水质粪大肠菌群检验纸片的详细资料.docx

水质粪大肠菌群检验纸片的详细资料BD105 I水质（粪）大肠菌群快速检验纸片 1 份/包适用于湖水、水源水中大肠菌群的快速检测BD105II 水质（粪）大肠菌群快速检验纸片 1份/包 适用于河水、生活用水、医疗机构处理后排污水、禽畜养殖业等排放废水中大肠菌群的快速检测分BD105 I和BD105II两个型号，请注意选择型号1、 适用范围 水质（粪）大肠菌群的测定 纸片快速法本标准适用于地表水、生活污水、医疗机构及禽畜养殖业等其他行业排放的废水中（粪）大 肠菌群的快速筛查本方法的检出限为 20MPN/L2、 规范性引用文件 本标准内容引用了下列文件或其中的条款凡是不注明日期的引用文件，其有效版本适用于 本标准 HJ/T91 地表水和污水监测技术规范3、 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准3.1 总大肠菌群（ total coliforms）在37°C培养，24h内能发酵乳糖酸产气的需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌3.2 粪大肠菌群（ fecal coliforms）44.5C培养，24h内能发酵乳糖产酸气的总大肠菌群，属粪行来源，称为粪大肠菌群4、 方法原理将一定量的乳糖、指示剂（溴甲酚紫和2, 3, 5-氯化三苯基四氮唑即TTC）以及营养成分等 吸附于一定面积的无菌滤纸上，当细菌生长繁殖时，产酸使PH值降低，溴甲酚紫指示剂由 紫色变黄色。

同时，产气过程相应的脱氢酶在适宜的 PH 范围内，催化底物脱氢还原 TTC 形成红色的不溶性三苯甲臜（TTF），即可在产酸后的黄色背景下显示出红色斑点（或红晕） 通过上述指示剂的颜色变化就可对是否产酸产气作出判断，从而确定是否有（粪）大肠菌群 存在，再通过查MPN表就可得出相应（粪）大肠菌群的浓度值5、 试剂和材料除非另有说明，分析时均使用符合国家标准的分析纯化学试剂5.1市售水质总大肠菌群、粪大肠菌群测试片：10ml水样量纸片按附录A的方法进行质量鉴 定，达到要求后方可使用5.2 无菌水用新制备的去离子水或蒸馏水，按无菌操作要求，121°C高压蒸汽灭菌20min,备用5.3 硫代硫酸钠溶液：p （Na2S2O3）=0.10g/ml称取硫代硫酸钠10g，溶于适量蒸馏水（或去离子）中，稀释至100m 1,现配5.4 乙二胺四乙酸二钠（EDTA- Na2）溶液：p （C10H14N2O8Na22H2O）=0.15g/m1称取EDTA-Na2 15g,溶于适量蒸馏水（或去离子水）中，稀释至100ml,此溶液保质期为30d6、仪器和设备6.1 恒温培养箱： 37C±1C6.2 恒温培养箱： 44C±0.5C。

6.3 高压蒸汽灭菌器： 121C、101.3kpa6.4 冰箱： 0-4C6.5 移液管： 1±0.01ml、10±0.1ml6.6 试管：Q 15mmX 150mm.6.7 采样瓶： 500ml注1：移液器、试管、采样瓶等玻璃器皿实验前要按无菌操作要求包扎，121C高压蒸汽灭 菌20min，烘干，备用7、 样品用灭菌器具，按照HJ/T 91的规定及无菌操作的要求，采集水样400ml放入已灭菌的采样瓶 中如果是经加氯处理的废水，需在采样瓶灭菌前加入乙二胺四乙酸二钠EDTA- Na2）溶 液（5.4） 1.2ml，以消除干扰酸性样品，需调节胖胖的PH值至7.0-8.0采样后2h内检测，否则，需10C以下冷藏并6h内送检，实验室接样后，应将样品放入0-4C 冰箱并 2h 内测定注2:10mg硫代硫酸钠可保证去除水样中1.5mg余氯，硫代硫酸钠用量克根据水样实际余氯 量调整8、 分析步骤8.1 接种量 每个样品按三个不同的接种量接种，每个接种量分别接种5张纸片，共接种15张纸片 根据水样的污染程度确定接种量，应尽可能使5个接种量最大的纸片为阳性、 5个接种量最 小的纸片为阴性清洁水样的参考接种量分别为10 ml、1 ml、0.1 ml,受污染水样参考接种量根据污染程度可 接种 1 ml、0.1ml、0.01 ml 或 0.1 ml、0.01 ml、0.001 ml 等。

接种量小于1ml时，水样应制成稀释样品后使用接种量为0.1ml、0.01 ml时，分别制成 1:10稀释样品、 1:100稀释样品其它接种量的稀释样品依次类推1:10稀释样品的制作方法为：吸取1ml水样，注入盛有9 ml无菌水的试管中，混匀，制成 1:10稀释样品其它稀释度的稀释样品同法制作8.2 接种、培养水样充分混匀，按无菌操作制作稀释水样及接种水样清洁水样，接种水样总量为55.5ml, 10 ml水样量纸片5张，每张接种水样10ml, 1 ml水样 量纸片10张，其中5张各接种水样1ml,另5张各接种1:10的稀释水样1ml受污染水样, 接种3个不同稀释度的1ml稀释水样各5张接种水样应均匀涂布于纸片上，纸片充分侵润、吸收水样，用手轻轻压平，做好标记测总大肠菌群时，在37±1°C的条件下培养18-24h后观察结果；测粪大肠菌群时，在44.5 ±0.5°C的条件下培养18-24h后观察结果注3：1、 检测粪大肠菌群时，纸片接种后应立即放置于44.5±0.5°C的恒温培养箱中培养，在常温 下放置过久将影响检测结果的准确性2、 纸片加入水样后，短时间内变黄或退色，表明水样存在酸性物质活氧化剂干扰，需按“7 样品”一节方法去除相应干扰。

9、结果判定（1） 纸片上出现红斑或红晕且周围变黄，为阳性2） 纸片全片变黄，无红斑或红晕，为阳性3） 纸片部分变黄，无红斑或红晕，为阴性4） 纸片的紫色背景上出现红斑或红晕，而周围不变黄，为阴性（5） 纸片无变化，为阴性。