第十六章唾液及唾液斑检验.ppt

第十六章第十六章 唾液及唾液斑检验唾液及唾液斑检验Nsmc xdd1罗卡定律罗卡定律1910 1910 年，法国警官艾德蒙罗卡年，法国警官艾德蒙罗卡年，法国警官艾德蒙罗卡年，法国警官艾德蒙罗卡 内容内容内容内容：： 所有接接触必留下痕迹所有接接触必留下痕迹所有接接触必留下痕迹所有接接触必留下痕迹 凡两个物体接触，必定会有所交换（转移）凡两个物体接触，必定会有所交换（转移）凡两个物体接触，必定会有所交换（转移）凡两个物体接触，必定会有所交换（转移）意义意义意义意义：： 刑事鉴识人员攻克无数难关的核心武器刑事鉴识人员攻克无数难关的核心武器刑事鉴识人员攻克无数难关的核心武器刑事鉴识人员攻克无数难关的核心武器 法医学的黄金法则法医学的黄金法则法医学的黄金法则法医学的黄金法则2打喷嚏不光打喷嚏不光会传播疾病会传播疾病还会还会……3456第一节第一节 概述概述一、唾液（斑）的特点一、唾液（斑）的特点J概念：概念： 唾液（唾液（ salivasaliva ）：）：唾液腺唾液腺的分泌物的分泌物 唾液斑（唾液斑（ saliva stainstain）：唾液干燥后形成）：唾液干燥后形成的斑痕的斑痕J唾液来源：唾液来源： 颌下腺约颌下腺约70%，腮腺约，腮腺约25%,舌下腺约舌下腺约5%，其余小唾，其余小唾液腺液腺78J成分：（水分占成分：（水分占99.4%99.4%）） 有机物有机物------粘粘/ /球蛋白质、氨基酸、尿素、尿酸、球蛋白质、氨基酸、尿素、尿酸、唾液唾液淀粉酶淀粉酶、麦芽糖酶、、麦芽糖酶、血型物质血型物质 无机物无机物------钠、钾、氯、钙、铵、磷酸盐、碳酸盐、钠、钾、氯、钙、铵、磷酸盐、碳酸盐、硫硫氰酸盐，氰酸盐，其余为固形物（其余为固形物（口腔脱落上皮细胞口腔脱落上皮细胞、大量细菌、食物残渣）、大量细菌、食物残渣）J性状：性状： 无色、无味、接近中性（无色、无味、接近中性（ph6.6-7.1））J分泌量：分泌量： 正常成年人每日分泌唾液约正常成年人每日分泌唾液约1.0～～1.5升，分泌量及性质升，分泌量及性质受精神因素、刺激的强度和性质及食物种类有关系。

受精神因素、刺激的强度和性质及食物种类有关系9Ø湿润口腔，调和润湿食物，使食物溶解并引起味觉，湿润口腔，调和润湿食物，使食物溶解并引起味觉，便于吞咽便于吞咽Ø淀粉酶淀粉酶可水解淀粉及糖原，起到消化作用；可水解淀粉及糖原，起到消化作用；Ø防止口腔干燥，清除食物残渣，洁净口腔；其中防止口腔干燥，清除食物残渣，洁净口腔；其中硫硫氰酸盐氰酸盐及蛋白质抗体可杀灭细菌某些动物唾液中及蛋白质抗体可杀灭细菌某些动物唾液中含神经生长因子和表皮生长因子可有助于创面收缩，含神经生长因子和表皮生长因子可有助于创面收缩，伤口愈合伤口愈合Ø中和胃酸保护胃壁中和胃酸保护胃壁二、唾液的功能二、唾液的功能10Ø应用价值：主要是应用价值：主要是个人识别个人识别和和亲子鉴定亲子鉴定方面Ø目的要求：是否唾液（斑）；个人识别目的要求：是否唾液（斑）；个人识别三、唾液（斑）检验三、唾液（斑）检验能否正确能否正确收集与保存收集与保存唾液（斑）是检唾液（斑）是检材能否正确鉴定的关键所在材能否正确鉴定的关键所在11第二节第二节 唾液（斑）的提取唾液（斑）的提取可能出现的地方：可能出现的地方：现场的烟蒂、手帕、口罩、纸巾、瓜子皮、果核、现场的烟蒂、手帕、口罩、纸巾、瓜子皮、果核、嚼过的口香糖、喝过水的茶杯；尸体皮肤（口唇部、嚼过的口香糖、喝过水的茶杯；尸体皮肤（口唇部、乳房）及其他物品上的咬痕等均可遗留有唾液斑。

