对鞣花酸的抗氧化作用探索.docx

对鞣花酸的抗氧化作用探索甜茶是蔷薇科悬钩子属植物的一个品种，主产于广西的柳州、桂林、 梧州等地区甜茶具有祛痰止咳、清热、润肺等功效，广泛用于保健品、 食品和化妆品等领域中有关研究表明，鞣花酸具有多种生物活性功能，例 如抗氧化功能、抗癌、抗突变性能、抑制人体免疫缺陷病毒（HIV）的增 生等；鞣花酸还是一种有效的凝血剂旧，对多种细菌及病毒都有很好的抑 制作用，能防止感染抑制溃疡除此之外，鞣花酸还具有降压、镇静，预 防骨质疏松等多种生理作用••鞣花酸作为一种新型的药物原料和食品添 加剂日益受到人们的重视李小萍、贝玉祥、周本宏、王予祺等分别对红 树莓果、诃子、石榴皮和蛇莓中的鞣花酸含量进行了测定，其中诃子中鞣 花酸含量最高，达到了 573mg/kg李小萍等发现红树莓果中的鞣花酸提 取物具有较强的还原能力因此，开展甜茶中鞣花酸的研究，对甜茶植株 的化学成分分布、开发甜茶系列产品、甜茶的推广应用具有重大意义近 年来，甜茶的研究重点均局限于对甜茶素、黄酮苷及其苷元的提取和测定 以及甜茶粗体物药理的研究，而关于甜茶中鞣花酸的研究鲜见报道因此, 试验采用DPPH •法、BHT法和磷钼酸盐法对甜茶中鞣花酸的抗氧化活性进 行了研究，以期为以甜茶为原料的保健品、天然抗氧化剂的开发利用提供 理论依据。

1材料与方法1.1材料1.1.1研究对象甜茶，经鉴定为RubusSuavissmusS.Lee1.1.2主要仪器722型光栅分光光度计，购自上海分析仪器三厂;GDC.TQ / ZS / 3中试型智能控制连续化多功能超声波提取组件，购自济宁 金百特电子有限责任公司；红外光谱仪（5-DX）,购自美国Nicolet公司1.1.3主要试剂甲醇（cP）、蒸馏水、无水Na： SO石油醚（AR）、 氯仿（CP）、乙酸乙酯（CP）、二苯代苦味酰自由基（DPPH）,购于SIGMA公 司；2, 6—二叔丁基对钾酚（BHT）、pH=6.6的磷酸缓冲溶液、l%的铁氰 化钾水溶液、七钼酸铵、硫酸、磷酸钠，市售；LsA一10大孔吸附树脂， 购自西安蓝深交换吸附材料有限责任公司、1.2方法1.2.1鞣花酸的制备、取甜茶根2kg，碾碎后置入40L超声波提取罐， 加20L水，加热至80°C，超声提取1h，膜过滤，重复1次，合并滤液，浓缩, 滤液依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯萃取，萃取液用无水NazSO、脱水， 再用旋转蒸发仪回收部分溶剂，放置，乙酸乙酯萃取液得到黄色颗粒结晶, 将得到的结晶用碱溶解后，加入酸溶液进行沉淀，经水洗、醇洗后，放入 红外干燥仪中干燥，得黄色颗粒结晶化合物A （约2.00g）。

1.2.2仪器工 作条件、FHR光谱分辨率0.4cm〜，光谱范围为4000〜400em〜，峰峰噪声 值 <1.24X10 〜AU、1.2.3检测方法、采用KBr压片法、将固体化合物A研成细粉末，分散 在固体介质KBr中，并用压片器压成透明的薄片后测定、在波数为4000〜 400em ‘1范围分别对鞣花酸对照品（标准样品）和样品A进行扫描、1.2.4鞣花酸抗氧化试验、1.2.4.1清除自由基能力的测定、分别取0.2、0.4、0.5、1.0ml质量 浓度为1.0mg / rnl的各样品甲醇溶液，加入到 8rnl浓度为0.004 %的 DPPH •甲醇溶液中水浴28°C恒温，在515nm下迅速测其吸光度，每lOmin 测定1次直到反应达到平衡同时测定DPPH •甲醇溶液的吸光度，作为空 白参照由数据计算清除率S (%) = (1一A样品/A奉白)X1001.2.4.2还原能力的测定在10rnl具塞刻度比色管中依次加入 2.5ndpH为6.6的磷酸缓冲溶液，分别取0.1、0.3、O.51111质量浓度为1.0mg /ml的各样品甲醇溶液，与2.5II11浓度为1%的铁氰化钾水溶液混合混 合物于50C恒温水浴20nfin，再分别用0.1、0.3、0.5rI11质量浓度为1.0mg /ml的Bin"甲醇溶液作对比，在700nm下分别测定吸光度。

