无病毒植物的培养ppt课件.ppt

第四章 无病毒植物的培育教学目的和要求教学目的和要求 (1〕了解植物病毒的危害和培育无病〕了解植物病毒的危害和培育无病毒植物的意毒植物的意义〔〔2〕了解和掌握脱除植物病毒的原理〕了解和掌握脱除植物病毒的原理及方法 〔〔3〕了解分〕了解分别茎尖的培育情况茎尖的培育情况〔〔4〕普通掌握无毒苗木的〕普通掌握无毒苗木的鉴定方法〔〔5〕普通掌握脱毒苗木的保管和利用〕普通掌握脱毒苗木的保管和利用方法第一节  植物病毒的危害和培育无病毒植物的意义病病毒毒之之所所以以致致病病不不是是由由于于耗耗费细胞胞营养养或或经过毒毒素素杀死死细胞胞，，而而是是利利用用细胞胞内内物物质占占领空空间，，干干扰细胞胞的的代代谢过程程，，促促使使细胞胞产生生一一些些对细胞胞或或生生物物的的生生命命和和正正常常功功能能有有害害的的异异常常物物质和和条条件件，，这使使得得植植物物病病毒毒病病的的防防治治较其其他他植植物物病病害害防防治治更更为困困难，，常常给消消费带来来灾灾难的的损失失，，被称被称为“植物的癌症〞植物的癌症〞一、植物病毒的危害一、植物病毒的危害•植物病毒已超越600种，严重危害着农业消费•在果树、蔬菜、花卉、林木以及农作物上皆有发现。

随着消费栽培时间的推移，危害越来越严重，发现的病毒种类也越来越多病毒调查危害园危害园艺植物的病毒数目植物的病毒数目如侵染菊花的病毒和如侵染菊花的病毒和类病毒有病毒有19种之多种之多 如如 无子病毒无子病毒(CAV) 潜潜隐病毒病毒(CLV) B病毒病毒(CVB) 轻斑斑驳病毒病毒(CMMV) 矮化病毒矮化病毒(CSV) 脉斑脉斑驳病毒病毒(CVMV) 退退绿斑斑驳类病毒病毒(CCMV)等等 •4种对草莓消费呵斥艰苦种对草莓消费呵斥艰苦影响影响:• 斑驳病毒〔斑驳病毒〔SMoV〕〕• 草莓黄边病毒〔草莓黄边病毒〔SMYEV 〕〕• 草莓镶脉病毒〔草莓镶脉病毒〔SVBV〕〕• 草莓伸展病毒草莓伸展病毒 〔〔SCrV〕、〕、甘薯根腐病.甘薯叶点病甘薯枯萎病甘薯黑痣病2.病毒的特性及其侵染病毒的特性及其侵染 多植物病毒不多植物病毒不经种子种子传播，多数以种子繁衍后代的播，多数以种子繁衍后代的植物，可以从植物，可以从轻度罹病植株上采集种子，播种繁度罹病植株上采集种子，播种繁衍，不会将病毒衍，不会将病毒传至下一代。

〔至下一代〔专化性化性强的病毒的病毒除外，如豆除外，如豆类病毒病毒——由一种由一种专化性化性强的蚜虫的蚜虫传播播)可随着种子可随着种子传播〕对于有性生殖退化，于有性生殖退化，仅能用无性繁衍方法繁衍的植能用无性繁衍方法繁衍的植物，一旦罹病那么毫无方法母株一旦染病，病物，一旦罹病那么毫无方法母株一旦染病，病毒在其毒在其细胞内增殖，并胞内增殖，并经过插条、接穗、种薯、插条、接穗、种薯、球根、球根、鳞片片传至下一代至下一代经过昆虫作昆虫作为媒介加速媒介加速传播３３.植株脱病毒的意义植株脱病毒的意义•植物组织培育脱病毒技术是植物细胞工程的重要组成部分，脱毒种苗的消费在提高作物质量和产量方面已显示出极大潜力，良种、新种类的脱毒组培苗的大面积推行和运用，有效地处理了因病毒引起的种类退化问题因此，植物组培脱毒技术在农业消费的科学化、现代化中具有宏大的运用价值和经济效益，还可减少农药的施用，改善生态环境条件，防止病害的蔓延与分散，该方法已成为农业中运用最广泛的生物技术甘薯脱毒甘薯脱毒苗苗脱毒区第二节  脱除植物病毒的原理及方法 一、物理学方法：一、物理学方法： X射射线 紫外紫外线 超短波超短波 高温高温 都能使病素都能使病素钝化，其中以化，其中以热处置最常用。

置最常用1.热处置脱除植物病毒的原理热处置脱除植物病毒的原理①①病毒是病毒是DNA大分子，病毒大分子，病毒进入植物入植物细胞后；随植胞后；随植物物细胞的胞的DNA一同复制一同复制热处置并不能置并不能杀死病毒，死病毒，只能只能钝化病毒的活性，使病毒在植物体内增殖减化病毒的活性，使病毒在植物体内增殖减缓或增殖停或增殖停顿，而失去侵染的才干而失去侵染的才干 ②②热处置是一种物理效置是一种物理效应，与冷，与冷处置一置一样，它可，它可以加速植物以加速植物细胞的分裂，使植物胞的分裂，使植物细胞在与病毒繁胞在与病毒繁衍的衍的竞争中取争中取胜〔〔1〕〕温温汤浸浸渍处置置法法：：将将剪剪下下的的接接穗穗或或种种植植资料料，，在在50℃左左右右的的温温水水中中，，浸浸渍3-15分分钟至数小至数小时〔〔2〕〕热风处置置法法：：让盆盆载植植物物在在35-40℃高高温温下下生生长发育育，，热处置置空空气气温温度度应逐逐渐升升高高，，然然后后到到达达所所需需温温度度，，同同时必必需需坚持持一一定定的的湿湿度度和和光光照照，，以以后后可可切切取取处置置后后新新长出出的的枝枝条条作作接接穗穗和和砧砧木木，，或或将将热处置与置与组织培育培育结合效果更好。