乳房）及其他物品上的咬痕等均可遗留有唾液斑唾液斑在白色背景下呈现淡黄色，紫外线下发淡青色荧光唾液斑在白色背景下呈现淡黄色，紫外线下发淡青色荧光1213一、《中华人民共和国安全行业标准》中制定了血液及体液检材的提取标准，其中也包括了唾液（斑）的相关内容141、新鲜唾液的提取：应要求被鉴定人先漱口，再将纱布或棉拭子放人口中，浸湿后取出，立即置通风干燥处晾干，分别包装，作好有关的记录也可将自然流出的唾液1～～2mL ，置干净容器内置冰冻保存 ，或者立即放水浴中煮沸10min，灭活唾液中的血型分解酶活性，然后置4℃冰箱保存常用的唾液（斑）提取方法常用的唾液（斑）提取方法152、现场发现可以痰迹或尸体皮肤及其他物体现场发现可以痰迹或尸体皮肤及其他物体上咬痕部位的可疑唾液斑，应用上咬痕部位的可疑唾液斑，应用生理盐水生理盐水浸润浸润的棉拭子或纱布，擦拭斑迹，再用干的棉拭子或纱布，擦拭斑迹，再用干棉拭子或纱布擦拭相同部位，晾干，该两棉拭子或纱布擦拭相同部位，晾干，该两份提取物应装入份提取物应装入同一同一物证袋晾干后包好，物证袋晾干后包好，备检（两步法擦拭）备检（两步法擦拭）3、烟蒂、瓜子壳、果核均应用镊子提取，按、烟蒂、瓜子壳、果核均应用镊子提取，按不同提取部位分别装入物证袋，做好标记。

不同提取部位分别装入物证袋，做好标记 164.对可疑的用于堵嘴的手帕或衣物等均应整件对可疑的用于堵嘴的手帕或衣物等均应整件提取，如有湿润部位，应晾干后包装送检提取，如有湿润部位，应晾干后包装送检5.犯罪分子用过的可疑口杯、茶具等均可用两犯罪分子用过的可疑口杯、茶具等均可用两步擦拭法擦拭其边缘部位，或直接送检步擦拭法擦拭其边缘部位，或直接送检6.信封口或邮票背面可疑遗留唾液斑时，对该信封口或邮票背面可疑遗留唾液斑时，对该信封和邮票整件提取，装物证袋，送检信封和邮票整件提取，装物证袋，送检17第三节第三节 唾液（斑）的检测唾液（斑）的检测1、肉眼检验、肉眼检验2、预实验、预实验3、确证实验、确证实验4、个人识别、个人识别181、肉眼检验、肉眼检验唾液斑在白色背景下呈现唾液斑在白色背景下呈现淡黄色淡黄色唾液斑在紫外线下发出唾液斑在紫外线下发出淡青色荧光淡青色荧光192、预实验、预实验（（1））淀粉淀粉-碘试验碘试验（（2）不溶性淀粉）不溶性淀粉-染料复合物试验染料复合物试验（（3）斑点法）斑点法20试验原理试验原理： 淀粉遇碘呈淀粉遇碘呈蓝色蓝色唾液中含有大量淀粉酶，能唾液中含有大量淀粉酶，能将淀粉分解为糖，糖与碘不呈蓝色反应。

