光合细菌培养基.doc

红红螺螺菌菌培培养养基基：：1 1、、富富集集培培养养基基：： 经典的紫色非硫细菌（红螺菌）的富集培养基的配方为： NH4Cl：0.1g； NaHCO3：0.1g；K2HPO4：0.02g；CH3COONa：0.1~0.5g；MgSO4·7H2O： 0.02g； NaCl：0.05～0.2g； 生长因子 1ml，蒸馏水 97ml，微量元素溶液 1ml，pH 为 7.0 其中，①5％NaHCO3水溶液，过滤除菌取 2m1 加入无菌培养基中 ②生 长因子：维生素 B10.001mg、乙尼克丁酸 0.1mg、对氨基苯甲酸 0.1mg、生 物素 0.001mg，以上药品溶于蒸馏水中，定容至10ml，然后过滤除菌 ③ 微量元素溶液： FeCl3·6H2O ：5mg；CuS04·5H2O：0.05mg；H3BO4lmg；MnCl2·4H2O：0.05mg；ZnSO4·7 H2O：1mg；Co(NO3)2·6H2O： 0.5mg以上药品分别溶于蒸馏水中，并定容 至 1000m1 除①、②、③外，各成分溶解后 100 Pa 灭菌 20min然后分别加入 ①、②、③，如加入 0.1％～0.3％的蛋白胨则能促进该菌生长。

2 2、、分分离离培培养养基基：： 传统的红螺科分离培养基的配方为： NH4Cl：0.1g； MgCl2：0.02g； 酵母膏：0.01g； K2HPO4：0.05g； NaCl： 0.2g； 琼脂 2g，蒸馏水 90ml100Pa 灭菌 20min 灭菌后，无菌操作加入经过滤除菌的0.5g/5mlNaHCO3，再无菌加入过 滤除菌的 0.1g 或 0.1mlNa2S·9H2O（降低培养基的氧化还原值），最后再加 入 5ml 经过滤除菌的乙醇、戊醇或 4％丙氨酸用过滤灭菌的0.1mol/H3PO3调 pH 至 7.0 摘自百度知道筛选富集培养基为: NH4Cl 1g/L, NaHCO3 1g/L, CH3COONa 3g/L, KH2PO4 0.3g/L, MgSO4 0.1g/L, 酵母膏 0.5g/L, 微量元素母液 1g, 自然 pH 值扩大培养培养基以海水代替微量元 素母液1000~4000lx 光照, (30±2)℃恒温培养 参考文献：固定化海洋光合细菌处理生活污水的研究* 黄宝兴,李兰生,赵亮,张微,唐迎迎 海洋湖沼通报基础培养基:NH4Cl:1g; Na2HPO4: 0.5g; MgSO4: 0.2g; NaCl: 2g; NaHCO3: 5g; 酵母膏:2g ; 乙醇 2ml，用 0.1N H3PO4调至 pH7.0。

划线培养基:采用固体琼脂培养基，即在基础培养基的基础上添加 1.0%的琼脂 以上培养基初始 pH 值均用 H3PO4调至 7.0，经 121℃灭菌 30 分钟，NaHCO3过滤除 菌后加入培养条件:光照培养箱温度控制在 30℃、光照强度控制在 3000uE.m-2s-1培养光合细菌是一种兼性嫌气细菌，需要深层培养或在真空干燥器内达到嫌气或半嫌气状态， 一般将混合菌放入培养液中先富集再分离具体方法:将混合菌装入 10ml 试管中，加入培 养液充满至刻度，盖上胶塞，在光照条件下保持在 30℃左右培养待培养液出现红色后， 取培养液加 1.5%的琼脂，制成固体培养基，取菌液分别用无菌水以 10-100000000 倍稀释， 分别取 lml 样本涂在平皿上，光照、30℃培养 2d 左右在平板上长出菌落移至平板采用划 线法进行分离，将划好线的平板倒置，在相同条件下培养，反复分离纯化，挑取不同特征 的菌落，用斜面保存，纯化分离后的菌种置于冰箱保存备用PSB 培养中除碳、氮、磷等主要营养元素外，还需要一定量的镁、钙、钠和有关的微 量元素，将所需的营养元素按一定的比例配成适于菌体生长繁殖的培养基本实验室采用 酵母膏、蛋白胨培养基，基本配方为:CaCl2 0.3g，MgSO4·7H2O 0.5g，酵母膏 3g，蛋白胨 3g，蒸馏水 1000ml，pH: 6.8. 如需制固体培养基再加 2%琼脂。