合效果更好热处置脱毒热处置脱毒2、愈、愈伤组织热处置脱毒法置脱毒法方方法法：：从从患患病病植植株株上上取取叶叶片片(茎茎片片、、鳞片片、、花花器器亦亦可可)进展展离离体体培培育育，，诱导构构成成愈愈伤组织，，然然后后将将愈愈伤组织反复反复继代培育同代培育同时兼用兼用热处置 常用途置温度及常用途置温度及处置置时间：： 温度：温度：37-38℃ 时间：：处置置2周、周、4周或周或8周周 温度：温度：50℃ 时间：：3-15min反反复复继代代兼兼热处置置，，阅历一一定定的的时间(继代代次次数数需需实验)后后，，将将热处置置过的的愈愈伤组织转移移到到分分化化培培育育基基中，中，诱导器官分化器官分化果树作物：桃果树作物：桃(无黄萎病无黄萎病)、苹果、苹果(花叶病花叶病)、、葡萄葡萄(扇叶病毒扇叶病毒)、甜橙、香蕉、李子、、甜橙、香蕉、李子、醋栗、梨、树莓、红莓苔子、草莓等醋栗、梨、树莓、红莓苔子、草莓等蔬菜作物：马铃薯、番茄、菠菜蔬菜作物：马铃薯、番茄、菠菜花卉植物：蔓生长春花、康乃馨、菊花等花卉植物：蔓生长春花、康乃馨、菊花等其他植物：曼陀罗等。

其他植物：曼陀罗等例：烟草愈伤组织兼热处置钝化烟草花叶病毒(TMV)和黄瓜花叶病毒(CMV)获得无病毒株效果做法：A：：从从患患病病烟烟草草植植株株上上取取5mm叶叶片片培培育育，，在在MS附附加加IAA 2+KT 0.2的培育基上的培育基上诱导愈愈伤组织B：：将将其其中中一一部部分分愈愈伤组织反反复复继代代培培育育，，继代代培培育中分育中分别兼用兼用25℃、、30℃和和37℃温度温度热处置置8周C：：将将热处置置后后的的愈愈伤组织，，转到到MS附附加加IAA 2+KT 2的分化培育基中的分化培育基中诱导芽分化D：：将将1cm长的的芽芽转移移到到MS附附加加IAA 2+KT 0.02生生根培育基，根培育基，诱导根分化E：：完完好好植植株株获得得后后，，移移植植到到无无毒毒土土壤壤栽栽培培并并进展展鉴定 结果果阐明：反复明：反复继代培育可代培育可获得无病毒株得无病毒株3.低温处置脱出病毒•菊花植株菊花植株----5℃,4-7.5个月个月处置后置后进展茎展茎尖培育尖培育,可以除去矮化病毒可以除去矮化病毒(CSV)和褪和褪绿班班驳病毒病毒(CCMV),而而单独的茎尖培育无独的茎尖培育无此效果。

此效果二、化学方法二、化学方法运运用用农药是是防防治治植植物物真真细菌菌病病害害的的主主要要方方法法，，实际上上讲，也，也应该是防治病毒的有效途径是防治病毒的有效途径有有不不少少化化学学物物质能能抑抑制制病病毒毒复复制制，，例例如如孔孔雀雀绿、、硫尿硫尿嘧啶、、8-氮氮鸟嘌呤、以及某些病毒抑制呤、以及某些病毒抑制剂如如Viraz01e(病病毒毒唑)和和一一些些蛋蛋白白质、、核核酸酸合合成成抑抑制制剂等等由由于于病病毒毒的的复复制制和和寄寄主主的的代代谢过程程关关系系非非常常亲密密，，因因此此，，要要找找出出既既干干扰病病毒毒复复制制，，又又不不影影响响寄寄主主细胞胞正正常常代代谢的的药剂非非常常困困难利利用用这些些化化合合物物处置置整整株株植植物物去去病病毒毒的的效效果果虽不不理理想想，，但但培培育育离离体体的的组织、、细胞胞和原生和原生质体等却能体等却能够有良好效果有良好效果如如在在培培育育基基中中参参与与2—硫硫尿尿嘧啶可可以以除除去去烟烟草草愈愈伤组织中中的的PVY病病毒毒，，参参与与放放线菌菌素素D可以抑制原生可以抑制原生质体中的病毒复制等体中的病毒复制等 钝化、抑制和去除植物病毒的一些化合物三、生物学方法1.茎尖培育脱毒茎尖培育脱毒〔〔1〕茎尖培育脱毒的〕茎尖培育脱毒的实际根底根底a、、病病毒毒在在植植物物体体内内的的转移移是是经过维营束束系系统完完成成的的，，在在分分生生组织区区域域内内没没有有维管管束束组织，，病病毒毒只只能能经过胞胞间连丝传送送赶赶不不上上细胞的不断分裂和活胞的不断分裂和活泼的生的生长速度；速度；b、、在在分分裂裂旺旺盛盛的的分分生生组织内内，，病病毒毒的的复复制制遭遭到旺盛代到旺盛代谢活活动的限制；的限制；c、、在在植植物物分分生生区区域域内内，，“病病毒毒钝化化体体系系〞〞的的活性活性较其他部位的活性高；其他部位的活性高；d、、茎茎尖尖分分生生组织内内高高浓度度的的植植物物内内源源激激素素能能够会抑制病毒的增殖。

会抑制病毒的增殖 〔〔2〕茎尖培育脱毒苗的方法〕茎尖培育脱毒苗的方法在在解解剖剖镜下下剥剥取取茎茎尖尖思思索索到到脱脱毒毒效效果果及及提提高高成成活活率率，，普普通通切切取取0.2—0.5mm的的茎茎尖尖为组织资料料进展展培育，不同的植物茎尖培育，不同的植物茎尖对外源激素的反响不同外源激素的反响不同茎茎尖尖大大小小:过大大时接接种种易易成成活活，，但但脱脱毒毒效效果果差差，，过小小时难成成活活，，但但脱脱毒毒效效果果好好普普通通以以带有有1-2片片叶叶原原基基为好好，，大大小小为0.2-0.3mm为宜宜，，超超越越0.5mm时，，脱毒效果差脱毒效果差培培育育基基:只只需需能能使使茎茎尖尖快快速速生生长，，分分化化快快的的培培育育基基均均适适于于脱脱毒毒普普通通以以MS较好好，，添添加加一一定定比比例例的的细胞胞分裂素就行分裂素就行马铃薯马铃薯的芽的芽茎尖的构造茎尖的构造微茎尖微茎尖普通茎尖普通茎尖马铃薯脱马铃薯脱毒苗毒苗康乃馨不同茎尖培育与康乃馨斑康乃馨不同茎尖培育与康乃馨斑驳病毒的脱除情况病毒的脱除情况(3)茎尖培育法脱除植物病毒的技茎尖培育法脱除植物病毒的技术关关键①①同一种病毒在不同植物体内分布部位不同。