因此，将淀粉分解为糖，糖与碘不呈蓝色反应因此，将已知淀粉溶液与唾液斑作用后，再加碘，若不将已知淀粉溶液与唾液斑作用后，再加碘，若不显蓝色，说明反应体系中淀粉已被唾液淀粉酶分显蓝色，说明反应体系中淀粉已被唾液淀粉酶分解然后再利用糖的还原作用验证淀粉分解产物解然后再利用糖的还原作用验证淀粉分解产物糖的存在，便可判断检材中含有淀粉酶糖的存在，便可判断检材中含有淀粉酶淀粉淀粉-碘试验碘试验21主要试验材料：主要试验材料：0.01%淀粉溶液、碘液、淀粉溶液、碘液、1%氯化三苯基四氮唑氯化三苯基四氮唑溶液、碱性铜试剂等溶液、碱性铜试剂等试验方法：试验方法：首先证明淀粉酶的存在，然后阳性者进一步首先证明淀粉酶的存在，然后阳性者进一步证明糖的存在证明糖的存在22Ø试验结果分析：试验结果分析：有无有无蓝色变化蓝色变化；有无；有无红色沉淀红色沉淀Ø试验注意事项：本试验灵敏度较高，要注意所出现假阳性 如烟草浸出液；假阴性结果，如陈旧检材233、确证实验（1）口腔黏膜脱落上皮细胞检查（2）三氯化铁试验（3）其它（抗腮腺素血清、发射光谱法、叠氮钠法等）24 唾液中含有口腔粘膜脱落上皮细胞，将检材用生理盐水充分浸泡，弃去载体，离心，取沉淀物涂片，干燥后HE染色，显微镜下检查。

如发现口腔粘膜脱落上皮细胞，结合淀粉酶试验阳性结果，可判断为唾液斑，如同时查见食物残渣，则更支持此结论口腔粘膜脱落上皮细胞的检查25三氯化铁试验Ø试验原理： 唾液中硫氰酸根离子在酸性条件下可与高价铁离子反应生成红色络合物Ø试验材料： 40%三氯化铁溶液，2.9M盐酸26试验方法：将一滴可疑唾液或唾液斑浸液滴于白瓷板凹内，先加一滴2.9M 盐酸溶液，再加一滴40%三氯化铁溶液，摇匀，观察结果实验结果：呈现浅红色者为阳性反应，证明是唾液斑硫氰酸根离子浓度较高时，呈现棕红色或深红色，不变色或棕绿色则为阴性反应27注意事项：注意事项： 本法的特异性优于淀粉酶检出法，灵敏度本法的特异性优于淀粉酶检出法，灵敏度虽然低于淀粉酶检出法，但对于腐败唾液虽然低于淀粉酶检出法，但对于腐败唾液斑而言，该法不受影响斑而言，该法不受影响 当淀粉酶检出试验阳性，在排除被硫氰当淀粉酶检出试验阳性，在排除被硫氰酸盐、溴化钾、重铬酸钾等化学药品污染酸盐、溴化钾、重铬酸钾等化学药品污染情况下，强阳性结果可以确证唾液斑情况下，强阳性结果可以确证唾液斑284、个人识别、个人识别（（1）唾液（斑）红细胞）唾液（斑）红细胞血型检测血型检测（（2）唾液（斑））唾液（斑）多态性蛋白和酶多态性蛋白和酶的检测的检测（（3）唾液（斑）的）唾液（斑）的DNA分析分析（（4）唾液）唾液(斑斑)的的性别鉴定性别鉴定29中和试验（中和试验（测定原理及方法与精斑类似测定原理及方法与精斑类似））免疫学方法：灵敏度高，适用于免疫学方法：灵敏度高，适用于非分泌型非分泌型和和中中 和试验阴性和试验阴性者，斑点者，斑点ELISA、、 ELISA-ABC等等其它方法：解离试验、混合凝集试验其它方法：解离试验、混合凝集试验30唾液（斑）多态性蛋白：唾液（斑）多态性蛋白： 唾液碱性蛋白、唾液酸性蛋白、唾液碱性蛋白、唾液酸性蛋白、唾液富含脯氨酸蛋唾液富含脯氨酸蛋白白、唾液双带蛋白、腮腺唾液中带快蛋白等、唾液双带蛋白、腮腺唾液中带快蛋白等唾液（斑）多态性酶：唾液（斑）多态性酶： 唾液淀粉酶唾液淀粉酶、唾液脂酶、唾液、唾液脂酶、唾液6-磷酸盐脱氢酶、唾磷酸盐脱氢酶、唾液酸性磷酸酶等液酸性磷酸酶等检测方法：检测方法： 酸性尿素淀粉凝胶电泳、碱性酸性尿素淀粉凝胶电泳、碱性PAGE和等电聚焦电和等电聚焦电泳泳31图图1聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳Pr表型模式图表型模式图等电聚焦电泳：等电聚焦电泳：唾液淀粉酶唾液淀粉酶6种表型种表型PAGE：：唾液脂酶唾液脂酶3种种唾液过氧化物酶唾液过氧化物酶3种唾液种唾液富含脯氨酸蛋白富含脯氨酸蛋白3种（图种（图1））唾液糖蛋白唾液糖蛋白11种种32口腔粘膜脱落上皮细胞：口腔粘膜脱落上皮细胞：J 据报道，每据报道，每15ml唾液及漱口水、每唾液及漱口水、每5cm2的唾液拭子的唾液拭子与唾液斑与唾液斑DNA平均含量分别为平均含量分别为12μg、、22μg、、1.3μg及及0.8μg。

