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2018浙江选考生物选修复习(共28页).docx

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      与真核细胞相比,细菌 没有核膜包被的 的细胞核,其细胞壁由 肽聚 糖 组成大肠杆菌是 革兰氏阴性、异养兼性厌氧 的肠道杆菌大肠杆菌在基因工程技术中被 广泛的应用,它的 质粒 是最常用的运载体,它也是基因工程中常用的 受体细胞 二、培养基配置1、微生物的生命活动需要 五大营养要素: 水、无机盐、碳源、氮源、生长因子 有的化 合物既是碳源又是氮源,如 蛋白质 生长因子 是微生物生长不可缺少的微量有机物;(“细 菌喜荤,霉菌喜素”,细菌的培养基:蛋白胨、酵母提取物、一定量的氯化钠,以维持一定的渗透压;霉菌的培养基:一般用无机物配制或添加蔗糖的豆芽汁即可;生长环境:细菌中性偏碱,霉菌中性 偏酸)固氮细菌的培养基中不需添加 氮 源,因为它可以利用空气中的氮气;硝化细菌的培养基中不需添加 碳 源,因为它可以利用空气中的二氧化碳合成有机物在提供上述几种主要营养物质的基础上,培养基还需要适宜的 pH、温度以及特殊营养物质,以 满足微生物生长对的要求2、培养基的种类及作用:标准培养基种类特点用途工业生产、扩大培养(如:大肠 杆菌的培养)运动、保藏菌种 分离、鉴定、计数 工业生产液体培养基不加凝固剂物理性质分半固体培养基固体培养基 天然培养基加凝固剂,如琼脂化学成分是天然物质将所需化学成分按需要和比例 配制而成 抑制不需要的微生物生长,促 进所需微生物生长 加入某种化学物质或显色剂, 鉴别不同种类的微生物成分来源分合成培养基分类、鉴定选择培养基如尿素固体培养基用途分鉴定培养基我们一般用 LB 液体培养基 来扩大培养大肠杆菌,用 LB 固体培养基 来分离大肠杆菌。

      3、培养基配置步骤:1).称量:蛋白胨,酵母提取物,氯化钠,2).溶化3).调 pH:用 1mol/L NaOH 溶液调节 pH 至偏碱性4).灭菌:高压蒸汽灭菌5).倒平板4、倒过来放置的目的是 防止培养基冷却过程中形成的水滴落到培养基表面,以免污染培养基 或不能分离出单菌落 三、灭菌和消毒(重点内容)1.无菌技术 ;2.消毒方法3.灭菌方法:①接种环、接种针、试管口等使用 灼烧灭菌法 ;②培养基、无菌水等使用 高 压蒸汽灭菌法 ,所用器械是高压蒸汽灭菌锅;③对不能受潮的实验器具使用 干热灭菌法 1)、如果培养基中含有葡萄糖,为防止葡萄糖碳化,应降低温度在 500g/cm2,90℃以上灭菌 30 min;有些不能加热的化合物,遇热会分解,如尿素,只能用 G6 玻璃砂漏斗过滤(2)、玻璃砂漏斗使用方法:试用前也要用高压蒸汽灭菌,玻璃砂漏斗有 6 种,即 G1-G6,G6 孔 径最小,细菌不能滤过,在使用后需要用 1mol/L 的 HCl 浸泡,并抽滤去酸,再用蒸馏水洗至洗出 液至中性,干燥后保存4.注意事项:①实验中用的棉花不能用脱脂棉,因脱脂棉易吸水,吸水后容易造成污染灭菌 后,通常在 60~80℃烘箱中除去灭菌时的水分;②物品装入高压蒸汽灭菌锅灭菌后,要首先打开排 气阀,煮沸并排除锅内冷空气,其目的是有利于锅内温度升高,随后关闭排气阀继续加热,加热结 束切断热源后,要使温度自然降低,气压务必降至零时打开锅盖,其目的是防止容器中的液体暴沸;③在用任何器皿转接时,瓶塞和封口膜只能夹在手上,不许放在台面上,接种时要在酒精灯火焰旁 操作;④培养基一定不能 沾在三角瓶口、试管管口和培养皿壁上,否则容易污染;⑤接种时要胆大 心细,动作快捷,这是减少污染的关键;⑥接种后,培养皿必须 倒放(盖在下方)在恒温培养箱中, 如正放则水蒸气在盖上凝成水滴,滴到接种后的培养基表面,水流扩散会使菌落扩散,就很难形成 单菌落了。

      第 3 页 共 27 页四、细菌的分离1.划线分离法:用接种环蘸菌液后在含有 固体培养基 的培养皿平板上划线,在划线过程中菌 液逐渐减少,细菌也逐渐减少划线到最后,可使细菌间的距离加大在培养 10~20h 后,可由一 个细菌产生单 菌落,菌落不会重叠如果再将每个菌落分别接种至含有固体培养基的试管斜面上, 在斜面上划线,则每个斜面的菌群就是由一个细菌产生的后代其操作步骤是:将培养皿底部用拇指和无名指固定成倾斜状态,在火焰旁将培养皿稍微打开在此同时,用环状接种针在火焰旁取少 许菌悬液,迅速送入培养皿内,在平板培养基的一边,作 第 1 次平行划线 3~5 条,转动培养皿约 70角,用烧过冷却的接种针,通过第 1 次划线部分作第 2 次平行划线,然后再用同样方法,通过第二次平行划线部分作第三次平行划线和通过第三次平行划线部分作第四次平行 划线划线时,接种针应与平板表面成 30角左右不要使接种针碰到培养皿边缘,也不要将培养基划破划线完毕后,盖上皿盖,倒置于 恒温箱培养取菌种前,灼烧接种环的目:消灭接种环上的微生物;除第一次划线外,其余划线前都要灼烧接种环的目:消灭接种环上残留菌种;取菌种和划线前都要求接种环冷却后进行,其目的是防止高温杀死菌种;最后灼烧接种环的目的:防止细菌污染环境和操作者。