同一种病毒在不同植物体内分布部位不同例：烟草花叶病毒例：烟草花叶病毒(TMV)在如下植物中的在如下植物中的荧光反响 烟草：烟草：l-4片叶原基中未片叶原基中未见TMY特异特异荧光光 撞羽矮撞羽矮牵牛：一两片叶原基未牛：一两片叶原基未见TMV特异特异荧 光，而在三四片叶原茎中可光，而在三四片叶原茎中可见TMV荧光 番茄：番茄：1片叶原茎中未片叶原茎中未见TMV特异特异荧光 所所以以在在用用茎茎尖尖培培育育脱脱毒毒时，，必必需需仔仔细确确定定病病毒毒在在植植物茎尖中的分布部位，然后确定培育茎尖的大小物茎尖中的分布部位，然后确定培育茎尖的大小.如：番茄：只能取生如：番茄：只能取生长锥或或仅带一片叶原基的茎一片叶原基的茎 尖尖进展培育；展培育； 撞羽矮撞羽矮牵牛：可取生牛：可取生长锥或或带一两片叶原基一两片叶原基 的茎尖的茎尖进展培育；展培育； 烟草：可取烟草：可取带4片叶原基的茎尖片叶原基的茎尖进展培育。

展培育 利利用用茎茎尖尖堵堵养养法法脱脱除除植植物物病病毒毒时，，最最好好找找出出茎茎原原基基所所带叶叶原原基基的的数数目目与与生生长点点(茎茎尖尖)大大小小的的相相关关性性，，这样在取材在取材时就方便多了就方便多了• 茎原基茎原基 0.05~0.08mm • 茎原基茎原基带2片叶原基片叶原基 0.1~0.2mm• 茎原基茎原基带4片叶原基片叶原基 0.3~0.4mm• 茎原基茎原基带6片叶原基片叶原基 0.6~0.8mm②不同病毒种类在同一种植物中分布部位不同甘薯甘薯 斑斑纹花叶病毒、花叶病毒、缩叶花叶病毒：叶花叶病毒： 分布于分布于1.0- 2.0mm以内的茎尖中以内的茎尖中 羽毛状花叶病毒：羽毛状花叶病毒： 分布于分布于0.3-1.0mm以内茎尖中以内茎尖中 马铃薯薯 马铃薯卷叶病毒、薯卷叶病毒、Y病毒：病毒： 分布于分布于1.0-3.0mm以内的茎尖中；以内的茎尖中； X病毒：分布于病毒：分布于0.2-0.5mm以内的茎尖以内的茎尖 G病毒：分布于病毒：分布于0.2-0.3mm以内的茎尖以内的茎尖 S病毒：病毒：0.2mm以下以下 2.愈愈伤组织培育脱毒培育脱毒植植物物各各部部位位器器官官和和组织培培育育去去分分化化诱导产生生愈愈伤组织，，然然后后从从愈愈伤组织再再分分化化产生芽，生芽，长成小植株，可以得到无病毒苗。

成小植株，可以得到无病毒苗阐明明病病毒毒颗粒粒会会在在愈愈伤组织的的培培育育过程程中中逐逐渐消逝愈伤组织脱病毒的机理愈伤组织脱病毒的机理•能能够的的缘由有：由有：•①①病毒在植物体内不同器官或同一器官的不同病毒在植物体内不同器官或同一器官的不同组织中分布不均匀，由那些无病毒中分布不均匀，由那些无病毒细胞增殖胞增殖产生的生的愈愈伤组织就是就是获得无病毒苗的根底得无病毒苗的根底•②②有些愈有些愈伤组织细胞中病毒胞中病毒浓度度较低，在愈低，在愈伤组织细胞快速分裂胞快速分裂过程中，病毒的复制才干衰退或程中，病毒的复制才干衰退或丧失•③③继代培育的愈代培育的愈伤组织容易容易产生抗性生抗性变异异细胞，胞，因此能因此能够出出现不不带病毒的愈病毒的愈伤组织但经愈愈伤组织产生无病毒苗的脱毒途径容易生无病毒苗的脱毒途径容易产生生变异，能异，能够导致植株致植株丧失其原有的失其原有的优良性状，当然也有能良性状，当然也有能够产生有益的生有益的变异，但异，但频率极低3.茎尖微体嫁接脱毒茎尖微体嫁接脱毒先先将将砧砧木木种种子子进展展外外表表消消毒毒，，以以后后再再接接到到1%琼脂脂以以MS无无机机盐培育基培育培育基培育发芽，用苗芽，用苗龄约2周的幼嫩周的幼嫩实生苗作砧木。

生苗作砧木把把实生生苗苗从从试管管中中取取出出，，在在无无菌菌条条件件下下切切去去顶部部，，留留下下1-1.5cm的的上上胚胚轴部部分分，，将将子子叶叶和和液液芽芽除除去去，，把把根根切切短短至至4—6cm长从从田田间或或温温室室旺旺盛盛生生长的的成成年年树剪剪取取一一小小段段新新梢梢，，经消消毒毒后后在在超超净台台上上用用显微微操操作作法法取取出出仅带1-3个个叶叶原原基基的的茎茎尖尖约1mm大小作穗用采用倒大小作穗用采用倒T字形的程度切口字形的程度切口嫁嫁接接苗苗用用液液体体滤低低桥培培育育基基培培育育成成活活率率30%—50%，，嫁嫁接接胜利的植株移植到土壤之前至少要有两片展开的真叶利的植株移植到土壤之前至少要有两片展开的真叶 苹果微体嫁接茎尖大小与脱毒苹果微体嫁接茎尖大小与脱毒胜利率利率苹果不同取材苹果不同取材时期期对微体嫁接微体嫁接胜利率利率的影响的影响苹果微体嫁接茎尖大小与脱毒苹果微体嫁接茎尖大小与脱毒胜利率利率试管微体嫁接在果树方面开展最快 (1)嫁嫁接接植植物物不不受受与与珠珠心心及及有有性性实生生苗苗相相关关的幼年的幼年阶段的影响段的影响2)许多多栽栽培培种种类经过嫁嫁接接繁繁衍衍了了许多多世世代代，，因因此此果果树研研讨者者和和种种植植者者关关于于这些些种种类的的自自根根苗苗的的根根冠冠大大小小、、病病虫虫害害情情况况以以及及耐寒性等了解得很少。

