在AMA常见非整倍体产前筛查中的价值,本研究分析了1200例AMA的NIPT结果1 资料与方法1.1 研究对象本研究选取2021年1月至2003年1月在本院定期做产前筛查和登记的妇女进行调查入选条件:①妊娠妇女35周岁及以上;②检查孕妇的怀孕时间以12-20+6周为准,是否为单胞胎排除:①有其他的产前诊断适应证,例如:B超显示胎儿形态异常或颈透明层(NT)变厚,有染色体异常、遗传综合征、先天畸形家族史;②有染色体异常携带者,有不良妊娠史(生育过染色体异常、遗传综合征或先天畸形的胎儿);②有 NIPT禁忌症:1年之内曾进行过异体输血,移植手术,造血干细胞或免疫疗法;③ NIPT试验不合格者;④未完成 NIPT及妊娠结局的相关数据总共有1200名年龄较大的妇女参与了这项研究受试者平均年龄36.72±1.48岁,孕周12~20 +6周,平均17.31±2.24周本研究经过赤峰市妇幼保健院伦理委会批准,所有孕妇均提供遗传咨询并签署知情同意书。

      1.2 研究方法1.2.1 NIPT检测在赤峰市妇幼保健院抽取孕妇外周血10 mL进行NIPT检测同时,采用 cffDNA的末端损伤与拼接等方法,将样品中的 DNA片段分离出来,得到双股 DNA用 PCR方法对其进行 PCR,获得 DNA序列数据库利用高通量测序方法对样本进行序列测定计算每条染色体的读数比例和Z值Z值在-3到3之间被认为是低风险,≥3的Z值表示三体的高风险,≤-3的Z值表示单体的高风险1.2.2 染色体核型和CNV检测在产前检查中得到高危结果的孕妇接受了遗传咨询,并提供了羊膜穿刺术的知情同意,由产前诊断医生在超声引导下抽取羊水进行产前诊断,以确认NIPT结果提取的细胞进行培养和核型分析,采用标准低渗、固定、成片、G显带和染色处理然后将核型与ISCN2016进行比较分析此外,CNV的诊断是利用羊膜上皮细胞的 DNA,将它切割成一段一段的核酸以一段较短的 DNA为起始模板,利用 PCRFree库建立了该库在此基础上,利用 IlluminaNextseqCN500高通量测序技术,对符合条件的 DNA库进行全基因组测序最后利用基因数据库对结果进行分析以发现受检样本可能存在的染色体相关异常。

      1.2.3 妊娠结局随访所有 NIPT测试有高危因素的怀孕妇女都会被监控对孕妇的产前诊断、妊娠结局及新生儿状况进行统计1.3 统计分析本研究以 SPSS25.0为主要工具,对实验结果进行了统计和统计通过对畸形发生的次数进行统计,得到畸形率2 结果2.1 NIPT结果在1200名孕妇中,有22例确诊为高危病例,发现率为1.83%在所有患者中,21-三体有10个(0.83%),18-三体有5个(0.42%),13-三体有3个(0.25%),2个(XYY)有2个(XYY)和2个(2个(XYY),其它2个(0.17%)常染色体的改变2.2 NIPT结果与羊水细胞染色体核型分析结果的比较NIPT结果与羊水细胞染色体核型分析结果的比较如表1所示在22名被认为是NIPT高危的患者中,20名患者同意接受羊膜穿刺术共发现20个病例,21-三体9个,18-三体3个,13-三体一个,总的总阳性率为100.00%,75.00%,33.33%其中1例为性染色体,1例为正常,1例为正常,1例为50.00%,1例为52名妊娠妇女未经或不接受更多的干预产前检查,其中1名 NIPT显示21-三体高危妊娠妇女,另1名 NIPT显示18-三体高危妊娠妇女可通过妊娠方式进行引产。

      对高危 NIPT的妇女进行染色体组学检查,发现5个假阳性,三体有2个是假阳性,假阳性率是0.16%(5/1200)表1 NIPT结果与羊水细胞染色体核型分析结果的比较染色体异常类型NIPT高风险(n)羊水细胞染色体核型分析(n)阳性预测值%(n)假阳性%(n)21-三体综合征109100.00(9/9)018-三体综合征5375.00(3/4)0.08(1/1200)13-三体综合征3133.33(1/3)0.16(2/1200)性染色体异常2150.00(1/2)0.08(1/1200)其他常染色体异常2150.00(1/2)0.08(1/1200)合计222015(75.00)0.42(5/1200)NIPT结果为1178名高危儿童,其中1名通过追踪证实为21-三体,其中1人通过追踪证实为21-三体,另1名患者在孕期12+4周时,超声检查显示为21-三体,其他病例均无异常,且该患者的染色体异常发生率为98.17%(1178/1200)NIPT敏感性为93.75%(16次中15次),特异度是99.41%(1177/1184)2.3 妊娠结果在22名接受NIPT筛查并被确认为高危孕妇的孕妇中,有20名继续进行羊膜穿刺术以确认结果。