      2.涂布分离法:先将培养的菌液稀释,通常稀释到 10-5 ~10-7 之间,然后取 0.1ml 不同稀释度 的稀释菌液放在培养皿的固体培养基上,用 玻璃刮刀 涂布在培养基平面上进行培养,在适当的 稀释度下,可产生相互分开的菌落通常每个培养皿有 20 个以内 的单菌落最为适合划线分离法,方法简单;涂布分离法, 单菌落更易分开 ,但操作复杂些细菌的两种分离法各有优点,都可采用五、微生物的计数方法(不做要求,可作为拓展知识了解) 显微镜直接计数————血细胞计数板计数法实验 2:分离以尿素为氮源的微生物1. 土壤环境中有一些细菌含有 脲酶 ,它们可以通过降解尿素作为其生长的氮源尿素分解的 化学方程式为: 灭菌2. 流程:涂布接种3. 配制固体培养基时要添加 适量琼脂糖 ,而不使用琼脂,是因为琼脂中含有 一定量的氮 元 素,这样可以排除琼脂中氮元素对实验结果的干扰4. 培养基的灭菌,压力应该控制在 500 g/cm2,温度在 90 ℃以上而尿素溶液需用 G6 玻璃砂 漏斗 过滤,后再加入已经灭菌冷却的培养基中5. 本实验需设置对照,即以 全营养 LB 固体培养基 为对照组;以 尿素 唯一氮源、其它营 养条件与对照组相同的 尿素固体培养基 为实验组。

      6. 本实验尿素培养基中还加入了 酚红 作指示剂,因为尿素被尿酶分解后产生的氨与该指示剂 显 红 色可根据细菌菌落周围 着色环带的大小 判断细菌分解尿素能力的大小7. 本实验用 涂布分离法 分离细菌取 0.1 ml 菌液滴到平板上,要用 70%酒精处理过的 且 经灼烧并冷却的玻璃刮刀 进行接种系列梯度稀释法)8. 实验结果:实验组的菌落数目 小于 对照组的菌落数目计数时为防止误差,每个浓度的水样 至少要做 3 个培养皿,求平均值实验 4:果汁中的果胶和果胶酶1.果胶是植物 细胞壁 的主要成分,由 半乳糖醛酸 和 半乳糖醛酸甲酯 组成2.果胶不溶于 乙醇 ,这是鉴别果胶的一种简易方法;添加乙醇可以使果胶析出3.果胶可被 果胶酶 和 果胶甲酯酶 水解;(注意:果胶酶不是一种,而是一类)果胶水解 的最终产物是 半乳糖醛酸 和 半乳糖醛酸甲酯 .4.制作果汁时使用果胶酶 使果汁变澄清,提高出汁率 5.一般用于生产果胶酶的微生物有 黑曲霉 和 苹果青霉 6.实验操作及结果烧杯号处理试管处理加入酒精前现象分层十分明显,沉淀被浓缩 成一小团 分层十分明显,沉淀比 1 号 试管要大液体混浊,比 4 号稍有澄清 液体混浊加入 的乙醇 4ml5g 水果匀浆+10ml 黑曲霉提 取液1加热果汁被稀释A2不加热果汁被稀释加热不加热产生絮状沉淀产生大量絮状沉淀5g 水果匀浆+10ml 水34B实验 6:α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测1.固定化酶就是 将水溶性的酶用物理或化学的方法固定在某种介质由,使之成为不溶于水而又有酶活性的制剂 。

      固定化酶具有 储存、运输和可重复利用 等等多种优点 固定化的方法有 吸附法 、 共价偶联法 、 交联法 、 包埋法 等2.淀粉酶是 一类 能水解淀粉的复合酶3.常用的淀粉指示剂是 KI-I2 溶液 ,淀粉的水解产物不同,显色也不同完成下列填空:葡萄糖不显色麦芽糖不显色糊精红蓝4.实验操作流程a-淀粉酶固定化装柱洗涤检测是否洗净滴加淀粉溶液(控制流速)重复使用冷藏洗涤本实验固定α-淀粉酶的方法是 吸附法 ,载体是 石英砂 第一次洗涤的目的是 除去未吸附的游离淀粉酶 (流速为 0.3ml/min ),如何证明洗涤固定化 酶柱的流出液中没有淀粉酶? ① 取 2 支洁净的试管,编号为 A、B,各加入 1ml 可溶泌淀粉溶液②A 试管中加入 5 滴淀粉酶柱的流出液,B 试管中加入等量的蒸馏水,混合后 60℃水浴保温 5min③取出 2 支试管,各滴加 2 滴 KI-I2 指示剂,观察溶液颜色变化若 AB 试管溶液均为蓝色且颜色 相同,则流出液中同有淀粉酶 滴加淀粉溶液时,控制流速为 0.3ml/min,为什么要如此缓慢? 保证酶和底物反应所需时间 第二次洗涤的目的是 洗去残留的淀粉 。

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