耐寒性等了解得很少(3)茎茎尖尖组组织织培培育育繁繁衍衍结结合合热热处处置置可可产产生生无无病病毒毒植植物物，，因因此此，，许许多多研研讨讨者者以以为为对对通通常常采采用用嫁嫁接接繁繁衍衍的的果果树树进进展展试试管管嫁嫁接接是是很适宜的很适宜的4)试试管管微微体体嫁嫁接接除除了了可可培培育育无无病病毒毒植植株株外外，，还还可可处处理理难难以以生生根根的的园园艺艺植植物物的的生生根根问问题和进展嫁接亲和力的研讨题和进展嫁接亲和力的研讨　4.珠心胚培育脱毒 柑桔类80%以上的种类具有多胚性,而单胚占的比例很小柑橘类植物中有不少多胚种类，一颗种子内除一个合子胚外，还有数个至数十个由珠心细胞构成的无性胚，称做珠心胚由于病毒通常是经维管束的韧皮组织传播的，而珠心与维管束系统无直接联络由珠心组织诱导产生的植株就可免除病素毒的危害①①它与合子胚不同，不是受精的它与合子胚不同，不是受精的产物，而是由体物，而是由体细胞胞产生的，因此具有和母体一生的，因此具有和母体一样的的遗传组成；成；②②与合子胚一与合子胚一样，在珠心胚和植株之，在珠心胚和植株之间无无维管管组织连系，因此即使母体植株感染了病毒，珠心系，因此即使母体植株感染了病毒，珠心胚也是无毒的；胚也是无毒的；③③在自然条件下，珠心胚普通都不能在自然条件下，珠心胚普通都不能发育成熟，育成熟，只需适只需适时从种子中剥离出来，接种在人工培育从种子中剥离出来，接种在人工培育基上，珠心胚才干基上，珠心胚才干长成植株，而成植株，而这些植株些植株该当当是不是不带病毒的母体无性系。

病毒的母体无性系珠心胚具有珠心胚具有3个特征个特征5.花花药培育脱毒培育脱毒花花药培培育育的的最最初初目目的的，，是是培培育育来来源源于于花花药内内部部花花粉粉粒粒的的单倍倍体体植植株株，，并并使使单倍倍体体加加倍倍，，作作为育育种种资料的来源料的来源但但经大大量量实验阐明明花花药培培育育所所得得的的植植株株有有95%以以上上是是能能开开花花结果果的的多多倍倍体体，，而而且且生生长发育育都都优于于母母株已已证明明，，经愈愈伤组织培培育育出出来来的的花花药植植株株是是不不带病病毒毒的的，，借借此此方方法法，，不不仅可可快快速速培培育育出出大大量量的的无无毒毒植植株株，，并并可可省省去去病病毒毒鉴定定任任务，，对基基层消消费运运用用实为一一举两得的事情两得的事情三、分三、分别茎尖的培育情况茎尖的培育情况第第一一种种：：是是生生长停停顿，，接接种种的的组织并并有有扩展展，，颜色色逐逐渐变褐褐而而枯枯死死，，这种种情情况况大大多多是是生生长点点在在分分别接种接种过程中受程中受伤而呵斥的；而呵斥的；第第二二种种：：是是生生长太太慢慢，，茎茎尖尖接接种种后后颜色色逐逐渐变绿，，但但不不见增增大大，，最最后后成成绿色色小小点点。

这是是由由于于生生长素素浓度度偏偏低低，，或或培培育育温温度度过低低所所呵呵斥斥的的，，假假设立立刻刻转入入较高高浓度度生生长素素的的培培育育基基中中，，或或提提高高培育温度，即能促培育温度，即能促进茎尖生茎尖生长；；第第三三种种：：是是生生长过旺旺，，接接种种后后茎茎尖尖明明显增增大大，，约培培育育一一同同后后即即在在茎茎尖尖基基部部产生生愈愈伤组织，，但但不不易易见到到茎茎尖尖的的伸伸长，，组织颜色色也也较浇这是是由由于于培培育育茎茎生生长素素浓度度偏偏高高，，或或光光照照弱弱，，温温度度高高而而呵呵斥斥的的为此此应将将培培育育资料料转入入生生长素素浓度度较低低的的培培育育基基中中，，或或降降低低温温度度，，提提高高光光照照强度度来来处理理否否那那么么时间长了愈了愈伤组织会表会表换生生长分化才干；分化才干；第第四四种种：：是是生生长正正常常、、在在营养养、、激激素素、、温温度度、、光光照照等等各各方方面面条条件件正正常常的的情情况况下下，，接接种种的的茎茎尖尖颜色色逐逐渐变绿，，基基部部逐逐渐增增大大，，有有时构构成成少少量量的的愈愈伤组织，，茎茎尖尖也也逐逐渐伸伸长，，培培育育一一个个月月左左右右转入入无无基基素素的的根根本本培培育育基基，，茎茎尖尖继续伸伸长，，并并产生生根根系系，，最后最后发育成完好植株。

育成完好植株第三第三节 无病毒植株脱毒程序无病毒植株脱毒程序一、一、资料料预备1．决．决议植物种植物种类及种及种类选用生用生长强壮，壮，遗传性一致的种性一致的种类为资料，并探料，并探明明该种种类除所脱除除所脱除 的病毒在寄主中的位置的病毒在寄主中的位置2．了解．了解该植物体内所具有的病毒种植物体内所具有的病毒种类及危害的程及危害的程 度根据植物所度根据植物所带病毒种病毒种类，，选择指示植物指示植物(敏感植物敏感植物)3．决．决议脱除病毒的方法：脱除病毒的方法：“茎尖培育〞茎尖培育〞还是是“热处置〞置〞还是是“微体嫁接〞微体嫁接〞二、生二、生长点分点分别和培育和培育(茎尖培育茎尖培育为例例)1．从罹病的植株上切取．从罹病的植株上切取顶芽或腋芽芽或腋芽2．．资料外表料外表灭菌、决菌、决议灭菌菌药剂、、浓度、度、时间3．根据病毒在寄主内分布位置决．根据病毒在寄主内分布位置决议切取茎尖大小切取茎尖大小假假设热处置，那么决置，那么决议热处置的温度、置的温度、时间4．接种．接种胜利率与茎外形构造有关利率与茎外形构造有关例例 马铃薯、百合生薯、百合生长点呈半点呈半圆形形较大、好分大、好分别。

