不规则抗体筛选和鉴定标准操作规程.docx

精品不规则抗体筛选和鉴定标准操作规程1 .检验目的不规则抗体筛选和鉴定可在交叉配合之前进行或一起进行， 这样有利于患者抗体的早期确认及鉴定， 发现临床上有意义的抗体， 避免一些可能的情况而造成病情的延误2 .检验方法分盐水介质法、抗球蛋白法和微柱凝胶法3 .检验原理让待检者的血清与已知血型的试剂红细胞即筛选红细胞（I、H、m套）起反应，以发现在 37 ℃中有反应活性的抗体这种抗体可引起新生儿溶血病、溶血性输血反应、 或使输入的红细胞存活期缩短等 当不规则抗体筛选试验阳性后，再进行不规则抗体鉴定，即利用谱红细胞（ 11 套鉴定细胞）与待检者的血清反应，根据反应结果判断机体所产生的同种抗体类别4 .标本要求受检者不抗凝静脉血 4.0ml ，分离血清， 48 小时内使用5 .试剂5.1. 筛选红细胞：由 2 或 3 人份的 O 型红细胞组成为一套试剂，每套试剂筛选红细胞中至少有以下常见的抗原： D、 C、 E、 c、 e、 M 、 N、 S、 s、 P、Lea、Leb、K、k、Fya、Fyb、Jka、Jkb 等每次用 3 套试剂（I、H、m）进行抗体筛选，见表 1005-1 5.2. 鉴定谱细胞： 除包括常见的抗原以外还有： Cw、 Kpa、 Kpb、 Jsa、 Jsb、 Lua、Lub、Xr/min a等。

每次用11套试剂进行抗体鉴定，见表 1005-2 5.3. 抗球蛋白试剂：多特异性抗球蛋白血清（IgG、C3d）5.4. 致敏红细胞（质控细胞）5.5. 0.9%生理盐水5.6. Coombs微柱凝胶卡6 .器材试管、吸管、37 c水浴箱、台式离心机、滤纸、微量加样器等7 .操作程序7.1. 盐水介质法7.1.1. 取受检者血清2滴于标记有I、H、m的3支小试管中7.1.2. .对应加入I、H、m套 2%〜5%筛选红细胞生理盐水悬液1滴, 37 C孵育30分钟7.1.3. 以3000r/min 离心10秒，观察凝集和溶血情况，并记录反应情况于表1005-1中如果抗体筛选试验阳性，继续做以下试验表1005-1 红细胞血型筛选细胞反应格局表序血型系Rh-hrKellDuffyKillLewisPMNSsLuth号基因DCEceKkFyFyJkJkLeLePMNSsLuLuababab1abIR1R1++00++++00++0+0+++0+RR2R2+0++00++++00+0+++00+mR1r1++0++0++0+00+0+00+0+试验结果（盐水法、抗球蛋白法、微柱凝胶法）I R1R1RR2R2mR1r1注：+为阳性；0为阴性7.1.4. 取受检者血清2滴于标记有1〜11的11支小试管中。

7.1.5. 在11支小试管中分别加入11套2%〜5%鉴定谱细胞生理盐水悬液1滴，37c孵育30分钟7.1.6. 以3000r/min 离心10秒，观察凝集和溶血情况,并将反应情况记录于表1005-2中表1005-2 红细胞血型谱细胞反应格局表序号血型系Rh-hrKellDuffyKillLewisPMNSsLuth基因DCEceKkFyaFybJkaJkbLeaLebP1MNSsLuaLub1R1wR1++00+0+++0+0++++++0+2R1R1++00+++0++00++0+0+0+3R2R2+0++00++0+00+++0+00+4r 'r0+0++++++++00++++00+5r〃 r00+++0+++0++00+0++0+6r r000+++0+00+0++0+0+0+7r r000++0+0+0+0+0++0+0+8Ror+00++0+00+00++++0+0+9r r000++0++++00+++0+00+10r r000++++0+0++0++00+0+11r r000++0+0+0+00+++++++结 果（盐水法、抗球蛋白法、微柱凝胶法）1R1wR12R1R13R2R24r r5r〃 r6r r7r r8Ror9r r10r r11r r注：+为阳性；0为阴性；W为弱阳性7.2. 球蛋白法7.2.1. 如果盐水法（1）〜（3）抗体筛选试验阴性，继续做以下试验。

