淫羊藿多糖含量的测定方法.docx

    淫羊藿多糖含量的测定方法    于红梅　肖传刚　褚秀玲等Reference： 采用苯酚-硫酸法对淫羊藿多糖含量进行测定结果表明，淫羊藿粗多糖的平均得率为5 81%，淫羊藿粗多糖中多糖的平均含量是42 36%，淫羊藿中多糖平均含量为2 46%Keys： 淫羊藿；多糖；测定方法R284 2 ： A：1002-1302（2015）08-0314-02淫羊藿是小檗科淫羊藿属多年生草本植物，是我国传统中药之一，具有很高的药用价值，《本草纲目》记载：“茎、叶入药，辛温无毒，有坚筋骨、益精气、补腰膝、强心力等作用 [1]淫羊藿的主要有效成分为淫羊藿苷和淫羊藿多糖有研究发现，多糖能控制细胞分裂和分化，调节细胞的生长与衰老，尤其在抗肿瘤、抗病毒、降血脂、增强免疫功能等方面的作用更明显 [2-3]淫羊藿多糖是一种具有发展前景的免疫调节剂，本研究即通过苯酚-硫酸法测定淫羊藿多糖的含量 [4]，为淫羊藿的应用提供有利的理论依据，并为多糖更深入的研究提供部分理论基础1 材料与方法1 1 仪器和试剂HH-8恒温水浴锅、RE52CS旋转蒸发仪、B-220恒温水浴锅、UV-1800分光光度计、粉碎机、离心机、计时器、电子分析天平等。

淫羊藿干品（购自山东省聊城利民大药店）、浓硫酸、95%乙醇、苯酚、葡萄糖，均为国产分析纯试剂1 2 方法1 2 1 淫羊藿多糖标准曲线的建立将1 9 g 烘干的分析纯葡萄糖溶于1 L重蒸水中，制成1 9 mg/mL标准溶液 [5]；然后取标准溶液1、2、3、4、5、6、7、8 mL分别用重蒸水稀释到100 mL，制成浓度为19、38、57、76、95、114、133、152 μg/mL的溶液；取各浓度溶液0 6 mL置于干燥的洁净试管中，加入 50 mg/mL 苯酚溶液1 2 mL，混合均匀，迅速加入5 0 mL浓硫酸，混合均匀，60 ℃水浴加热30 min，于波长490 nm处测定吸光度 [6]；重蒸水作为空白管对照以糖浓度为横坐标，吸光度为纵坐标制得标准曲线1 2 2 粗多糖的提取与纯化将购买来的淫羊藿干品粉碎过40目筛，制成淫羊藿干粉称取3份淫羊藿干粉5 00 g，置于250 mL容量瓶中，加入125 mL蒸馏水，浸泡30 min，在90 ℃下提取3次，每次提取2 h，离心，合并滤液，用旋转蒸发仪将提取液浓缩至30 mL左右，加入95%乙醇，使得含醇量达到70%，静置过夜，抽滤，室温恒温干燥，得到浅棕黄色的淫羊藿粗多糖固体，备用。

1 2 3 粗多糖的得率 将干燥得到的淫羊藿粗多糖称质量，减去滤纸的质量，计算可得淫羊藿粗多糖的得率1 2 4 样品溶液的制备 称取0 19 g淫羊藿粗多糖，溶解于100 mL容量瓶中定容，作为样品液1 2 5 精密度试验 精确吸取同一种样品溶液4 mL，加水至100 mL；再精确吸取上述样品液0 6 mL，按照标准曲线方法操作，测吸光度，重复测定5次 [7-8]1 2 6 稳定性试验 精确吸取同一种样品溶液4 mL，加水至100 mL；再精确吸取上述样品液0 6 mL，按照标准曲线方法操作，每隔30 min测1次吸光度 [7-8]1 2 7 重复性试验 精确吸取同一种样品溶液4 mL，加水至100 mL；再精确吸取上述样品液0 6 mL，按照标准曲线方法操作，测吸光度，重复测定5次 [7-8]1 2 8 加样回收试验 [7-8] 精确吸取同一种样品溶液 4 mL，加水至100 mL，精确吸取上述样品液2 mL，分别加入浓度不同的葡萄糖标准溶液2 mL；再精确吸取上述样品液 0 6 mL，按照标准曲线方法操作，测吸光度1 2 9 样品的含量测定 精确吸取样品溶液4 mL，加水至100 mL；再精确吸取上述样品液0 6 mL，按照标准曲线方法操作，测吸光度。

采用苯酚-硫酸法对淫羊藿多糖含量进行测定2 结果与分析2 1 淫羊藿多糖测定方法的建立通过对不同浓度葡萄糖标准溶液吸光度D的测定，结果显示不同浓度葡萄糖标准溶液与相应的吸光度D线性关系良好（图1）线性方程为y=0 005 7x+0 006 5，r2=0 999，表明葡萄糖浓度在19～152 μg/mL范围内与吸光度呈良好的线性关系2 2 粗多糖的得率将干燥得到的淫羊藿粗多糖称质量，减去滤纸的质量，计算可得淫羊藿粗多糖的得率（表1），淫羊藿粗多糖得率的平均值为5 81%2 4 稳定性试验稳定性试验结果如表3，样品1、样品2、样品3在150 min内的稳定性RSD分别为0 49%、0 38%、0 44%，即试验在150 min之内稳定性良好3 结论采用苯酚-硫酸法对淫羊藿多糖含量进行测定，测得淫羊藿粗多糖的平均得率为5 81%，淫羊藿粗多糖中多糖的平均含量是42 36%，淫羊藿中多糖平均含量为2 46%淫羊藿中的主要成分是淫羊藿苷和淫羊藿多糖，因此，对于淫羊藿多糖含量进行测定是评价其质量的标准之一，为淫羊藿的应用提供更有利的理论依据，同时也为多糖的研究提供部分理论基础本试验采用水提醇沉法提取淫羊藿多糖，该方法简单、易操作，并对提取的多糖进行醇沉纯化，使得结果更准确。

通过精密度试验和加样回收试验结果可知，苯酚-硫酸法方法可靠、重复性高、显色性稳定性较好等，适合作为淫羊藿多糖含量的测定方法Reference：[1] 陈 旋，张 翼，张剑波 植物多糖的研究进展[J] 中国新药杂志，2007，16（13）：1000-1005[2]郭宝林，罗崇念，肖培根 淫羊藿多糖研究进展[J] 中国中药杂志，1998，23（7）：52-53[3]苟春林，张 艳，李 健 宁夏构杞多糖的提取分离与组成[J] 江苏农业科学，2013，41（6）：246-247[4]徐晓飞，陈 健 多糖含量测定的研究进展[J] 食品科学，2009，30（21）：443-448[5]刘宝岩 淫羊藿多糖提取方法的优化[J] 广西轻工业，2009，25（12）：7-8，23[6]柳凤祥，张万福 淫羊藿多糖的超声波提取与含量测定研究[J] 山东农业大学学报：自然科学版，2008，39（4）：533-535[7]胡 涛，黎云祥 四川淫羊藿多糖的含量测定[J] 西华师范大学学报：自然科学版，2006，27（4）：400-402[8]王 超，张曜武 改良-差示酚硫法的建立及对淫羊藿多糖的含量测定[J] 西北药学杂志，2011，26（4）：257-259endprint  -全文完-。