番薯、矮番薯、矮牵牛、香石竹呈半牛、香石竹呈半圆形，也比形，也比较好分好分别 大大丽花、菊花生花、菊花生长点扁平、并被点扁平、并被对生叶原基生叶原基夹住住难分分别 草莓，叶原基上生有密集茸毛，生草莓，叶原基上生有密集茸毛，生长点埋在肉点埋在肉质凹形槽凹形槽 内，不内，不仅难分分别且容易且容易污染三、无病毒植物的鉴定三、无病毒植物的鉴定经过茎尖分生茎尖分生组织培育、培育、热处置脱毒法、微体嫁置脱毒法、微体嫁接法而培育成的植株，不一定都是无病毒植株接法而培育成的植株，不一定都是无病毒植株当前用于病毒当前用于病毒检测的方法有如下的方法有如下3种：种：①①血清血清鉴定法；定法；②②生物生物鉴定法定法(敏感植物或指示植物敏感植物或指示植物)；；③③电子子显微微镜鉴定法采用采用单一一鉴定法并不非常可靠特定法并不非常可靠特别是是对一些特一些特异性病毒，异性病毒，单一一鉴定方法可靠性更差最好三定方法可靠性更差最好三种方法同种方法同时鉴定，可以定，可以获得理想的得理想的结果(一一)　指示植物鉴定法　指示植物鉴定法1、原理、原理 指示植物法是利用病毒在其它植指示植物法是利用病毒在其它植物上产生的枯斑作为病毒种类鉴物上产生的枯斑作为病毒种类鉴别的规范，也即枯斑和空斑测定别的规范，也即枯斑和空斑测定法。

法2、指示植物两种、指示植物两种类型型一一种种是是接接种种后后产生生系系统性性病病症症，，出出如如今今病病毒毒扩展展到到的的植植物物非非接接合合部部位位，，通通常常没没有有部部分分明明显病斑；病斑；另另一一种种是是只只产生生部部分分病病斑斑，，常常由由坏坏死死、、褪褪绿或或环斑构成常常用用的的指指示示植植物物：：千千日日红、、曼曼陀陀罗、、豇豇豆豆、、心叶烟、辣椒、莨菪等心叶烟、辣椒、莨菪等 每种病毒都有本人的敏感植物如：每种病毒都有本人的敏感植物如：马铃薯病毒的敏感植物：千日红、黄花烟、心叶马铃薯病毒的敏感植物：千日红、黄花烟、心叶烟、烟、 毛叶曼陀罗；毛叶曼陀罗；大蒜病毒的敏感植物：藜、千日红；大蒜病毒的敏感植物：藜、千日红；草莓病毒的敏感植物：威州草莓草莓病毒的敏感植物：威州草莓(从八倍体野生种从八倍体野生种选出选出)、野草莓、野红草莓等野草莓、野红草莓等桃红叶病毒的敏感植物：旱金莲桃红叶病毒的敏感植物：旱金莲大丽花病毒的敏感植物：昆落阿藜、苋色藜、心大丽花病毒的敏感植物：昆落阿藜、苋色藜、心叶烟、克里芙兰烟、矮牵牛、黄瓜叶烟、克里芙兰烟、矮牵牛、黄瓜香石竹病毒的敏感植物：昆落阿藜、苋色藜。

香石竹病毒的敏感植物：昆落阿藜、苋色藜菊花病毒的敏感植物：矮牵牛、豇豆菊花病毒的敏感植物：矮牵牛、豇豆3、敏感植物、敏感植物鉴定病毒的方法：定病毒的方法： A、摩擦接种法：、摩擦接种法：取培育植株的叶片榨汁，将其汁用摩擦法接取培育植株的叶片榨汁，将其汁用摩擦法接种到各自的敏感植物上，然后种到各自的敏感植物上，然后视其病斑有其病斑有无，来判无，来判别能否脱除了病毒能否脱除了病毒接种后如假接种后如假设敏感植物叶片表敏感植物叶片表现病斑，可根病斑，可根据病斑据病斑类型判型判别，，还有哪种病毒没有脱除有哪种病毒没有脱除 例：马铃薯体内各种病毒在其敏感植物上表现的例：马铃薯体内各种病毒在其敏感植物上表现的病症：病症：X病毒侵染千日红病毒侵染千日红(叶片呈枯斑叶片呈枯斑)；；M、、S病毒侵染千日红病毒侵染千日红(叶片呈突起枯斑叶片呈突起枯斑)；；X病毒侵染黄花烟病毒侵染黄花烟(叶片呈花叶叶片呈花叶)；；Y病毒侵染黄花烟病毒侵染黄花烟(叶片花叶或条斑或呈明显脉绿叶片花叶或条斑或呈明显脉绿带带)；；X病毒侵染心叶烟病毒侵染心叶烟(叶片呈花叶叶片呈花叶)；；Y病毒侵染心叶烟病毒侵染心叶烟(叶片呈条斑叶片呈条斑)；；P／／G带毒体侵带毒体侵染心叶烟染心叶烟(叶片呈花叶叶片呈花叶)；；M、、Y病毒侵染毛叶曼陀罗病毒侵染毛叶曼陀罗(叶片呈枯斑叶片呈枯斑)。

植物汁液摩擦接种后，如使千日红叶片呈枯斑，植物汁液摩擦接种后，如使千日红叶片呈枯斑，使黄花烟、心叶烟叶片呈花叶证明，该植物体使黄花烟、心叶烟叶片呈花叶证明，该植物体内具有马铃薯内具有马铃薯X病毒B．嫁接法：．嫁接法：有些病毒不是经过汁液传播，而是经过专有些病毒不是经过汁液传播，而是经过专门的介体传播如草莓黄化病毒、草莓门的介体传播如草莓黄化病毒、草莓丛枝病毒是经过一种特殊的蚜虫为介体丛枝病毒是经过一种特殊的蚜虫为介体进展传播进展传播这种病毒的鉴定，需将培育植株的芽嫁接这种病毒的鉴定，需将培育植株的芽嫁接在敏感植物上，根据敏感植物的病症表在敏感植物上，根据敏感植物的病症表现来判别能否脱除了病毒现来判别能否脱除了病毒木本多年生植物及草莓等无性繁衍的草本木本多年生植物及草莓等无性繁衍的草本植物通常采用嫁接接种的方法植物通常采用嫁接接种的方法以以指指示示植植物物作作砧砧木木，，被被鉴定定植植物物作作接接穗穗，，可可采采用用劈劈接接、、靠靠接接、、芽芽接接等等方方法法嫁嫁接接，，其其中中以以劈劈接接法法为多如如草草莓莓以以对病病毒毒敏敏感感的的欧欧洲洲草草莓莓〔〔野野草草莓莓〕〕和和深深红莓莓作作指指示示植植物物，，从从经脱脱毒毒得得到到的的植植株株上上仅取取成成龄叶叶片片顶端端一一小小叶叶作作接接穗穗，，叶叶柄柄用用刀刀片片削削成成楔楔形形，，削削面面长8~10 mm，，然然后后迅迅速速将将接接穗穗小小叶叶的的叶叶柄柄插插入入切切口口，，用用塑塑料料绑缚接接合合部部，，嫁嫁接接后后4周周，，假假设带有有病病毒毒，，那那么么在在新新展展开开的的叶叶片片、、匍匐茎或老叶上会出匍匐茎或老叶上会出现病征病征 〔二〕抗血清鉴定法1、根本原理：、根本原理：当当动物被病毒感染或人工注射异体物被病毒感染或人工注射异体蛋白蛋白质时，在，在动物体内会物体内会产生一生一种特异性丙种球蛋白称种特异性丙种球蛋白称为免疫球免疫球蛋白，即所蛋白，即所谓“抗体〞。

