洋葱多倍体的诱导(最终修改版).docx

洋葱多倍体的诱导实验设计方案组员：一、提出假设及预期假设：用0.05%、0.1%、0.15%等不同梯度浓度的秋水仙素，诱导 洋葱根尖的人工效果不同预期：浓度为0. 15%的秋水仙素处理的洋葱根尖细胞加倍效果最好二、实验具体设计1. 控制变量：实验变量是秋水仙素的浓度，控制其它变量进行实验设置对照:用蒸憾水培养作为对照实验同时进行3.实验任务分配:本组成员：分工情况：对照组的实验实施0. 05%浓度组的实验实施0. 10%浓度组的实验实施0. 15%浓度组的实验实施三、实验目的1. 了解和掌握秋水仙素溶液诱导多倍体的一般方法2. 了解植物多倍体的一般形态特征及多倍体的细胞学特点3. 了解不同的秋水仙素浓度效果II!、实验原理用秋水仙素溶液处理植物的种子或根尖，是常用的人工诱导多倍体的 有效方法，秋水仙素是从百合科植物秋种番红花秋水仙的器官和种子中提取出来的若浓度适合，药剂在细胞中扩散后，不仅发生严重的毒害，这 样纵裂为二的染色体不能向两极分开，因而便产生了染色体数冃加倍的重 组核当药剂的作用消除后，由于多倍体细胞继续分裂，便得到多倍体组 织产生的多倍体在形态学上与二倍体有明显差别，细胞变大，染色体数 冃加倍。

实验可以通过设置多组不同浓度的秋水仙素溶液观察不同的效果五、材料、器材及试剂器材:电脑、显微镜、 刀片、吸水纸、试剂：1%的秋水仙素、材料：洋葱（2n=16）载玻片、盖玻片、烧杯、试管、木试管夹、银子、 水浴锅、黑卡纸、矿泉水瓶lmol/LHCl溶液、希夫试剂、45%醋酸、漂洗液、醋酸洋红六、步骤方法（-）洋葱材料的处理购买洋葱时，挑选个小、无腐烂且有老根的洋葱稍稍去除洋葱外面干枯的鳞叶和须根，架在盛水的矿泉水瓶底 上（25C ）进行水培（每24小时换水一次）待根长到l-2cm时，再把洋葱分为对照组、0.05%浓度组、0.10% 浓度组、0.15%浓度组再把洋葱分别放到盛有对应浓度的秋水仙素溶液的矿泉水瓶底 上，让根浸在秋水仙素溶液中24小时不同浓度的秋水仙素配制秋水仙素浓度（c）0.05%0.1%0.15%对照1%秋水仙素体积（ml）1230蒸镭水体积（ml）19181720（二）制片观察：观察秋水仙素处理后的洋葱根尖是否膨胀变大解离:在早上9点左右，用蒸馄水洗净根尖，置小试管中加lmol / LHCI于60C水浴锅中解离10分钟，再用蒸僻水冲洗3次, 每次2分钟，彻底洗净HCI,将洗净的根尖取吸干水分。

染色：1）加入希夫试剂侵末根尖，试管外包上黑卡纸反应1小吋2）醋酸洋红染色法漂洗：1）倒去希夫试剂，用漂洗液漂洗3次，每次2分钟，再用蒸 憾水清洗压片：1）在载片上切取根尖的前部，用十字交叉压片法制 片，滴45%醋酸盖片2）在载片上切取根尖的前部，用十字交叉压片法制 片，醋酸洋红染色后盖片三）观察低倍镜下寻找染色体分散良好的分裂相，换高倍镜观察染色体数目 拍照提交作业七、预期结果通过查阅有关资料，得知理论上，当处理时间相同时，随着秋水仙素 溶液浓度的增大，加倍率应该呈上升趋势在木实验中，当秋水仙素溶液 的浓度分别为0.05% 、0. 1%、0. 15%时，加倍率随着增大所以预期0. 15% 的秋水仙素处理的效果最好八、实验结果根尖膨胀变大情况统计秋水仙素浓度0. 05%0.10%0.15%对照根数2276膨胀变大的根数2250膨大率100%100%71%0%镜检结果对照组实验结果0.05%浓度组实验结果0.10%浓度组实验结果045%浓度组实验结果九、实验分析1. 染色分析实验时我们用了醋酸洋红染色发和希夫试剂染色发两种方法，但醋 酸洋红染色时，可能染色时间过长，有两组没有观察到染色体，后试用 希夫试剂染色法，观察到明显的染色体。

2. 实验结果分析在实验中，有两组的根未完全膨大，可能是在秋水仙素处理时，根 未侵入溶液中在相同的时间里，用不同浓度的秋水仙素诱导洋葱根尖，结果除对 照组外，其它组均发生染色体加倍，但加倍数有不同随着浓度的增高, 染色体数目越多，说明加倍越明显3. 操作分析在实验过程中，用醋酸洋红染色时，压片没有敲打，导致染色体没 有分散，观察不到结果十、注意事项1. 秋水仙素有剧毒，具有麻痹作用，能使中枢神经系统麻醉而引起呼吸 困难，使用时务必要小心2. 准备实验材料时要选择已经破除休眠的洋葱3. 解离时间要控制好，解离不够，压片不易分散，解离过久，清洗时容 易丢失材料4•醋酸洋红染色时要控制好染色时间，太短着色太浅，不易观察，太长 着色太深，也不易观察H^一、 参考资料1） 彭静，魏岳荣，熊兴华•植物多倍体育种研究进展[J]・中国农学通 报,2010,（第 11 期）.2） 《作物遗传育种》吕爱枝•翟志军•马贵民•高等教育出版社.2009.3） 池坚,席梦利，张静，胡风荣,施季森•东方百合Siberia多倍体诱导及其 细胞学鉴定[J]・分了植物育种,200& （第2期）.4） 龚慧明.洋葱快速生根的方法.《生物学通报》2006年第41卷第3 期.。