7.2.2. 冉振摇试管，使管底红细胞重新悬浮，用生理盐水洗涤 3次7.2.3. 最后一次洗涤后，弃去全部盐水，将试管边缘盐水用滤纸吸干7.2.4. 立即加入多特异性抗球蛋白血清 1滴，混匀7.2.5. 3000r/min 离心10秒，轻轻悬浮细胞，肉眼观察凝集和溶血情况，并用显微镜确证，记录结果于表1005-1中7.2.6. 如果抗体筛选试验阳性，再取受检者血清2滴于标记有1〜11的11支 小试管中-可编辑-精品7.2.7. 在11支小试管中分别加入11套鉴定谱细胞悬液1滴和多特异性抗球蛋白血清1滴，37 c孵育30分钟7.2.8. 以3000r/min 离心10秒，观察凝集和溶血情况，并将反应情况记录于表1005-2中7.3. 微柱凝胶法（强生卡）7.3.1. 在Coombs微柱凝胶卡上标记I、H、田，分别加入I、H、田套筛选红细胞40仙和被检血清40仙l7.3.2. 将Coombs微柱凝胶卡置于微柱凝胶孵育器内，孵育 15分钟7.3.3. 取出微柱凝胶卡观察结果，并记录于表 1005-1中7.3.4. 如果抗体筛选试验阳性，将11套鉴定谱细胞对应加入标记有1〜11的微柱凝胶卡中各40仙l。

7.3.5. 然后，再各加入被检血清40仙l7.3.6. 重复操作7.3.2.和7.3.3,观察结果，并记录于表 1005-2中8 .结果判断8.1. 必须记录观察到的每个细胞样本的凝集强度或溶血现象8.2. 盐水法和抗球蛋白法以土〜+ + + +为阳性凝集结果；微柱凝胶法中抗原抗体复合物浮在微柱凝胶卡表面或胶中， 为阳性反应；沉于尖底部为阴性反应，见精品图 1005-1 微柱凝胶法结果判断8.3. 抗球蛋白法阴性无凝集，应加入致敏红细胞（质控细胞） 1 滴，混匀后以1000r/min 离心 15 秒， 观察结果， 若凝集表示试验结果为阴性； 若不凝集，表示抗球蛋白血清可能失效，试验无意义8.4. 盐水法和抗球蛋白法判断溶血和凝集的终点必须准确和前后一致，如果溶血和凝集都存在， 离心后要立即观察上清液的情况， 然后轻轻地把细胞摇散以观察凝集8.5. 红细胞血型筛选细胞和谱细胞反应格局见表 1005-1 和 1005-2 9 .注意事项9.1. 每种试验必须做自身对照，即待检者自身血清和自身红细胞反应，无凝集则试验有效；若有凝集则提示存在自身免疫抗体9.2. 抗体筛选阳性后，要用生理盐水洗涤红细胞 3 次，离心后再观察结果，避免假阳性反应。

9.3. 根据反应凝集强度土〜+ + + +记为阳性结果，表示待检者血清中有不规则抗体， 结合谱细胞反应格局， 确定抗体特性； 无凝集表示待检者血清中无不规则抗体9.4. 抗球蛋白法或微柱凝胶法出现凝集，而盐水法无凝集，则提示不规则抗体为 IgG 性质9.5. 方法选择：盐水介质检测法和非盐水介质检测法，后者包括抗球蛋白法、聚凝胺法、酶法、低离子介质法、微柱凝胶法等，本试验运用盐水介质、抗球蛋白- 可编辑 -法和微柱凝胶法。