抗体〞引起构成抗体的物引起构成抗体的物质(病毒或异体蛋病毒或异体蛋白白)称称为“抗原〞•抗原和抗体抗原和抗体结合，表合，表现为很很强的特的特异性即由一种病毒异性即由一种病毒产生的抗体，生的抗体，只能只能结合合该种病毒抗体在特殊种病毒抗体在特殊细胞内构成，胞内构成，进入血液存在于血清和入血液存在于血清和体液内•这种含有特异性种含有特异性“抗体〞的血清称抗体〞的血清称为“抗血清〞抗原和抗体相抗血清〞抗原和抗体相结合的反合的反响称响称为“血清反响〞血清反响〞2.病毒抗血清在诊断上的价值病毒抗血清在诊断上的价值A.病毒抗血清具有高度的专化性即由一种病毒产生的“抗体〞，只能结合该种病毒(抗原)如由注射(感染)TMV而产生的抗体(免疫球蛋白)，只能检测TMV病毒(才能够发生血清反响)B．由于“抗血清〞法具有高度专化性，因此对于那些受感染而没有病症的带毒植物，也能诊断，故在适用上具有很高的价值C．由于病毒与“抗血清〞的“反响量〞与病毒浓度成正比只需知道其中一种浓度，可根据反响量来测定另一种的浓度故此可以用来作病毒的定量分析3.病毒抗血清在诊断上的局限性：病毒抗血清在诊断上的局限性：A.不是一切病毒都能制成抗血清，普通不是一切病毒都能制成抗血清，普通“黄化型黄化型〞病毒，或〞病毒，或严厉由由专化性昆虫化性昆虫传播的病毒。

如播的病毒如马铃薯卷叶病毒极薯卷叶病毒极难或不能或不能获得得“抗血清〞抗血清〞B．病毒在寄主体内含量太少，而提．病毒在寄主体内含量太少，而提纯过程中程中丧失又太多或者提失又太多或者提纯过程中，病毒程中，病毒质粒粒丧失了失了必必备的抗原构造的抗原构造C．植物体内具有．植物体内具有单宁物宁物质，，单宁与病毒宁与病毒结合，合，使病毒使病毒丧失了抗原性失了抗原性质4.方法方法 •抗血清抗血清鉴定首先要定首先要进展抗原的制展抗原的制备，包括病毒，包括病毒的繁衍、病叶研磨、汁液的廓清、病毒的繁衍、病叶研磨、汁液的廓清、病毒悬浮液浮液的提的提纯、病毒的沉淀等、病毒的沉淀等过程只需获得高得高纯度度的抗原，才有能的抗原，才有能够获得高度得高度纯真的抗血清真的抗血清•普通采用家兔制普通采用家兔制备抗植物病毒的抗血清，以抗植物病毒的抗血清，以9~24个月大小的家兔个月大小的家兔为好，注射病毒好，注射病毒悬浮液，浮液，在家兔在家兔饥饿12 h后采血，再后采血，再进展抗血清的分展抗血清的分别和吸收等和吸收等过程血清可分装在小玻璃瓶中，程血清可分装在小玻璃瓶中，储存在－存在－15~－－20 ℃的冰的冰冻条件下，也可以分装条件下，也可以分装在安瓶中，冷在安瓶中，冷冻枯燥，然后密封，有效保管。

枯燥，然后密封，有效保管•详细测定可采用沉淀反响、凝集反响、详细测定可采用沉淀反响、凝集反响、免疫分散、免疫电泳、荧光抗体技术和免疫分散、免疫电泳、荧光抗体技术和酶联免疫吸附实验等多种方法酶联免疫吸附实验等多种方法酶联免疫吸附法酶联免疫吸附法 (enzyme 1inked immunOsOrbentassay，，EL工工SA)•酶联免疫吸附法是把抗原免疫吸附法是把抗原—抗体的免疫抗体的免疫反响与反响与酶的催化反响相互的催化反响相互结合而开展起合而开展起来的一种来的一种综合性技合性技术，它的灵敏度高，，它的灵敏度高，特异性特异性强，特，特别是当寄主体内病毒是当寄主体内病毒浓度度很低或同很低或同时存在病毒存在病毒钝化物或抑制化物或抑制剂时，，它的它的优势尤尤为明明显，因此是近年来病毒，因此是近年来病毒检测方法中开展最快、运用最广的一种方法中开展最快、运用最广的一种方法 酶联免疫吸附法的原理酶联免疫吸附法的原理•利用以利用以酶标志的特异抗体来指示抗原志的特异抗体来指示抗原—抗体的抗体的结合，从而合，从而检出出样品中的抗原品中的抗原•详细操作程序是：将待操作程序是：将待检植物汁液植物汁液(抗原抗原)注入注入酶联板板(聚苯乙聚苯乙烯多孔微量反响板多孔微量反响板)中，使抗原中，使抗原吸附于它的孔壁，然后参与以吸附于它的孔壁，然后参与以酶标志的特异抗志的特异抗体，待抗原与抗体充分反响后，洗去未与抗原体，待抗原与抗体充分反响后，洗去未与抗原结合的多余合的多余酶标志抗体，于是在固相志抗体，于是在固相载体体酶联板外表就只留下以板外表就只留下以酶标志的抗原志的抗原—抗体复合物。

