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液相工作中的色谱柱选择液相工作中的色谱柱选择 2014 年 4 月 Thermo Scientific 色谱柱系列概览 LC ColumnsBio ColumnsIC Columns AccucoreMAbPac IonPac AS Acclaim Hypersil GOLD ProPac DNAPac IonPac CS CarboPacHypersil GOLD Syncronis DNAPac GlycanPac CarboPac AminoPacy Hypercarb y ProSwiftIonSwift Legacy HypersilDNASwift 3 旗舰液相色谱柱系列概览 AccucoreAcclaim Hypersil GOLD Syncronis 极佳的性能 特殊的、专用型 色谱柱 峰形 选择性 耐用性 重现性 核-壳技术创新的键合相 优秀的键合工艺 致密键合 双重封端 严格的测试 实心核 高纯硅胶 90Å 离心,过滤，并用甲醇稀释10倍 Kinetex C18 取; 离心,过滤，并用甲醇稀释倍 色谱峰:1. 姜黄素 2. 脱甲氧基姜黄素 3. Bis-desmethoxycurcumin Accucore Polar Premium 1 2 3 Polar Premium 具有不同 的选择性和分离能力 0.01.02.03.0 0 Minutes Kinetex® is a registered trademark of Phenomenex Inc., USA 33 具有形状选择性的键合相 Accucore PFPAccucore Phenyl-XAccucore C18 1.00 1.50 2.00 2.50 HR /10 HSAI 1.00 1.50 2.00 2.50 HR /10 HSAI 1.00 1.50 2.00 2.50 HR /10 HSAI 0.00 0.50 SS HBCC IEX (2.7) 0.00 0.50 SS HBCC IEX (2.7) 0.00 0.50 SS HBCC IEX (2.7) IEX (7.6)BAIEX (7.6)BA Phenyl X 具有强的形状选择性(芳香选择性) IEX (7.6)BA Phenyl-X 具有强的形状选择性(芳香选择性) Phenyl-Hexyl 的形状选择性相反 34 Phenyl-X 分离雌激素 色谱柱:Accucore Phenyl-X Accucore C18 规格:2.6 µm, 100 x 2.1 mm 60 80 1 Rs1.25 Accucore C18 流动相:A: Acetonitrile B: Methanol C: Water 等度:15% A, 40% B, 45% C 流速400L/min mAU 20 40 60 2 3 4 流速: 400 µL/min 温度: 40 °C 进样: 1 µL 检测器: UV 220 nm 0 1.47 80 100 1 2 Rs2.04 1. 雌三醇(E3) 2 雌二醇( E2) Accucore Phenyl-X Phenyl-X 具有不 mAU 20 40 60 3 2 4 2. 雌二醇( E2) 3. 雌激素酮(E1) Phenyl X 具有不 同的选择性和分离 能力 Minutes 0.00.51.01.52.02.53.03.54.04.55.0 0 4. 炔雌醇 35 PFP分离麻黄碱异构体 36 Journal of Chromatography A, 1095 (2005) 113–118 PFP 填料和 Phenyl 填料 PFP 富电子基团富电子基团 Phenyl 不同保留机制示意图：富电子基团在 PFP 上保留较强； 除此之外，该填料具有偶极-偶极作用、疏水作用。

37 除外该填料具有偶极 偶极作用疏水作用 Journal of Chromatography A, 1127(2006) 161-174 不同长度的烷基键合相 Accucore C8Accucore C18Accucore C30 1.00 1.50 2.00 2.50 HR /10 HSAI 1.00 1.50 2.00 2.50 HR /10 HSAI 1.00 1.50 2.00 2.50 HR /10 HSAI 0.00 0.50 SS HBCC IEX (2.7) 0.00 0.50 SS HBCC IEX (2.7) 0.00 0.50 SS HBCC IEX (2.7) IEX (7.6)BAIEX (7.6)BAIEX (7.6)BA C30 的疏水保留低于C18C30 的疏水保留低于C18 形状选择性与C18类似 38 维生素K 异构体 色谱柱: Accucore C30 Accucore C18 Kit C18 1 对K2异构体有不同的选择性 350 mAU Accucore C18 Kinetex C18 规格:2.6µm , 100 x 3.0 mm 流动相:Methanol:buffer, 98:2 缓冲液= 2 mM 醋酸铵 1 250 300 2+2’ 流速: 650 µL/min 温度: 20 ºC 进样: 5 µL 检测器: UV 250 nm 2+2’ KitC18 200 250 检测器: UV 250 nm 色谱峰:1. Vitamin K2, 50 µg/mL 2. Vitamin K1, 50 µg/mL 1 C30 shows better separation for K1 Kinetex C18 100 150 2 2’ separation for K1 isomers Accucore C30 50 0 Vitamin K2 Vitamin K1 0.001.252.503.755.006.258.00 -25 min Kinetex® is a