抗核抗体ANA检测与临床应用.ppt

自身免疫抗体检测及临床意义电力医院：马林抗核抗体（ANA）检测与临床应用ANA的靶抗原分布：细胞核整个细胞，包括细胞核、细胞浆、细胞骨架、细胞分裂周期蛋白等ENA：抗可提取核抗原，包括RNP/Sm, Sm, SS-A, SS-B, Scl-70和Jo-1等六种靶抗原抗核抗体的定义传统 定义：针对细 胞核成分的自身抗体的总称广义定义：针对细 胞内所有抗原成分的自身抗体的总称对ANA的理 解不再局限于核成分，而是指核酸和核蛋白抗体的总称 ANA可见于多种疾病，特别是结缔组织 疾病，常作为结缔组织 病的诊断、病情判断和疗效观察的指标 高滴度ANA则高度提示自身免疫性疾病 在非结缔组织 病中也可出现阳性；正常人中（特别是老年人）也可出现阳性，但滴度低目前，ANA检测 已成为临 床上的一个极重要的自身免疫病的筛查实验 ANA检测 的临床意义ANA检测 的临床意义系统性红斑狼疮活动期 非活动期 药物诱导的红斑狼疮混合性结缔组织 病（MCTD、Sharp综合征） 类风湿性关节炎 进行性系统性硬化症 多发性肌炎及皮肌炎 干燥综合征 慢性活动性肝炎 溃疡性结肠炎 其它风湿病 正常人95－10080－100100100 20－4020－5085－9530－5070－8030－40265-10美国风湿学会(ACR)立场声明• HEp-2 细胞包含大约100 至150 种自身抗原 • 其它初筛方法仅具有少量自身抗原…大约 35% SLE患者和IFT-ANA阳性患 者在其它初筛实验 中为阴性结果…建议：• IIFT-ANA仍然为ANA检测 的金标准• 医院或商业诊 断所应用其它ANA检测 方法时，必须要求为临 床大夫提供足够 的数据证明其它ANA检测 方法与IFT比较具有同样或更高的敏感度和特异性• 实验 室在ANA报告当中必须注明ANA检测 方法EUROIMMUNANA筛查 : 间接免疫荧光法(IFT) 抗原谱完整 (细胞核、细胞浆) 检测 ANA的金标准，具有很高的敏感性和特异性 基质组 合: HEp-2细胞+灵长类 肝HEp-2细胞: 筛查 不同的自身抗体均质型核膜型核点型核糖体P蛋白着丝点型AMA核仁型高尔基体Scl-70溶酶体Sm/RNP肌动蛋白SS-A/SS-B波形蛋白系统性红斑狼疮 (SLE)ANCA 相关性血管炎慢性炎症性结缔组织 病 (CICTD)干燥综合征 (SS)Systemischer Lupus Erythematodes (SLE) dsDNA系统性硬化症 (SSc) Scl -70 and CenpBSS-A and SS-B慢性炎症性结缔组织 病 (CICTD)多肌炎/皮肌炎 (PM/DM)Myositis Profile夏普综合征 (MCTD)RNPRheumatoide Arthritis (RA)EUROIMMUN系统性红斑狼疮 (SLE) 红斑狼疮的特点临床医生: 容易误诊 的一类致死性疾病免疫学家: 所有免疫系统的要件均参与致病机理产生过程 临床发病特点发病率: 40/100,000(北欧);200/100,000(黑人);250,000 (美国)患者寿命:4年/50%(1950); 15/80%(当前); 20岁诊 断/35岁死亡几率1:6以上受累;96%)EUROIMMUNSLE – 各器官的表现关节炎 (至少2个关节血液系统受累 (贫血等; 60%)狼疮肾 炎 (51%)浆膜炎 (胸膜炎, 心包炎; 77%)神经系统受累 (30%)皮肤 (蝴蝶状皮疹, 盘状狼疮; 74%)系统性红斑狼疮(SLE)代表性的抗体抗 dsDNA 抗体抗核小体抗体抗 Sm 抗体抗核糖体 P 蛋白抗体30-90%50-95%5-10%5-15%EUROIMMUNEUROIMMUN核均质型 HEp-2细胞/猴肝HEp-2细胞猴肝抗dsDNA 抗体- 检测 方法: IIFT, Farr-法 (RIA), ELISA or BlotIIFT dsDNAHEp-2细胞绿蝇 短膜虫 高度特异性抗体; 70%患者阳性，0.5%正常人或RA患者阳性 滴度与疾病活动性相关，但不适用于所有患者 抗体滴度上升但临床症状不明显的患者，抗体检测 后5年内 80%患者进入活动期抗dsDNA抗体与SLE最新版“Autoantibodies” 描述不同实验 方法的结果并无可比性： 1、抗原来源不同； 2、抗原展现形式不同； 3、实验 体系反应条件不同。