培养温度：25℃～30℃最 佳，光照强度：2000LX～5000LX，PH：7.5～8.5 最佳把菌种接种到灭好菌的培养基中，在三角瓶中进行二级培养，每天摇晃几次把 40L 的反应器中加满自来水，放入通气管，盖上保鲜膜一起用次氯酸杀菌消毒 24 小时，用硫代 硫酸钠（1L 次氯酸需要 150g 硫代硫酸钠）来中和以 15%的接种量接入反应器中，用泵 通气培养，用分光光度计跟踪测量菌液的密度，得到菌液的密度较高，而且反应器还可以 进一步放大 参考文献：光合细菌的培养及应用 魏玉利参考文献：2.5.1.1 灭菌条件 （1）高压蒸汽灭菌 小件玻璃器皿、培养基等采用湿式高压蒸汽灭菌这种灭菌方式可以 达到彻底的灭菌灭菌条件：0.103 MPa，120 ℃，20min （2）紫外灭菌 无菌操作台采用紫外灭菌方式，用紫外灯灭菌 30min该种方式对空气进 行灭菌 2.5.1.2 光合细菌的纯培养 本课题研究所用光合细菌为 Z08，除特殊说明外，皆是由纯培养获得将 50 mL HCH 培养基灌装于 250 mL 三角瓶，用封口膜将瓶口密封，以防止灰尘和杂菌进入灌 装好的培养基采用高压蒸汽灭菌 20 min。

待冷却以后，在无菌操作台中接种 OD660=1.0（干重 840 mg/L）的 Z08 15 mL接种后将菌液放置在 140 rpm 的恒温摇床中 培养，控制温度 30 ℃，24 h 照明，照度 500—1000 lx，培养 48 h 达到稳定期培养后 的光合细菌保存在 4 ℃条件下备用 红色非硫光合细菌富集培养基的配制: NaHCO3 1.0 g; NH4Cl 1 g; K2HPO4 0.2 g; CH3COONa 1.0~5.0 g;MgSO4·7H2O 0.2 g; NaCl 0.5~2.0 g;酵母浸汁 0.1 g;微量元素 10 mL 将上述成分溶于蒸馏水中,调节 pH 至 7.0,定容 1000 mL在 115℃下灭菌 20 min 参考文献：光合细菌菌体分离回收以及实现啤酒废水资源化的研究 戴 晓光合细菌的分离与培养 ① 液体富集培养基：CH3COONa 3.0 g ，CH3CH2COONa 0.3 g，NaCl 1.0 g，(NH4)2SO4 0.3 g，MgSO4·7H2O 0.5 g，K2HPO4 0.7 g，CaCl2 0.05 g，MnSO4 0.0025 g，FeSO4 0.005 g，酵 母膏 0.1 g，谷氨酸 1.0 g，蒸馏水定容至 1 L，调 pH 至 7.4。

② 固体分离培养基：CH3COONa 3.0 g·L-1，酵母膏 3.0 g·L-1，CaCl2 0.3 g·L- 1，MgSO4·7H2O 0.5g·L-1，琼脂 20 g·L-1，调 pH7.4 培养条件：取少量活性污泥样品于装有 120 mL 富集培养基的 125 mL 血清瓶中富集， 置于光照培养箱中 30 ℃培养，照度为 2000 1x6~9 d 后，液体培养基变为红色，经摇床 振荡稀释处理后，涂布和划线于平板固体培养基上，置于恒温培养箱中黑暗好氧培养，7 d 后获得单菌落在平板固体培养基中重复划线 3 次以上，直到在显微镜下观察为纯菌 参考文献：一株光合细菌的分离鉴定及污水处理能力研究 周洪波，刘飞飞，邱冠周1·2 培养基 优化培养实验采用 RCVBN 扩大培养基,其组成为:CH3COONa 3.0g, (NH4)2SO4 1.0g, MgSO4 0.2g, NaCl 1.0g, KH2PO4 0.3g, K2HPO4 0.5g, CaCl2 0.05g, 酵母膏 0.1g, 微量元素溶液 1mL, 蒸馏水 1000mL. 微量元素溶液为改良的 Imhoff 和 Truper 生长因子溶液,其组成为: EDTA-2Na 2g, FeSO4·7H2O 0.2g, MnCl2·4H2O 0.1g, H3BO3 0.1g, CoCl2·6H2O 0.1g, ZnCl2 0.1g, Na2MoO4·2H2O 0.02g, NiCl2·6H2O 0.02mg, CuCl2·2H2O 0.01g, 蒸馏水 1000mL。

1·3 培养方法 在 8 个 CSTR 光合培养器中进行分批培养,培养器体积为 50 L培养器光照根据强度不同的 需要分别由三只 25W,40W,60W,100W 白炽灯泡组合提供,培养器的底部设有穿孔曝气管,根 据 DO 含量间歇开启,培养器内设有温控器 参考文献：应用于废水处理的光合细菌优化培养和生长动力学研究 熊万永,林君锋,李玉 林参考文献：有效微生物菌群的构建及处理苯酚与焦化废水的研究2.1.2.2 分离用固体培养基 在液体培养基中加入 2%的琼脂，其它成分不变 2.1.2.3 鉴定用培养基 去掉富集用液体培养基中的苹果酸，而保留其它成分，分别加入经滤器除 菌的最终浓度为 0.2%的各种碳源和电子供体物质其中较知名的培养基为 HCH 光合培养基和 VAN Neil 培养基两种。