乳粉中酪蛋白磷酸肽的测定高效液相色谱法标准文本.doc

GB/T ××××—2005吉林省卫生厅发布DBS22吉林省食品安全地方标准2012-XX-XX实施2012-XX-XX发布乳粉中酪蛋白磷酸肽的测定高效液相色谱法Determination of Casein Phosphopeptides in Milk High performance liquid chromatography method (送审稿)DBS22/037-2012ICS：标准分类号：备案号：1就1DBS22/037-2012前 言本标准按照 GB/T 1.1-2009《标准化工作导则 第一部分：标准的结构和编写》和GB/T 20001.4-2001标准编写规则 第4部分:化学分析方法给出的规则起草本标准的附录A为资料性附录本标准起草单位：吉林农业大学本标准主要起草人：李泽鸿、于新海，刘继阳，刘莹，张文慧，刘树英，史飞，张继元，汪树理，刘洪章，陶英楠，赵福广，李昌昊，雷军` II乳粉中酪蛋白磷酸肽的测定 高效液相色谱法1 范围本标准规定了乳粉中酪蛋白磷酸肽测定的高效液相色谱方法本标准适用于乳粉中酪蛋白磷酸肽的含量测定本标准方法检出限为10 mg/kg2 规范性引用文件本标准内容引用了下列文件中的条款。

凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本标准凡是不注明日期的引用文件，其有效版本适用于本标准GB/T 6682　分析实验室用水规格和试验方法3 原理乳粉用常温去离子水溶解，以乙腈和0.1 ％醋酸溶液为流动相，在0~30 min内，乙腈由0 ％~100 ％梯度洗脱，经ZORBAX SB C18柱色谱柱分离，高效液相色谱紫外检测器280 nm检测，保留时间定性，外标法测定试样中乳粉中酪蛋白磷酸肽的含量4 试剂和材料除非另有规定，仅使用分析纯试剂、蒸馏水或去离子水，满足GB/T 6682要求4.1 乙腈：色谱纯4.2 冰醋酸4.3 滤膜：0.45 mm4.4 酪蛋白磷酸肽标品：分析纯，含量≥95.00 %4.5 酪蛋白磷酸肽标准溶液：精密称取酪蛋白磷酸肽标准品100.00 mg，用去离子水溶解并定容于25 mL容量瓶中，用0.45 mm滤膜过滤后，备用5 仪器5.1 天平（精度0.01 g和0.0001 g）5.2 高效液相色谱仪（带紫外检测器，二元泵）6 分析方法6.1 样品处理称取乳粉试样3 g~5 g（精确至0.01 g）于50 mL容量瓶中，常温去离子水溶解，定容至刻度，摇匀。

0.45 mm过滤，供高效液相色谱分析6.2 标准样品溶液的配制准确吸取酪蛋白磷酸肽标准溶液0.25 mL、0.50 mL、1.00 mL、2.50 mL、5.00 mL于100 mL容量瓶中，加水稀释至刻度制成浓度依次为l0 mg/mL、20 mg/mL、40 mg/mL、100 mg/mL、200 mg/mL的标准样品溶液，供高效液相色谱分析使用6.3 色谱参考条件色谱柱：ZORBAX SB C18柱（ 4.6 mm×250 mm× 5 mm）或等效柱紫外检测波长：280 nm流动相：乙腈和0.1 ％醋酸溶液，在0~30 min内，乙腈由0 ％~100 ％梯度洗脱流速：1.0 mL/min柱温：25 ℃进样量：20 mL6.4 测定精密吸取试样和标准样品溶液，按规定色谱条件分别进样20 µL，按照6.3项条件进行检测，以保留时间定性，外标法定量谱图见附录6.5 结果计算按外标法计算试样中酪蛋白磷酸肽的含量见下式：式中：X —试样中酪蛋白磷酸肽的含量，mg/kg；A —从标准曲线上求出的试样液中酪蛋白磷酸肽的质量，mg；f —试样的稀释倍数；m —试样的取样量，g；计算结果保留两位有效数字。

6.6 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10 %附 录 A（资料性附录） 酪蛋白磷酸肽标准样品的色谱图2。