抗体复合物这时参与参与酶的无色底物，复合物上的的无色底物，复合物上的酶催化底催化底物降解，生成有色物降解，生成有色产物这一一结果可用肉眼果可用肉眼识别，也可用分光光度，也可用分光光度计对底物的降解量底物的降解量进展展测定血清鉴定血清鉴定法法血清鉴定的根本方法血清鉴定的根本方法•A.玻璃片凝集法玻璃片凝集法•在清在清洁玻璃片的一端，用毛玻璃片的一端，用毛细管滴加管滴加5滴滴稀稀“抗血清〞，另一端滴加等量抗血清〞，另一端滴加等量对照血清然后各加滴被然后各加滴被检植物植物压榨出的原汁液两榨出的原汁液两滴用玻璃棒滴用玻璃棒搅匀，在常温下静置匀，在常温下静置20-50min，然后在，然后在40-60倍倍显微微镜下察看带病毒的叶病毒的叶绿体体发生典型的凝集景象生典型的凝集景象玻璃片玻璃片凝集法凝集法•B．微量凝集．微量凝集实验(MAT)•在培育皿底部，在培育皿底部，铺上一上一层火棉胶或聚乙火棉胶或聚乙烯醇醇缩甲甲醛薄膜，然后将抗血清滴入薄薄膜，然后将抗血清滴入薄膜上，再在血清液滴上方覆盖一膜上，再在血清液滴上方覆盖一层石蜡石蜡油在20—25℃下保温，下保温，20-50min后察后察看•此法此法优点：点：鉴定定时可以完全防止蒸可以完全防止蒸发，，抗血清用量少，每毫升抗血清可滴加抗血清用量少，每毫升抗血清可滴加150次，每培育皿可以次，每培育皿可以鉴定几十个定几十个样品。

品对某些病毒某些病毒(马铃薯薯M病毒病毒)引起的引起的细微病毒微病毒凝聚景象均可凝聚景象均可识别 〔三〕　〔三〕　电子子显微微镜检查法法采用采用电子子显微微镜，可以，可以经过直接察看，直接察看，检查出有无出有无病毒存在，并可以得知有关病毒病毒存在，并可以得知有关病毒颗粒的大小、外粒的大小、外形和构造形和构造,又可以又可以鉴定病毒的种定病毒的种类这是一种是一种较为先先进的方法，但需一定的的方法，但需一定的设备和技和技术 病毒病毒 形状形状 长(nm) 宽〔〔nm〕〕 X 线 状状 515 13 Y 线 状状 730 11 A 线 状状 730 11 S 线 状状 650 12~13 M 线 状状 650 12~13•灵敏度高和能在植物粗提取液中定量测定病毒。

灵敏度高和能在植物粗提取液中定量测定病毒•目前运用负染和超薄切片电镜察看可以诊断和目前运用负染和超薄切片电镜察看可以诊断和鉴别病毒到属的程度鉴别病毒到属的程度•1973年，年，Derrick把电镜与免疫学技术相结合，把电镜与免疫学技术相结合，建立了更为灵敏的免疫吸附电镜技术，该技术建立了更为灵敏的免疫吸附电镜技术，该技术已成为植物病毒研讨的一个重要手段已成为植物病毒研讨的一个重要手段方法的优点方法的优点(四四)分子生物学方法分子生物学方法•在植物病毒鉴定中采用的分子生物学方法主要是检测病毒的核酸•普通都具有快速、简便、灵敏度高、特异性强等特点•核酸杂交技术的原理:采用带有放射性或非放射性物质标志的知序列核酸单链作为探针，在一定条件下与靶病毒的核酸单链退火构成杂交双链经过杂交信号的检测，鉴定样本中有无相应病毒的基因•19世纪末以来，许多国家开场用聚合酶链式反世纪末以来，许多国家开场用聚合酶链式反响响(PCR)技术检测果树病毒，并获得很好的效技术检测果树病毒，并获得很好的效果•常用的有聚合酶链式反响常用的有聚合酶链式反响(polymerase chain reaction，，PCR)技术，即利用知病毒的核苷酸技术，即利用知病毒的核苷酸序列或同组病毒的类似序列区域来设计引物，序列或同组病毒的类似序列区域来设计引物，将待测样品用将待测样品用PCR技术体外扩增技术体外扩增DNA，扩增后，扩增后的产物可进展限制性片段长度多态性的产物可进展限制性片段长度多态性(restriction fragment length polymorphism，，RFLP)、随机扩增多态性、随机扩增多态性DNA(random amplified polymorphic DNA RAPD)、扩增片、扩增片段长度多态性段长度多态性(amplified fragment length polymorphism，，AFLP)、变性梯度凝胶电泳、变性梯度凝胶电泳(denaturing grade gel electrophoresis，，DGGE)、单链构象多态性、单链构象多态性(single-strandconformation polymorphism，，SSCP)、、探针交叉杂交等技术分析检测病毒能否存在。

探针交叉杂交等技术分析检测病毒能否存在由于多数植物病毒核酸是由于多数植物病毒核酸是RNA，在进展，在进展PCR检测检测前，需以前，需以RNA为模板，经逆转录生成为模板，经逆转录生成cDNA后，后，再利用病毒核酸特有的序列设计的引物进展再利用病毒核酸特有的序列设计的引物进展PCR反响，即可知道在寄主中能否有病毒存在反响，即可知道在寄主中能否有病毒存在RNA病毒和类病毒等在寄主体内可构成双链病毒和类病毒等在寄主体内可构成双链RNA(dsRNA)，而普通情况下植物体内不存在，而普通情况下植物体内不存在dsRNA，因此，因此dsRNA分析也可用于植物病毒鉴分析也可用于植物病毒鉴定利用利用DNA杂交和荧光标志技术相结合杂交和荧光标志技术相结合的基因芯片技术也是植物病毒快速的基因芯片技术也是植物病毒快速检测的重要开展方向检测的重要开展方向在实践运用中，为了提高检测的可靠在实践运用中，为了提高检测的可靠性，往往用几种方法同时鉴定最性，往往用几种方法同时鉴定最后选择出的无毒苗即可进展扩增繁后选择出的无毒苗即可进展扩增繁衍，用于消费但在无毒种苗的扩衍，用于消费但在无毒种苗的扩增繁衍和运用过程中应留意防止再增繁衍和运用过程中应留意防止再度感染。

