真菌显微镜标本制ppt课件.ppt

真菌显微镜标本制备与形状察看技术酵母菌的血球计数技术酵母菌的形状察看 实验原理原理 酵母菌是不运酵母菌是不运动的的单细胞真核微生物，其大胞真核微生物，其大小通常比小通常比细菌大几十倍甚至十几倍大多数以出菌大几十倍甚至十几倍大多数以出芽方式芽方式进展无性繁衍，有的分裂繁衍；有性繁衍展无性繁衍，有的分裂繁衍；有性繁衍是是经过接合接合产生子囊生子囊孢子本实验是是经过美美蓝染染液水浸片和水液水浸片和水—碘液水浸片来察看酵母的形状和碘液水浸片来察看酵母的形状和出芽生殖方式出芽生殖方式 美蓝是一种无毒的染料，它的氧化型呈蓝色，复原型无色用美蓝对酵母的活细胞进展染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的复原才干，使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的复原型因此，具有复原才干的酵母活细胞是无色的，而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞那么呈蓝色，借此即可对酵母菌的死活细胞进展鉴别水浸片法察看水浸片法察看l1、菌种活化l 将酵母移种至新颖的麦芽汁琼脂斜面上，25~28℃ 培育48 h左右备用l2、美蓝镜片的察看l1〕在载玻片中央加一滴0.1%吕氏碱性美蓝染色掖，l2)然后按无菌操作用接种环挑取少量酵母菌苔放在染液中，混合均匀。

l3〕用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后 渐渐将盖玻片放下使其盖在菌液上再将多余的染液用滤纸吸干l4〕将制片放置约3min后镜检，先用低倍镜然后用高倍镜察看酵母的形状和出芽情况，并根据颜色来区别死活细胞l5〕染色约0.5h后再次进展察看，留意死活细胞数量能否添加 l6〕用0.05%吕氏碱性美蓝染液反复上述操作l3、水一碘液镜片的察看l在载玻片中央加一小滴革兰氏染色用碘液，然后在其上加3小滴水，取少许酵母菌苔放在水一碘液中混匀，盖上盖玻片后镜检 l本卷须知l1、加染液不宜过多或过少，否那么，在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量气泡而影响察看l2、盖玻片不宜平着放下，以免产生气泡影响察看酵母菌的出芽生殖蜉蝣体外表的酵母菌霉菌的形状察看l实验原理实验原理l 霉菌为真核微生物，菌丝较粗大，有分枝或不分枝霉菌为真核微生物，菌丝较粗大，有分枝或不分枝的菌丝体为五色透明或暗褐色至黑色，或呈现艳丽的菌丝体为五色透明或暗褐色至黑色，或呈现艳丽的颜色在显微镜下察看时，菌丝皆呈管状在固体的颜色在显微镜下察看时，菌丝皆呈管状在固体培育基上生长，为绒毛状或棉絮状一些较高等的霉培育基上生长，为绒毛状或棉絮状。

一些较高等的霉菌丝状管道中皆有横隔，由横格状菌丝隔成许多细胞菌丝状管道中皆有横隔，由横格状菌丝隔成许多细胞细胞易收缩变形，而且孢子很容易分散，所以制标本细胞易收缩变形，而且孢子很容易分散，所以制标本时常用乳酸石炭酸棉蓝染色液该染色液使细胞不变时常用乳酸石炭酸棉蓝染色液该染色液使细胞不变形，具有防腐杀菌作用，且不易枯燥．，能坚持较长形，具有防腐杀菌作用，且不易枯燥．，能坚持较长时间，溶液本身呈蓝色，有一定的染色效果时间，溶液本身呈蓝色，有一定的染色效果 水浸片法察看l1〕取一块干净的载玻片，于载玻片的中央加一滴美蓝染色液，l2〕按无菌操作用接种环挑取少量酵母菌苔放在染液中，混合均匀l3〕用干净的加盖玻片悄然盖上，留意不要产生气泡，l4〕置于显微镜下察看，菌丝呈兰色，颜色的深度随菌龄的添加而减弱各种霉菌的形状构造l察看根霉时，留意察看其菌丝有无横隔、假根、孢子囊柄、孢子囊、囊轴、囊托、孢子囊孢子及厚垣孢子l察看毛霉时，留意察看其菌丝无横隔、孢子囊柄、囊轴、孢子囊孢子及后垣孢子l察看曲霉时，留意察看其菌丝有横隔、足细胞、分生孢子梗、顶囊、小梗〔外形、层数及着生情况〕、分生孢子l察看青霉时，留意察看其菌丝有横隔、分生孢子梗、帚状枝〔小梗的轮数及对称性〕、分生孢子。

l察看红曲霉时，留意察看其菌丝有横隔、分生孢子着生情况、闭囊壳、子囊孢子曲霉的形状米曲霉黑曲霉酵母菌的血球计数技术血球计数板酵母菌的血球计数l(1)将血球计数板用擦镜纸擦净,在中央的计数室上加盖盖玻片.l(2)将稀释后的酵母菌悬液,用吸管汲取一滴置于盖玻片的边缘,使菌液渐渐渗入,多余的菌液用吸水纸汲取,捎待片刻,使酵母菌全部沉降到血球计数室内.l　计数原那么l(1)计数时,l假设运用16格×25格规格的计数室,要按对角线位,取左上,右上,左下,右下4个中格(即100个小格)的酵母菌数.l假设规格为25格×16格的计数板,除了取其4个对角方位外,还需再数中央的一个中格(即80个小方格)的酵母菌数.  (2)当遇到位于大格线上的酵母菌,普通只计数大方格的上方和右方线上的酵母细胞(或只计数下方和左方线上的酵母细胞).　(3)对每个样品计数三次,取其平均值,按以下公式计算每1ml菌液中所含的酵母菌个数. 　　3.计算公式　　(1)16格×25格的血球计数板计算公式: 酵母细胞数/ml=100小格内酵母细胞个数/100×400×10000×稀释倍数　　(2)25格x16格的血球计数板计算公式:　　酵母细胞数/ml= 80小格内酵母细胞个数/80×400×10000×稀释倍数单位转换l0.1mm3→1mL3l0.1mm3×10000＝1mL3血球计数板的清洁血球汁数板运用后,用自来水冲洗,切勿用硬物洗刷,洗后自行晾干或用吹风机吹干,或用95%的乙醇,无水乙醇,丙酮等有机溶剂脱水使其枯燥.经过镜检察看每小格内能否残留菌体或其他沉淀物.假设不干净,那么必需反复清洗直到干净为止. 演示终了！希望各位多多指教！。