纸层析法分离鉴定氨基酸.ppt

单击此处编辑母版标题样式,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实验二、纸层析法分离鉴定氨基酸,一、目的：,学习并掌握纸层析法分离鉴定氨基酸的原理和方法将样品点在距滤纸一端约,2,3cm,的某一处，该点称为原点；然后在密闭容器中层析溶剂沿滤纸的一个方向进行展层，这样混合氨基酸在两相中不断分配由于分配系数（,K,d,）不同，结果它们分布在滤纸的不同位置上物质被分离后在纸层析图谱上的位置，可用比移值（,R,f,）来表示所谓,R,f,，是指在纸层析中，从原点至氨基酸停留点（又称为层析点）中心的距离（,X,）与原点至溶剂前沿的距离（,Y,）的比值如图,在一定条件下（如温度、,展层剂的组成、,层析纸质量等不变），某种物质的,R,f,值是常数，因此可作为定性依据由于氨基酸无色，可利用茚三酮反应使氨基酸层析斑点显色，从而作定性分析本实验利用纸层析法分离氨基酸三、操作,1.,在层析缸中装入展层剂，其高度约,1.5,2cm,2.,准备滤纸,:,戴上手套，取层析滤纸（长,22 cm,、宽,14 cm,）一张，在纸的一端距边缘3,cm,处用铅笔画一条直线，在此直线上每间隔2,cm,作一记号，为点样位置（即原点），如图。

注意事项：,手不能直接接触滤纸；直线与底边平行3.,点样：,用毛细管,依次,将,L,ys,(,赖,),、,G,ly(,甘,),、,Pro,(,脯,),、,Val,(,缬,),、,Leu,(,亮,),和混合,样品,分别点在这6个位置上，点样点干后再点一次注意每点在纸上扩散的直径，最大不超过3,mm纸层析点样标准图,L,ys,G,ly,Pro,Val,Leu,混合样品,4、,展层：,将点好样的滤纸,(,点样面朝外,),卷成筒状，用透明胶纸粘接或用线缝好，纸的两边不能接触将滤纸直立于层析缸中（,注意：,点样的一端在下，展层剂的液面需低于点样线,1cm,，滤纸勿与缸壁接触），,盖好层析缸盖，进行,展层,待溶剂上升,15,20 cm,时，取出滤纸，用铅笔描出溶剂前沿界线，电吹风吹干5,、,显色：,用喷雾器均匀喷上,0.1,水合茚三酮正丁醇溶液，然后用,电吹风吹干,即可显出各层析斑点卷成筒状的滤纸,氨基酸显色后的图谱,溶剂前沿,X,Y,四、计算：,用直尺测量并计算出各种氨基酸的,R,f,值样品,aa,标准,aaR,f,混合,aaR,f,赖氨酸,甘氨酸,脯氨酸,缬氨酸,亮氨酸,试剂和器材：,1.,试剂：,(1),氨基酸溶液：,0.5%(m/V),的赖氨酸、脯氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸溶液及它们的混合液,(,各组分的浓度均为,0.5,),。

2),展层剂：正丁醇冰醋酸水,4,1,3(V/V),3),显色剂：,0.1,(m/V),水合茚三酮正丁醇溶液2.,器材：,层析缸；层析滤纸（新华一号）；毛细管,;,喷雾器；电吹风,；直尺,；铅笔；,针线或透明胶带,；一次性手套,。