植物营养诊断分析实验.doc

植物营养诊断分析实验1.1植物汁液和浸提液的制备制取植株汁液的方法有三种：一是用压汁法将组织汁液挤压出来，然后稀释到一定浓度进行测定，这叫压液稀释法二是用浸提剂浸提，制成速测用的浸提液，这可用热水浸提或冷水浸提三是直接将汁液挤压在比色盘或试纸上进行速测1.压液稀释法压出植株汁液需用特别压汁器，现介绍三种供参考(1)特制的压汁钳，这种压汁钳适用于玉米、棉花、麦子和汁液较多的作物不大适用于水稻使用费力，不易压出汁液但可将植物样品直接放在钳盘上压汁(2)金工用手虎钳压汁，同时要有一个软质塑料管(长10厘米，宽25厘米)将待测的组织洗清后，用滤纸内外擦干，放入塑料管中对折后再压汁这种压液器力量较大，同时可防止混入铁锈影响测定(3)无压汁钳时可用木凳压汁法代替取长棒一个，长凳一条，用绳索将棒捆绑在凳上，另取待测植株放于塑料套管内，折叠后，放在木棒之下压汁此方法取材既方便又省力，适宜于推广使用混合植株样品用压汁器进行压汁，将压出汁液稀释20倍，即1滴汁液加19滴水，即成供测NO3—N、P、K之用的待测液2.水浸提法将切碎的作物组织混匀后，称取05克放入小三角瓶或大试管中，加蒸馏水20毫升，塞紧，用力摇1分钟(上下摇动约200次)静止片刻，即可吸取上层清液供测定NO3—N、P、K之用，如果溶液混浊，应先过滤再测定，浸提液不宜放置过久， 在2～3小时内测定完。

淀粉、氨基态氮的测定不用上述待测液而应另外制取1.2试剂配制(1)氮、磷、钾混合标准液用分析天平准确称取烘干的分析纯试剂，磷酸二氢钾(KH2PO4)0.4393克，硝酸钾(KNO3)0.7217克，氯化铵(NH4Cl)0.3820克，硫酸钾(K2SO4)1.3247克，放入100毫升烧杯中，用少量蒸馏水溶解，无损地移入1000毫升容量瓶中，并用蒸馏水多次洗烧杯，洗液均并于容量瓶中，最后加水至刻度，摇匀此溶液中硝态氮(NO3—N)、铵态氮(NH4—N)、磷(P)的浓度各为100mg/L，钾的浓度为1000mg/L，溶液中加甲苯5滴，可保存3—4个月二级混合标准液用刻度移液管分别吸取上述贮备液2毫升及16毫升，各在100毫升容量瓶中用蒸馏水稀释至刻度，充分摇匀，由2毫升贮备液稀释而成的标准液，含硝态氮、铵态氮、磷的浓度各为2mg/L，含钾浓度为20mg/L由16毫升贮备液稀释而成的标准液，含硝态氮、铵态氮、磷的浓度各为16mg/L，含钾浓度为160mg/L，均不易长期保存，1～2周后即失效(2)硝酸试粉称取分析纯硫酸钡(105℃烘干4小时，研细、过60目筛)100克，分为四份，分别与10克硫酸锰(MnSO4·2H2O)，2克锌粉(研细，过80—100目筛)，4克对氨基苯磺酸和2克四苯胺在研钵中研细混匀，最后加入75克柠檬酸(颗粒大时，需先研细)在研钵中一起研磨、混匀，于棕色瓶中密闭保存，每次用后随即盖严防潮。

(3)50%醋酸取化学纯冰醋酸，按1：1稀释而成4)2.1%钼酸铵盐酸溶液称取化学纯钼酸铵10.5克，溶于约100毫升蒸馏水中，加热低于60℃促其溶解，若有混浊，过滤之，另取浓盐酸204毫升加入约100毫升蒸馏水中，搅匀，待两液冷却至室温后，将钼酸铵溶液慢慢注入盐酸中，边加边摇匀，贮入棕色试剂瓶中，此溶液盐酸浓度为4.9mol/L，每隔二～三个月应检查其是否失效(5)2%氯化亚锡甘油贮备液称取氯化亚锡结晶(SnCl2·2H2O)2克，加浓盐酸10毫升，充分摇动使其溶解，加化学纯甘油90毫升，混匀，贮入棕色瓶中，可保存半年以上使用前取2%氯化亚锡甘油液1滴，加蒸馏水19滴，摇匀即成0.1%氯化亚锡溶液，此溶液只供当天使用，气温高时，仅半日内有效(6)3%EDTA碱性溶液称取EDTA二钠3克，氢氧化钠1克，溶于100毫升蒸馏水中7)37%甲醛若有沉淀，滤其清液使用，如呈酸性，用稀碱液调节至中性(8)2%四苯硼钠溶液称取0.5克四苯硼钠(采用测血钾专用试剂)溶于25毫升蒸馏水中，加0.2mol/L氢氧化钠(2克氢氧化钠溶于250毫升蒸馏水中)约2滴调节溶液pH值至8—9放置过夜，然后过滤。

