MS培养基配制方法-new(共2页).doc

精选优质文档-----倾情为你奉上MS 培养基一、大量元素母液1：大量A500 ml母液称取：50NH4NO3KNO3MgSO4•7H2OKH2PO441.25 g47.5 g9.25 g4.25 g母液2：大量B500 ml 母液称取：100CaCl2•2H2O或CaCl222 g16.6 g母液3：Fe盐1000 ml母液称取：100FeSO4•7H2ONa2-EDTA或EDTA-Fe(10mM-100μM)2.78 g3.73 g4.211 g注：配制顺序如下1. 称取3.73 g Na2-EDTA•2H2O溶解于200 ml去离子水中，并置于70℃ 预热 (A)；2. 称取2.78 g FeSO4•7H2O溶解于200 ml去离子水中 (B)；3. 将B缓慢倒入A中混合，边倒边搅动，置于70 ℃ 水浴锅中螯合2 h；4. 冷却后定容至1 L二、微量元素母液4：微量1000 ml母液称取：1000MnSO4•4H2OZnSO4•7 H2OH3BO3KI22.3 g8.60 g6.20 g0.83 gNa2MoO4•2 H2OCuSO4•5 H2OCoCl2•6 H2O0.25 g0.025 g0.025 g三、有机物质母液5：有机（不含肌醇）1000 ml母液称取：100盐酸硫胺素 VB1盐酸吡哆醇 VB6烟酸 VB3 VPP甘氨酸（氨基乙酸）0.01g0.05 g0.05 g0.2 g1 L工作液的配制:母液1：大量A母液2：大量B母液3：Fe盐母液4：微量母液5：有机肌醇蔗糖20 ml10 ml10 ml1 ml10 ml0.1 g30 g定容至1 L，用1 M NaOH调pH至5.8，于121 ℃，高压灭菌20 min。

注：配固体培养基可在调pH后加适量Agar或Phytagel；肌醇也可加入有机母液四、抗生素和激素母液试剂名称配制方法母液浓度Amp（氨苄青霉素）双蒸水溶解，定容，过滤灭菌50 mg/ mlKm（卡那霉素）双蒸水溶解，定容，过滤灭菌50 mg/ mlStr（链霉素）双蒸水溶解，定容，过滤灭菌50 mg/ mlCb（羧苄青霉素）双蒸水溶解，定容，过滤灭菌250 mg/ ml6-BA (6-苄基嘌呤)1M NaOH或盐酸溶解，双蒸水定容，高压灭菌1 mg/ mlNAA（萘乙酸）1M NaOH溶解，双蒸水定容，高压灭菌1 mg/ mlIAA95% 乙醇溶解，双蒸水定容，过滤灭菌1 mg/ ml五、乙酰丁香酮 (Acetone-syringone, AS)称取196.2 mg AS用10 ml DMSO溶解，母液浓度100 mM，-20℃避光保存，工作浓度100 ~ 200 μM六、MS溶液的混合配制MS培养基时，每1L培养基取： 母液1：大量A母液2：大量B母液3：Fe盐母液4：微量母液5：有机肌醇蔗糖6-BANAAMS0 无菌苗(1/2 MSAmp)10 ml5 ml5 ml0.5 ml5 ml0.0515g——MS1 共培养(AS6-BA, NAA)20 ml10 ml10 ml1 ml10 ml0.1g30g500 μL100μLMS2 分化(Km Cb6-BA, NAA)20 ml10 ml10 ml1 ml10 ml0.1g30g500 μL100μLMS3 生根(Km CbIAA)10 ml5 ml5 ml0.5 ml5 ml0.05g15g——5种母液分别依次加入到800 ml蒸馏水中，混匀后加入肌醇、蔗糖和能高压灭菌的激素（6-BA和NAA），定溶至1000 ml，用1M NaOH调pH至5.8。

最后加Phytagel （Sigma）4.4g或Agar 10g灭菌完后，在培养基凝固前加入AS或 抗生素及不能高压灭菌的激素（IAA）专心---专注---专业。