新型免疫佐剂CpG-DNA的性能和初步应用分析.docx

    新型免疫佐剂CpG-DNA的性能和初步应用分析    【摘要】目的：探讨新型免疫佐剂CpG-DNA的性能和初步应用方法：取BALB/c小鼠（SPF）30只为研究对象按照随机数字表法，分为两组，分别给予HBsAg为HBsAg组与HBsAg+CpG-DNA为HBsAg+CpG-DNA组，每组15只CpG-DNA与抗原取混合后，对小鼠进行皮下、背部注射于加强免疫一周进行细胞毒T细胞功能检测结果：在强化免疫后，HBsAg组显著升高（P＜0.05）结论：CPG-DNA对HBsAg具有较强的免疫原性，可诱导机体产生较强的免疫作用，其为一种潜能较大的免疫佐剂关键词】新型免疫佐剂；CpG-DNA；HBsAgR392A2095-1752（2019）20-0024-02PerformanceandpreliminaryapplicationanalysisofnovelimmunoadjuvantCpGDNASunYinghuiGeneralHospitalofNorthernWarZone,Shenyang,Liaoning110016,China【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheperformanceandpreliminaryapplicationofanovelimmunologicaladjuvantCpGDNA.MethodsSixtyBALB/cmice(SPF)wereusedassubjects.Accordingtotherandomnumbertablemethod,theywerepidedintotwogroups,namelyHBsAg+CpG-DNAgroupinHBsAggroup.AftertheCpG-DNAwasmixedwiththeantigen,themicewereinjectedsubcutaneouslyanddorsum.CytotoxicTcellfunctiontestswereperformedoneweekafterboosterimmunization.ResultsAfterboosterimmunizationatweek4andweek12,thenumberofCD8+CTLsecretedbyHBsAg+CpG-DNAgroupwassignificantlyhigherthanthatofHBsAg(P＜0.05).ConclusionCPG-DNAhasstrongimmunogenicitytoHBsAgandcaninducestrongimmunityinthebody.Itisapotentialimmunoadjuvant.【Keywords】Novelimmunoadjuvant;CpGDNA;HBsAg相关研究表明，DNA是一种较强的免疫反应刺激物，不仅激活免疫细胞使其进行增殖分化，亦可以对免疫应答进行调节[1]。

随着研究的进一步深入，现已证实CpG-DNA既能诱导机体产生细胞免疫，又能诱导机体产生体液免疫，其免疫应答主要以Th1为主，亦有学者称其为新型免疫佐剂[2]近年来，CpG-DNA引起了广泛关注，已有研究证明其具有甲基化CpG基序本研究旨在探究新型免疫佐剂CpG-DNA对HBsAg的免疫作用1.资料与方法1.1一般资料取BALB/c小鼠（SPF）30只为研究对象，其周龄为8～10，皆为雌性按照随机数字表法，分为两组，分别为HBsAg组、HBsAg+CpG-DNA组，每组各15只1.2方法HBsAg+CpG-DNA组：CpG-DNA剂量取80μg，抗原取1μg，充分混合后，对小鼠进行皮下、背部注射，每只注射量皆为80μgHBsAg组：只给予HBsAg，方法同HBsAg+CpG-DNA组自第一次注射后，第4周及第12周时再次加强免疫加强免疫后一周内处死小鼠，取其脾脏，采用ELISPOT试剂盒测定细胞毒T淋巴细胞的功能1.3观察指标对比各组细胞的细胞毒T淋巴细胞功能1.4统计学方法数据应用SPSS18.0进行分析，其中计数资料（%）进行χ2检验，计量资料（x-±s）进行t检验，P＜0.05提示有显著差异。

2.结果在第4周与第12周进行强化免疫后，HBsAg+CpG-DNA组分泌的CD8+CTL的数量较HBsAg组显著升高（P＜0.05），见表3.讨论以往研究认为，DNA的免疫原性较弱，难以引起机体较强的免疫反映[3]人们对DNA免疫调节的重视追溯到20世纪80年代，科学家首次检测出从牛分枝杆菌中提取出具有抗肿瘤活性的DNA而随着研究的进一步深入，有学者对编码牛分枝杆菌蛋白的cDNA中进行了不同序列ODN的合成，经检测，部分ODN具有较强的免疫原性，可诱发机体强烈的免疫反映[4]而这类ODN来说都具有一个或多个回文序列的特性除此之外，另有科学家对ODN结构进一步测定，结果显示具有免疫刺激作用的CpGODN通常为非甲基化，一旦经甲基化修饰，或者GC或其它序列代替了CpGODN则其免疫活性消失基于此，有学者认为DNA具有免疫活性的前提为具有甲基化CG双核苷为核心的特定核苷酸序列而免疫系统对外源性DNA进行免疫应答就是通过对这些特定序列进行特异性识别而实现的无与此同时，亦有相关研究报道，CpG序列是否含有低甲基化或者非甲基化是决定CpG-DNA是否有免疫活性的主要问题若CpG未发生甲基化或者呈低甲基化，则其免疫活性较佳；反之，若CpG缺失或呈高甲基化，则其活性明显降低。

经进一步测定，现认为CpG-DNA的活性结构为CpG两侧的2个5’嘌呤和2个3’嘧啶，且当5’端为GpA、3’端为TpC或TpT时活性最强[5]本研究取BALB/c小鼠（SPF）30只为研究对象，于免疫强化后一周进行细胞毒T细胞功能检测结果显示，对小鼠第4周与第12周进行强化免疫后，HBsAg+CpG-DNA组分泌的CD8+CTL的数量显著升高（P＜0.05），这与相关研究结果不谋而合，表明了CPG-DNA对HBsAg具有较好的免疫佐剂作用，不仅能够与铝剂相互协同促进IgG的产生与分泌，亦能够促进Th2类免疫反应逆转为Th1类免疫反应，这一转变是通过IFN-γ的分泌完成的综上所述，CPG-DNA对HBsAg具有较强的免疫原性，可诱导机体产生较强的免疫作用，其为一种潜能较大的免疫佐剂Reference】[1]朱喆，蔡泓志，李映波.中草药提取物作为疫苗佐剂的研究进展[J].医学研究杂志，2018，v.47；No.485(05):13-16.[2]金晓，李晓红，贾森泉，等.甘油-3-磷酸对甲肝疫苗诱导的体液免疫影响[J].实验动物科学，2018，v.35(02):25-30.[3]许霞，杜欢，吴亚兰，等.程氏蠲痹汤加减方降低佐剂性关节炎大鼠外周血T细胞cAMP水平和CD4+/CD8+T细胞比值[J].细胞与分子免疫学杂志，2018，34(2).[4]朱蕾，段梦园，张晓娟，等.羧胺三唑抑制佐剂性关节炎大鼠腹腔巨噬细胞产生细胞因子[J].基础医学与临床，2018，v.38(06):60-64.  -全文完-。