度感染植物脱毒苗消植物脱毒苗消费运用尚不普遍，运用尚不普遍，缘由如下：由如下：①①根底研根底研讨跟不上，跟不上，诸如病毒特性与寄主的如病毒特性与寄主的关系，各植物种体内都有什么病毒等关系，各植物种体内都有什么病毒等②②脱毒培育后如何快速脱毒培育后如何快速检测③③得到脱毒原种苗后，如何保管得到脱毒原种苗后，如何保管?如何防止如何防止再度侵染等再度侵染等四、无毒原种苗的繁衍四、无毒原种苗的繁衍•经茎尖培育法，热处置法、微体嫁接法获得经茎尖培育法，热处置法、微体嫁接法获得的无病毒株数量是很有限的，需扩展繁衍才的无病毒株数量是很有限的，需扩展繁衍才干满足消费需求干满足消费需求•一方面充分发扬组织培育作用，在室内加速一方面充分发扬组织培育作用，在室内加速繁衍；另一方面加速田间繁衍繁衍；另一方面加速田间繁衍•与此同时对脱毒株系进展植物学性状鉴定，与此同时对脱毒株系进展植物学性状鉴定，遗传稳定性鉴定，并根据病毒鉴定结果，淘遗传稳定性鉴定，并根据病毒鉴定结果，淘汰有毒株系，保管性状优良无毒株系汰有毒株系，保管性状优良无毒株系五、无毒原种的保管•无毒植株并不具有额外的抗病性，它们有能够无毒植株并不具有额外的抗病性，它们有能够很快又被重新感染。

为理处理这个问题，应将很快又被重新感染为理处理这个问题，应将无毒原种种在温室或防虫罩内灭过菌的土壤中无毒原种种在温室或防虫罩内灭过菌的土壤中•在大规模繁衍这些植物的时候，应把它们种在在大规模繁衍这些植物的时候，应把它们种在田间的隔离区内，其中应很少有或完全没有重田间的隔离区内，其中应很少有或完全没有重新感染的时机新感染的时机•另外一种更容易也是更廉价的方法，是把由茎另外一种更容易也是更廉价的方法，是把由茎尖得到的并曾经过脱毒检验的植物经过离体培尖得到的并曾经过脱毒检验的植物经过离体培育进展繁衍育进展繁衍 六、脱毒植株的运用六、脱毒植株的运用•在研讨特定病毒对寄主植物的影响时，无毒植在研讨特定病毒对寄主植物的影响时，无毒植株是非常有用的实验资料株是非常有用的实验资料•更重要的是，主要是经过茎尖培育所得到的无更重要的是，主要是经过茎尖培育所得到的无毒植株的发育情况阐明，很多病毒能在寄主植毒植株的发育情况阐明，很多病毒能在寄主植物中呵斥生活力、质量和产量的严重损失物中呵斥生活力、质量和产量的严重损失•经过把知病毒引入无毒植株，并比较同一个无经过把知病毒引入无毒植株，并比较同一个无性系的感病株和无毒株的表现，可以对病毒呵性系的感病株和无毒株的表现，可以对病毒呵斥的产量损失做出更准确的估计。

斥的产量损失做出更准确的估计 •经过茎尖培育的方法，茎尖培育的方法，Stone(1973)由由—个种个种类的水仙中的水仙中获得了一个无阿拉伯花叶病毒和水仙得了一个无阿拉伯花叶病毒和水仙退化病毒的无性系退化病毒的无性系•这种无毒种无毒鳞茎比普通原种茎比普通原种长得快，生活力得快，生活力强，，比受侵染的植株花大，比受侵染的植株花大，颜色丰富，每个茎的花色丰富，每个茎的花多大黄脱毒后叶柄多大黄脱毒后叶柄产量添加了量添加了60％－％－90％•天竺葵的很多种天竺葵的很多种类带有不表有不表现病症的病毒据病症的病毒据报道，由其茎尖培育道，由其茎尖培育产生的植株比未受生的植株比未受过处置置的植株生活力的植株生活力强，，产生插条的数目多生插条的数目多20％一％一30％，而且％，而且这些插条很容易生根些插条很容易生根七、病毒以外病原菌的离体消除七、病毒以外病原菌的离体消除方法方法•茎尖培育和愈伤组织培育主要用于消除茎尖培育和愈伤组织培育主要用于消除病毒，但有些证听阐明，也可经过培育病毒，但有些证听阐明，也可经过培育消除其他病原菌如类菌质体、细菌和真消除其他病原菌如类菌质体、细菌和真菌•jacoli(1978)指出，胡萝卜外植体经过反指出，胡萝卜外植体经过反复转管后，其中感染的星黄菌复转管后，其中感染的星黄菌(类菌质体类菌质体状小体状小体)逐渐退化并在逐渐退化并在80d内消逝。

内消逝•培育的植物组织内带有的细菌和真菌，培育的植物组织内带有的细菌和真菌，由于在培育基上增殖很快，在普通情况由于在培育基上增殖很快，在普通情况下很容易表现出来下很容易表现出来•经过茎尖培育曾经在花叶万年青和天竺经过茎尖培育曾经在花叶万年青和天竺葵中消除了这类周身侵染的细菌葵中消除了这类周身侵染的细菌•在康乃馨中曾经消除了由蔷薇镰孢霉引在康乃馨中曾经消除了由蔷薇镰孢霉引起的茎腐病起的茎腐病•无毒种苗在无毒种苗在实践运用中的践运用中的问题是再度感是再度感染，如何防止再度感染，必需建立一种染，如何防止再度感染，必需建立一种体系•在在这种体系中种体系中应做到：研做到：研讨、繁衍、消、繁衍、消费严厉分工原原种和原种的繁衍，必分工原原种和原种的繁衍，必需在隔离的网室中需在隔离的网室中进展；良种的繁衍，展；良种的繁衍，可采用集可采用集团隔离即在无毒源和其他病虫隔离即在无毒源和其他病虫害的大田中害的大田中进展良种提供展良种提供农家消家消费，，经2—3年后再度感染，可全部更新年后再度感染，可全部更新(1)热处置置为什么可以去除部分植物病什么可以去除部分植物病毒毒?热处置方法分置方法分为几种，常用的是几种，常用的是哪一种哪一种? (2)如何如何鉴定茎尖培育而成的脱毒苗确定茎尖培育而成的脱毒苗确实是无毒的是无毒的?(3)为什么用微茎尖什么用微茎尖组织培育构成的培育构成的试管苗普通是无毒的管苗普通是无毒的?思索题思索题。