1.3植物组织中硝态氮的测定(硝酸试粉比色法)测定原理：测定硝态氮是利用硝酸试粉和溶液中的硝酸盐起作用，产生粉红色化合物硝酸试粉是几种试剂配制成的混合粉剂，它们的主要作用是在弱酸性条件下，溶液中硝酸盐受试粉中锌和酸产生的氢作用，先被还原成亚硝酸盐，再与对氨基苯磺酸和甲苯胺作用形成粉红色的偶氮化合物，其反应如下：NO3-+Zn+2H+→NO2-+Zn2++H2O试粉中硫酸锰对还原和呈色反应起催化作用，也可消除溶液中氯离子的干扰硫酸钡在试粉中起填充作用在一定浓度范围内，形成粉红色的深浅与溶液中硝酸盐含量的多少成正相关，将它与标准色阶比较，即可求出硝态氮的含量测定步骤制备标准色阶和供试液中硝态氮含量的测定，可同时在白瓷比色盘中，按下表顺序进行表格里的双线上部，为制备比色用标准溶液，双线的右上部为待测试液只有在标准溶液和待测试液都按要求依次准备好之后，才能同时按双线以下各操作步骤顺序进行操作硝   态   氮   测   定   步   骤操     作     步     骤用量单位标准色阶浓度（mg/L）供试液用量（滴）0.51248121．  制备显色液标准系列取混合标准液浓       度2mg/L滴124000416mg/L滴000123加   蒸   馏   水滴3203212．加50％醋酸滴11111113．加硝酸试粉耳勺11111114．搅匀 由低至高浓度逐穴搅匀5．比色读数 3～15分钟内与标准色阶比较记下读数6．结算结果 硝态氮(mg/L)＝读数值*稀释倍数注意事项①加入醋酸的作用是使显色稳定，据试验在硝态氮含量高的溶液，醋酸浓度达7%以上呈色才稳定。

②硝酸试粉用量各穴尽量一致，每一耳勺相当15毫克③比色读数时，若试液颜色强度介于标准色阶的两个等级之间，可估计其中间数值为读数值；若试液显色超过最高一级标准色阶，应另取试液稀释后重新测定但在计算结果时，根据读数值，除了乘原来制备供试液时的稀释倍数外，必须再乘以第二次的稀释倍数1.4植物组织中磷的测定(磷钼蓝比色法)测定原理在一定的酸度和钼酸铵浓度下，溶液中的磷与钼酸铵作用生成黄色的磷钼酸，其反应如下：(NH4)2MoO4+2HCl→H2MoO4+2NH4ClH3PO4+12H2MoO4→H3［P(Mo3O10)4］+12H2O生成的磷钼酸，在一定量的氯化亚锡作用下，使部分钼(六价钼)被还原，形成蓝色的复杂化合物—磷钼蓝在一定含磷浓度范围内，溶液蓝色的深浅与磷含量成正比根据蓝色的深浅与标准色阶相比较，即可求出磷的含量测定步骤制备标准色阶和供试液中磷含量的测定，可同时在比色盘中，按下表顺序进行 磷测定步骤操  作  步  骤用量单位标准色阶浓度(mg/L)供试液用量（滴）0.5124812制备显色用准系列取混合标准液浓度2mg/L滴124000416mg/L滴000123 滴3203211．加2.1%钼酸铵盐酸液滴11111112．搅匀由低至高浓度逐穴搅匀3．加0.1%氯化亚锡溶液滴11111114．搅匀由低至高浓度逐穴搅匀5．比色读数5～15分钟内与标准色阶比较记下读数6．计算结果无机磷(mg/L)=读数*稀释倍数注意事项0.1%氯化亚锡在临用前由2%氯化亚锡甘油贮备液稀释制备当天有效，每次少配。

1.5植物组织中钾的测定(四苯硼钠比浊法)溶液中的钾离子与四苯硼钠Na［B(C6H5)4］作用，生成难溶的四苯硼钾白色沉淀，使溶液呈现浑浊、其反应如下：K++Na[B(C6H5)4]→K[B(C6H5)4]↓+Na+在一定含钾浓度范围内，其混浊度与钾含量成正比，根据混浊程度与标准钾的浊度相比较，即可求出钾的含量测定步骤制备标准比浊系列与供试液中钾的测定，可同时在小试管(19×70毫米)中，按下表顺序进行有效钾测定步骤操   作   步   骤用量单位标准浊度系列浓度(mg/L)供试液用量（滴）510204060801．  制备比浊用标准系列取混合标准液  浓  度20mg/L滴2480004160mg/L滴000234加  蒸  馏  水滴6406542．加3％EDTA碱性溶液滴11111113．加37％甲醛滴11111114．搅匀逐管搅匀5．加2％四苯硼钠溶液滴22222226．搅匀逐管搅匀7．比浊读数5～15分钟内与标准浊度系列比浊8．计算结果有效钾(mg/L)=读数值*稀释倍数注意事项①试液中产生干扰作用的离子，主要有铵离子及其它一些三价、二价金属离子(如钙、镁、铁、铝等)须加入EDTA二钠盐及甲醛来掩蔽，以消除干扰。

EDTA二钠盐即乙二胺四乙酸二钠盐能与二价、三价金属离子结合为无色络合物，甲醛与铵离子作用，能形成无色的六次甲基四胺，其反应如下：4NH4++6HCHO→(CH2)6N4+6H2O+4H+铵离子含量多时，在碱性条件下，甲醛才能有更好的掩蔽效果②比浊读数可参考硝态氮测定中的注意事项③。