核均质: 抗核小体抗体(ANuA)靶抗原: dsDNA-组蛋白-复合物的构象决定簇方法: IIFA ELISA, Blot临床意义: SLE, 阳性率 50-95% (特异性100%)EUROIMMUN抗核小体 ELISA: 敏感性、特异性、疾病活动度 ANuA 与疾病的活动性相关性强 (SLE DAI score)分组SLE干燥综合症皮肌炎/多肌炎系统性硬化症类风湿/骨关节炎强直性脊柱炎健康对照组特异性n233414033602031225抗核小体阳性144 (61.8%)1 (2.4%)1 (2.5%)1 (3.0%)1 (1.7%)0098.2%Su et al., Clin Immunol 122: 115-120, 2007LNTP (%)LN (%)CON (%)ANuAAnti-dsDNA79431841933LNTP = lupus nephritis requiring renal transplantation（狼疮肾炎需要 肾移植） LN = biopsy proven lupus nephritis（肾活检确诊为狼疮肾炎） CON = SLE patients without nephritis（无肾炎SLE患者） 伴有狼疮肾 炎的严重SLE的生物标记 物ANuA 与狼疮性肾炎Stinton et al., Lupus 15: 394-400, 2007• 狼疮肾 炎是SLE的一种潜在的严重并发症 (高达 50%)• ~ 1.2% 需要进行肾移植的患者有狼疮肾 炎EUROIMMUN抗U1-nRNP与Sm抗体HEp-2细胞猴肝HEp-2细胞抗U1-nRNP与Sm抗体抗U1-nRNP/Sm抗体抗Sm抗体SLE抗U1-nRNP抗体SLE Sharp综合征 (MCTD)EUROIMMUN抗U1-nRNP与Sm抗体SLE: 15-40% MCTD: 95-100%SLE: 5-30%EUROIMMUN抗U1-RNP抗体抗Sm抗体Function: Pre-mRNA splicingEUROLINEANA 谱 最多18种抗原，增加了RNP亚单 位 自动化 操作 全自动化 结果判读EUROIMMUN实验结 果的解释（ANA谱）： 抗U1-nRNP/Sm和Sm抗体抗 nRNP/Sm 抗体抗 Sm 抗体结果解释-?+-++--+-+U1-nRNP: Sm: -U1-nRNP: Sm: +U1-nRNP: Sm: -结果不可靠阴性SLESLE 或 MCTD无EUROIMMUN抗核糖体P蛋白抗体HEp-2细胞猴肝40 S 亚单 位60 S 亚单 位P0P2 P2according to: Mahler et al., J Mol Med, 2003抗原:核糖体60S亚单 位的3个蛋白：P0, P1, P2.在羧基末端有相同的免疫反应表位。

