QPCR拷贝数计算.docx

因为硕士的课题是qRT-PCR,所以至今总有人问我如何计算拷贝数的问题，特此，转载这篇博文，以 备不时之需做qRT-PCR的时候经常需要计算DNA拷贝数(Copy Number)，比较烦，用下面的方法这就方便多 了其实计算方法是相通的， 只不过一个是带有分步推理过程， 一个是直接计算而已！一、分步推理如何计算核酸拷贝数1A260 吸光度值=dsDNA 50ug/ml=ssDNA 33ug/ml=ssRNA 40ug/ml核酸浓度=(OD260)X稀释倍数*33或40或50)=ng/ulMW代表克/摩尔，单位dolton : 1dolton即表示1g/mol1 摩尔=6.02氷023摩尔分子(拷贝数)平均分子量(MW) : dsDNA=碱基数060道尔顿/碱基ssDNA=碱基数X330道尔顿/碱基ssRNA=碱基数X340道尔顿/碱基得到拷贝数计算公式：6.02 X023拷贝数/摩尔X浓度)/(MW g/mol)= copies/ml.即(6.02 X023) Xg/ml)/(DNA length 660)=copies/ml.或(6.02 X0 ) Xng/ul 1X- )/(DNA length 66X)=copies/ul.例： 3000 碱基质粒，浓度 100 ng/ulMW=3000bpx 660dalton/bp=1.98 106daltons,即 1mol=1.98 106g;(100 ng 10-9)g/1.98 106 =摩尔数copy 数=摩尔数 X6.02 1023 = 3 >1010copies/ul.如何计算拷贝数？计算方法： (6.02 1023拷贝数 /摩尔)务浓度 g/ml)/(MW g/mol)=copies/ml［平均分子量(MW g/mol): dsDNA=(碱基数)〉(660道尔顿/碱基)；ssDNA=(碱基数)〉(330道 尔顿/碱 基)；ssRNA=(碱基数)〉(340道尔顿/碱基)］图］标淮质粒的律立流程1-2拷贝数的计算待测徉本腿Cng/ul) ~ ODMn x 40贰稀釋倍数锌本分子量二碱基数心鬧 待测拝本拷贝数(copies/uD二待测拝本浓庭丿样本号子基* 6x1肋。