初中--实验样板1.doc

实验一：环境微生物的分离、染色及显微镜观察学生自己确定的题目：一次性木质筷子表面细菌的分离、染色及显微镜观察%1. 实验目的1 .使学生学会微生物培养基的制备及灭菌的方法2. 使学生学会微生物的分离方法3. 使学生学会细菌的简单染色方法4. 学习显微镜的使用方法5. 培养学生从微生物的角度来判断生活中常用物品的卫生状况%1. 实验原理有些微生物可以在人工配置的培养基中生长，通过在固体培养基上划线分离 或稀释涂布平板的方法可以分离得到单个的微生物菌落一个菌落是由一个细菌 繁殖而来的群体，得到单个菌落即分离到某种微生物采用稀释涂布平板的方法 分离微生物时，还可以通过计算菌落数来计算样品中的细菌数1. 实验器材试剂主要实验药品：牛肉膏、蛋白腺、氯化钠、番红染料主要仪器：培养箱、无菌台、灭菌锅、摇床、光学显微镜1. 实验步骤（-）细菌分离将一次性木质筷子用无菌剪刀剪成3小节，放到装有10ml无菌水的试管中， 然后将试管放置到摇床上震荡30分钟，得到含筷子细菌的菌悬液用接种环直接 在牛肉膏蛋白腺固体培养基中画线分离细菌，或将菌悬液10倍梯度稀释，每个梯 度取0.1ml涂布到含有牛肉膏蛋白腺固体培养基的平板中。

另外，取3-5cm的小段 一次性筷子直接放置到固体培养基中将上述平板置于28.30摄氏度的培养箱中 培养48小时（-）细菌简单染色（1）涂片：挑取单个细菌菌落到滴有一•滴蒸馄水的载玻片上，打匀，制成 菌悬液，再取2.3接种环的菌悬液到另一个干净的载玻片上；（2）晾干：让涂片 自然晾干；（3）固定：手执玻片一•端，让菌膜朝上，通过火焰2.3次固定（以不 烫手为宜）；（4）番红染色：将玻片置于废液缸玻片搁架上，加适量（以盖满细 菌涂面）的结晶紫染色液染色3-5分钟；（5）水洗：倾去染色液，用水小心地冲 洗；（6）晾干：将染好的涂片放空气中晾干或者用吸水纸吸干；（7）镜检：镜检 肘先用低倍，再用高倍，最后用油镜观察；（8）显微镜的清洗： ①将浸过油的 镜头按下述方法擦拭干净，a.先用擦镜纸将油镜头上的油擦去，b.用擦镜纸沾少 许二甲苯将镜头擦2-3次，c.再用干净的擦镜纸将镜头擦2-3次注意擦镜头时 向一个方向擦拭三）细菌计数I.选取菌落数在30-300个的平板；2数一数平板中的菌落数有多少；3根据平板的菌落数及平板样品的稀释倍数推算样品中可培养的细菌总数1. 实验结果1. 一次性木质筷子直接放置到培养基中的培养结果将一次性木质筷子放到培养基中培养后，木质筷子与培养基接触的界 面均长满了细菌和真菌。

图1. 一次性木质筷子在牛肉膏蛋白腺培养基中的培养结果2平板划线分菌从平板划线培养的结果来看，刚开始划线时细菌较多，没有获得单个细菌菌 落，随着划线的进行菌越来越少，到最后出现了单个的菌落图2平板划线分离细菌照片3涂布平板培养结果将原菌悬液直接涂布平板时，平板中的菌太多，将原菌悬液稀释10倍后， 取0.1ml样品涂布平板培养后长出菌落数为50个据此推测，这根一次性筷子 表面的细菌数为50万个！图3,原菌悬液直接涂布平板培养结果图4.原菌悬液稀释10倍后涂布平板培养结果4.细菌的染色和显微镜观察挑取平板中的菌落，制成菌悬液，涂片，然后用番红染料染色，再用显微镜 观察，发现该菌呈长杆状图5.细菌简.单染色后的显微镜观察照片%1. 结论：一次性筷子并不卫生，建议多使用统一灭菌可重复使用的筷子，这样不仅更 环保，而且更卫生。