核糖体P抗原的五聚体复合物P1 P1核糖体 P蛋白核糖体 P 蛋白 ELISA: 敏感性和特异性 (1)群组SLE其他结缔组织 病*健康献血员n36079206抗核糖体 P 蛋白阳性数34 (9.4%)0%0%*系统性硬化症, 干燥综合症, 皮肌炎/多肌炎 对 SLE 100% 特异EUROIMMUN核糖体 P 蛋白 ELISA: 敏感性和特异性(2)群组SLEMCTDSSSScRAHD特异性n18521556689100310抗核糖体P蛋白阳性数10 (5.4%)00000100%EUROIMMUNEUROIMMUNHEp-2细胞增殖型细胞核抗原 (PCNA)Hep-2细胞猴肝增殖型细胞核抗原 (PCNA)靶抗原: 表达为细 胞周期依赖性(S-期) 三聚体 (36 kDa)，是 DNA 多聚酶的辅因子并参与 DNA 修复调控检测 : IIFT, Blot临床意义: SLE高特异性 (阳性率 3-7%), 与肾脏 和CNS及血小板减少相关系统性红斑狼疮 (SLE)ANCA 相关性血管炎慢性炎症性结缔组织 病 (CICTD)干燥综合症 (SS)Systemischer Lupus Erythematodes (SLE) dsDNA系统性硬化症 (SSc) Scl -70 and CenpBSS-A and SS-B慢性炎症性结缔组织 病 (CICTD)多肌炎/皮肌炎 (PM/DM)Myositis Profile夏普综合症 (MCTD)RNPRheumatoide Arthritis (RA)EUROIMMUN干燥综合征（Sjögren’s Syndrome） 外分泌腺受累的自身免疫疾病 症状: - 口腔干燥- 唾液及眼泪减少- 腮腺肿胀口腔干燥- 胰腺外分泌腺分泌不足腮腺肿胀 EUROIMMUN干燥综合征SS-A (60 kDa)SS-B (47 kDa)40-95%40-95%代表性抗体EUROIMMUN抗SS-A/SS-B抗体HEp-2细胞猴肝SS-A 抗原Boire et al., 1995: - Ro-52抗体不与SS-A 抗原结合 - 纯化的 SS-A 抗原不包含 Ro-52RNA + SS-A (60 kDa) + Ro-52hY-RNARNA + SS-A (60 kDa)hY-RNASS-A (Ro-60), Ro-52 and SS-B干燥综合症:40-95% SLE:20-60% 新生儿狼疮:抗SS-B抗体 干燥综合症: SLE: 新生儿狼疮:40-95% 10-20% 78%抗Ro-52 (52 kDa)抗体 非特异EUROIMMUN功能: 调控RNA翻译抗SS-A (60 kDa)抗体功能:RNA聚合酶III辅助蛋白96% XEUROIMMUN抗Ro-52抗体: 不同组别 中均可出现抗Ro-52抗体: 风湿性疾病中的阳性率疾病干燥综合症系统性硬化症肌炎SLEMCTDRAn88812621021165抗Ro-52抗体阳性81 %28 %31 %38 %19 %5% 抗Ro-52抗体 在干燥综合症中阳性率较高，但没有疾病特异性Meyer, Schlumberger et al., 4th Asian Congress on Autoimmunity, Singapore, Sept. 2009EUROIMMUNAnti-Ro52: 肝脏疾病中的阳性率疾病PBCAIHHBVHCV献血员n10060505050抗Ro-52抗体 阳性27 %35 %10 %22 %0 抗Ro-52抗体没有疾病特异性Meyer, Schlumberger et al., 4th Asian Congress on Autoimmunity, Singapore, Sept. 2009系统性红斑狼疮 (SLE)ANCA 相关性血管炎慢性炎症性结缔组织 病 (CICTD)干燥综合症 (SS)Systemischer Lupus Erythematodes (SLE) dsDNA系统性硬化症 (SSc) Scl -70 and CenpBSS-A and SS-B慢性炎症性结缔组织 病 (CICTD)多肌炎/皮肌炎 (PM/DM)Myositis Profile夏普综合症 (MCTD)RNPRheumatoide Arthritis (RA)EUROIMMUN系统性硬化症 (SSc) 血管与结缔组织 受累的自身免疫疾病 症状: - 指端硬化 (thin, sclerotic fingers) -。