测定测定10个烟头，每个烟头个烟头，每个烟头DNA的平均含量是的平均含量是12～～120ngJ基因组和线粒体基因组和线粒体DNA分析分析JDNA提取方法：提取方法：Chelex-100法法、有机溶剂法及其它、有机溶剂法及其它准确、有效地从唾液（斑）中提取准确、有效地从唾液（斑）中提取DNA，是进，是进行行DNA分析的关键分析的关键33 分分析析血血痕痕、、精精斑斑DNA多多态态性性的的方方法法，，均均能能应应用用于于唾唾液液好好的的唾唾液液斑斑检检材材，，只只要要能能提提取取出出大大分分子子DNA，，可可进进行行DNA指指纹纹图图分分析析；；陈陈旧旧唾唾液液斑斑，，DNA部部分分降降解解，，可可用用PCR法法分分析析所所以以分分析析DNA多多态态性性是是目目前前进进行行唾唾液液( 斑斑 ) 个个人人识识别别的的有有效效手手段段34J形态学分析形态学分析 X、、Y染色质染色质JDNA分析分析1.染色体特异性片段：染色体特异性片段：DXS4542.X-Y同源序列：牙釉基因同源序列：牙釉基因(Amelogenin)、、 ZFY／／ZFX基因基因3.Y-STR或或X-STR3536案例分析一 某日，在某地一大桥洞中发现一具无名男某日，在某地一大桥洞中发现一具无名男尸。

经法医检验，确定为他杀死因是棍尸经法医检验，确定为他杀死因是棍棒致颅脑损伤死亡现场勘验提取到的主棒致颅脑损伤死亡现场勘验提取到的主要法医物证为要法医物证为2根带血迹的木棒、根带血迹的木棒、5处血迹、处血迹、4堆瓜子壳、堆瓜子壳、8枚烟蒂案枚烟蒂案 3737物证检验结果： 现场 5处血迹、2根木棒上血迹均为死者所留；现场 8枚烟蒂和 3堆瓜子壳上唾液斑分别为不同于死者的另外4名男性所留，另1堆瓜子壳上唾液斑未检出STR分型数据通过D N A数据库比对，直接认定案犯3838瓜子壳上唾液斑瓜子壳上唾液斑D N A提取的特点：提取的特点：•按照一般人嗑瓜子的习惯，一堆瓜子壳为同一个人留下的可能性较大，按照一般人嗑瓜子的习惯，一堆瓜子壳为同一个人留下的可能性较大，所以在现场提取瓜子壳时应注意按照所以在现场提取瓜子壳时应注意按照不同方位分堆提取不同方位分堆提取，不能全部集，不能全部集中在一块提取在中在一块提取在 D N A检验时可以在同一堆内检验时可以在同一堆内选择选择 2至至 3枚枚瓜子壳瓜子壳放入同一离心管中进行检验由于每个人嗑瓜子的方式不同，在瓜子放入同一离心管中进行检验。