      其中,经诊断,共有15例患者存在染色体异常具体而言,9例患者被确诊为患有21-三体综合征,3例患者被诊断为18-三体综合征,1例患者被发现患有13-三体综合征,还有1例患者性染色体异常,另有1例患者存在其他常染色体异常导致她们选择引产终止妊娠其余7例羊膜穿刺术结果正常(46,XN),产下健康婴儿3 讨论染色体异常对新生儿的生长发育和认知能力有重大影响,给患病儿童、家庭和社会带来了相当大的医疗和经济负担随着孕妇年龄的增长和卵巢功能的下降,胚胎染色体异常的可能性增加,导致胚胎非整倍体、流产和早产率较高因此,高龄孕妇进行染色体筛查至关重要由于大多数高龄孕妇的胎儿相对比较珍贵,她们倾向于拒绝羊膜穿刺术,因为它具有侵入性,并有可能导致胎儿流产、宫内感染等相反,他们寻求高效、快速和安全的产前筛查方法从怀孕第七周开始,女性的血浆中就可以检测到cffDNA血浆中cffDNA的浓度随着时间的推移而增加,与早孕相比,怀孕中晚期的浓度更高此外,cffDNA在终止妊娠后会自行清除[9]NIPT是产前诊断领域中一项快速发展的技术它包括分析孕妇血浆中cffDNA的比例,以识别胎儿染色体异常与传统的有创产前诊断相比,NIPT有几个优点包括高安全性、及早发现和更短的报告时间。

      因此,它在高龄孕妇及其家人中越来越受欢迎本研究旨在探讨NIPT作为高龄孕妇常见非整倍体产前筛查方法的价值NIPT共评估了1200例病例,只有20名高危孕妇需要进行介入性产前诊断,导致羊水穿刺率仅为1.67%这种方法有效地减少了高龄孕妇进行介入性产前诊断的数量,最大限度地降低了与此类程序相关的风险,NIPT(无创产前检测)在识别多种染色体异常,包括21三体、18三体、13三体、性染色体非整倍体(SCA)以及罕见染色体非整倍体(RCA)等方面,展现了高敏感性和特异性根据本研究,NIPT对于21-三体综合征的阳性预测值达到了100.00%,18-三体综合征为75.00%,13-三体综合征为33.33%,性染色体异常为50.00%,其他常染色体异常也是50.00%这些数据与国内外的报道相符合:21-三体综合征的阳性预测值介于86%~100%,18-三体综合征为40%~91.67%,13-三体综合征为25%~36.36%,性染色体异常为28%~59.26%[10]经过介入产前诊断的进一步确认,有9例21-三体综合征、3例18-三体综合征、1例13-三体综合征、1例性染色体异常以及1例其他常染色体异常的孕妇选择终止妊娠。

      研究结果显示,NIPT在检测21-三体综合征方面效果显著,但在18-三体综合征、13-三体综合征、性染色体异常以及其他染色体异常的检测中,假阳性率较高,意味着检测精度还有待提升由于关于NIPT在其他染色体异常方面的报道相对较少,因此建议对NIPT提示高风险的孕妇提供全面的遗传咨询,并通过介入性产前诊断进行确切的诊断4 结论NIPT在识别胎儿21和18三体方面表现出了很高的准确性和检测率这项技术显著减少了对介入性产前诊断的需要,使其成为更容易被高龄孕妇接受的选择然而研究的样本量有限,检测指标需要进一步探索和分析同样重要的是要承认,NIPT仍然可能出现假阳性结果,具有高危筛查的个人应该接受干预性产前诊断,以避免不必要的引产或假阳性结果Reference[1] Xie M, Lao TT, Du M, et al. Risk for Cesarean section in women of advanced maternal age under the changed reproductive policy in China: A cohort study in a tertiary hospital in southwestern China[J]. J Obstet Gynaecol Res,2019(41):2551.[2] Liu X, Zou L, Chen Y, et al. Effects of 。

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