1.2.4.3总抗氧化性的测定在2支10II11具塞刻度比色管中分别加入 1ml质量浓度为0.5mg / ml的鞣花酸甲醇溶液和1.0rI11质量浓度0.5mg / ridBHT，然后分别依次加入1.0IIll浓度为0.6mol / L的H： S0水溶液、 1.0ml浓度为0.028mol / L的Na，P0水溶液和1.0ml浓度为0.004mol / L的 (NH水溶液，最后用蒸馏水定容至5.0ml，混合均匀，于95C 恒温水浴90rain后，取出冷却至室温，以不加鞣花酸体系为空白参比，在 695nm波长处测定吸光度A2结果与分析2.1鞣花酸红外光谱分析由图1可知，鞣花酸标样的主要吸收峰有［IR (KBr)/em： 3555， 1698， 1621， 1582， 1511， 1448， 1390， 1335， 1259, 1195，1115，1059, 922, 882, 758其中3555em ‘ 1 为O—H伸缩振动频率， 1698em为C=O的伸缩振动频率，1621、1582，1511、1448是苯的C=C伸缩 振动峰样品A的主要吸收峰［IR (KBr) /em3559, 1695，1618，1582, 1511，1451, 1395, 1346, 1257, 1195, 1111, 1056, 922, 882, 757。

样品A与 鞣花酸对照品的红外谱图谱峰的重合性较好，各峰波数基本一致，并与文 献相符••3|因此，可以判定制备得到的黄色颗粒结晶物A为鞣花酸2.2鞣花酸抗氧化试验2.2.1清除自由基能力的测定在清除反应中，鞣花酸还原稳定的 DPPH •自由基，是由于鞣花酸提供氢，把无水甲醇中的DPPH •还原成非自 由基的形式，使溶液由紫色变成黄色，因此通过测定吸光度减弱的程度， 可评价该自由基清除剂的清除活性1111由表1可知，鞣花酸清除DPPH •效果明显，速度快，用量少，清除mlP (DPPH • =0.004%的DPPH.'仅需0.04〜0.05mg说明鞣花酸是清除自由 基的有效成分之一2.2.2还原能力的测定还原性通常表现为贡献出氢原子以打破自由 基链而产生抗氧化作用，通过将Fe3+转化成Fe2+后，吸光度的改变来测量 还原能力m1由表2可知，鞣花酸的还原能力随着浓度的增大而变强，与 BI-rr相比，浓度低时稍逊于Bill",达到0.5叫ITll时，鞣花酸有反超的 趋势2.2.3总抗氧化性的测定在酸性条件下，具有抗氧化性的物质能把 Mo”还原成Mo“，然后磷酸与Mo “形成绿色的磷钼酸配合物，在695nm处 测其吸光度，物质的抗氧化性越强，则体系的吸收越强，吸光度也越高III 1。

由表3可知，不同浓度的鞣花酸总抗氧化活性随着浓度及加入时间的增 大而增大，总体来看，总抗氧化活性大小变化趋势3结论与讨论(1) 鞣花酸清除自由基的能力很强，还原能力和总抗氧化性浓度低 时稍逊于BHT，当浓度达到1.2 mg/m l时，有反超BHT的趋势2) 从甜茶中分离得到的纯鞣花酸有很强的清除自由基作用，说明 鞣花酸是甜茶中有效的抗氧化成分3) 鞣花酸是一种比较好的纯天然抗氧化剂，可以安全使用，具有 开发利用意义。