由于每个人嗑瓜子的方式不同，在瓜子壳上留下的唾液量也有较大差异，因此对送检的瓜子壳要认真挑选比壳上留下的唾液量也有较大差异，因此对送检的瓜子壳要认真挑选比较新鲜的瓜子壳，要注意挑选较新鲜的瓜子壳，要注意挑选相对潮湿相对潮湿的含唾液成分较多的进行检验，的含唾液成分较多的进行检验，这样检验成功的概率比较高这样检验成功的概率比较高•瓜子在加工时一般加入糖、盐、味精等佐料，这些成分对瓜子在加工时一般加入糖、盐、味精等佐料，这些成分对 DNA扩增扩增有一定的抑制作用，所以用有一定的抑制作用，所以用 Chelex-100法提取后要进一步法提取后要进一步纯化处理纯化处理3939案例分析二•2 0 0 6 年某日，在一出租房内，发现龙某年某日，在一出租房内，发现龙某(女，女，2 0岁，岁，) 下身裸露倒在床上，已死亡现场位于一下身裸露倒在床上，已死亡现场位于一砖混结构的出租房内，有清理痕迹，地面倒有大砖混结构的出租房内，有清理痕迹，地面倒有大量水痕，此现场为破坏现场，现场勘验没有提取量水痕，此现场为破坏现场，现场勘验没有提取到有价值的痕迹物证死者龙某颈部勒有一条撕到有价值的痕迹物证死者龙某颈部勒有一条撕破的短裤，死因系机械性窒息。

提取死者阴道拭破的短裤，死因系机械性窒息提取死者阴道拭子、地上水迹等相关物证考虑到死者有被性侵子、地上水迹等相关物证考虑到死者有被性侵犯的迹象，对尸体的左右乳房、口唇部斑迹进行犯的迹象，对尸体的左右乳房、口唇部斑迹进行提取4040物证检验结果：物证检验结果：(1)龙某阴道拭子和外阴拭子均检出精斑，均为龙某男友曾龙某阴道拭子和外阴拭子均检出精斑，均为龙某男友曾某所留；某所留；(2)龙某口唇部擦拭物检出唾液斑成分，为龙某和曾某两人龙某口唇部擦拭物检出唾液斑成分，为龙某和曾某两人混合；混合；(3) 龙某右乳擦拭物检出唾液斑成分，为排除龙某男友曾某龙某右乳擦拭物检出唾液斑成分，为排除龙某男友曾某外的另一名男性外的另一名男性A所留；所留； (4)龙某左乳擦拭物检出唾液斑成分，为龙某、曾某和男性龙某左乳擦拭物检出唾液斑成分，为龙某、曾某和男性A混合 通过排查把目标锁定在案发后失踪的郭某身上对郭某通过排查把目标锁定在案发后失踪的郭某身上对郭某暂住房进行勘查，提取地暂住房进行勘查，提取地3枚烟蒂，枚烟蒂， 经经DNA检验，检验， 该该3枚烟蒂均为男性枚烟蒂均为男性A所留侦查人员成功抓获郭某，经检所留。

侦查人员成功抓获郭某，经检验郭某与男性验郭某与男性A基因型相同基因型相同4141 性犯罪案件中，遗留在现场及受害者体内性犯罪案件中，遗留在现场及受害者体内的的精斑精斑是最重要的生物学证据之一在勘是最重要的生物学证据之一在勘查现场时，查现场时， 除了提取受害人除了提取受害人阴道拭子阴道拭子、、内内裤裤及可能留下案犯精斑的及可能留下案犯精斑的各类载体、烟蒂各类载体、烟蒂等生物学检材，还要综合案件的具体情况，等生物学检材，还要综合案件的具体情况，特别是有反映案犯对受害人身体有亲吻情特别是有反映案犯对受害人身体有亲吻情况，不要忽视受害者的况，不要忽视受害者的口唇、口唇、 乳房乳房等相关等相关部位唾液斑的提取部位唾液斑的提取424243。