registered trademark of Phenomenex Inc., USA 39 食用油中长链脂类成分的分析 流动相: A: 乙腈 B 异丙醇B: 异丙醇 C: 7.7g/L 醋酸铵,2.0 g/L 乙酸 等度洗脱: 25% A, 70% B, 5% C 柱温: 30 °C 柱压：330bar柱压：330bar 图AC30 和 C18 分析花生油中的油脂 40 图：Accucore C30 和 C18 分析花生油中的油脂 营养核苷酸和核苷 色谱柱:Acclaim C30, 3 µm UV:260 nm ,µ 规格:2.1 × 150 mm 流动相:A) DI water B) NH4OAc (100 mM, pH5) C) CH3OH 温度15 ºC UV:260 nm Run #1 Guanosine Adenosine 温度：15 ºC 流速:0.4 mL/min 进样量:10 µL, 1 ppm of each analyte 检测:UV at 260 nm CMP UMP CytidineGMP IMP UridineAMP Inosine Gradient: Time%A%B%C -5.080200 3 080200 Run #420 Adenosine 3.080200 5.9702010 8.5402040 11.9402040 Run #420 UridineAMP Inosine Guanosine 12.080200 0.01.02.03.04.05.06.07.08.09.010.011.012.0 CMP UMP CytidineGMP IMP 41 Retention Time (min) 混合基质色谱柱 • 键合相 Silica GelSilica Gel Ion exchangeRe ersed phase • 用途 Ion-exchangeReversed-phase 非极性化合物相非极性化合物： 反相 C18 例-大部分药物 极性化合物： aQ, Hilic 例 阿卡波糖 即有极性化合物又有非极性化 合物： ？？ 例-药物及其对离子 例-阿卡波糖 离子化合物： 离子交换柱 例-二甲双胍 42 RP/IEX 混合基质填料 混合颗粒混合键合单链键合 (嵌入基团) 单链键合 (官能团在末端)(嵌入基团)(官能团在末端) Silica GelSilica GelSilica Gel Ion exchangeReversed phaseIon-exchangeReversed-phase 43 RP/AEX/CEX 三重机制键合相 混合键合 单链键合(两性) 纳米微球-硅胶键合相(NSH) CEX 理论情况理论情况 CEX RP/AEX Silica Gel 阳离子交换 现实的情况现实的情况 阴离子交换 Silica GelSilica Gel Silica Gel 44 通过缓冲液浓度调节选择性 NN Me O Me H 色谱柱:Acclaim 混合基质 WAX-1, 5 µm 规格:150x4.6 mm 流动相:50/50 v/v acetonitrile/phosphate buffer pH6 1 2 100 mM 流动相: 50/50 v/v acetonitrile/phosphate buffer, pH6 温度:30 °C 流速 :1 mL/min 进样量:2 µLAU 1 检测:UV (210 nm) 色谱峰: 1. 丁基苯(0.1 mg/mL) 2. 4-水杨酸(0.5 mg/mL) 1 2 20 mM 水杨酸(g) CO2H Butylbenzene 4-Hydroxybenzoic acid 07.515 Minutes OH 45 通过pH调节选择性 1 pH 6 0 NN Me O Me H 色谱柱:Acclaim 混合基质 WAX-1, 5 µm 规格:150x4.6 mm 流动相:50/50 v/v acetonitrile/ 20 mM phosphate buffer 2 pH 6.0 Me H 流动相: 50/50 v/v acetonitrile/ 20 mM phosphate buffer 温度:30 °C 流速 :1 mL/min 进样量:2 µL 2 AU 检测:UV (210 nm) 色谱峰: 1. Butylbenzene(0.1 mg/mL) 2. 4-Hydroxybenzoic acid (0.5 mg/mL) 1 pH 2.6 AU CO2H 07.515 Minutes Butylbenzene4-Hydroxybenzoic acid OH 46 通过有机相比例调节选择性 50% Acetonitrile NN Me O Me H50% Acetonitrile 1 色谱柱:Acclaim 混合基质 WAX-1, 5 µm 规格:150x4.6 mm 流动相:Acetonitrile/ 20 mM phosphate buffer pH6 Me H 2 流动相: Acetonitrile/ 20 mM phosphate buffer, pH6 温度:30 °C 流速 :1 mL/min 进样量:2 µL 检测() AU 1 检测:UV (210 nm) 色谱峰: 1. Butylbenzene(0.1 mg/mL) 2. 4-Hydroxybenzoic acid (0.5 mg/mL) AU 45% Acetonitrile 2 CO2H 01020 Minutes Butylbenzene4-Hydroxybenzoic acid OH 47 应用示例1： 混合基质色谱柱分析表面活性剂 二甲苯磺酸钠 CH CH3 N O O Me + - 十六烷基甜菜碱 CH3 SO3Na 月桂基吡啶氮鎓氯化物 葵基磺酸钠 O O Me 月桂基吡啶氮鎓氯化物 O-S-ONa O O N Cl- + 十二烷基二甲基苄基氯化铵 O-S-ONa O O 十二烷基硫酸钠(SDS) C。