ABCG2与抗砷性产生关系的研究.pdf

摘要且盟：通过检测过表达A B C G 2 的细胞模型砷耐受性的改变，初步探讨A B C G 2 与抗砷性产生关系直迭：( 1 ) 免疫荧光化学方法检；! 贝{ ] C h A s E ．B M S C s 、膀胱癌抗砷细胞以及2 3 例急性白血病患者骨髓I 为A B C G 2 的表达情况；( 2 ) 真核表达载体p E G F P —C 1 一A B C G 2 经转化、筛选、 测序鉴定后，抽提并获取高纯度的重组质粒，采用脂质体介导转染法转染至2 9 3 T 细胞，w e s t e r n ．b l o t 鉴定转染效果( 3 ) 台盼兰计数方法检测A B C G 2 过表达对2 9 3 T 细胞增殖的影响( 4 ) 细胞毒性实验检测A B C G 2 过表达细胞对砷剂耐受性的改变绫墨：( 1 ) 免疫荧光方法检测两种抗砷细胞中A B C G 2 蛋白表达均低于对照组细胞；( 2 )免疫荧光方法检测2 3 例急性白血病患者A B C G 2 蛋白表达强度，从低到高依次为：正常对照组、初发组和复发组，三者之间差异有统计学意义( P O ．0 5 ) 该结果说明A B C G 2 转染成功。

表1不同组别的A B C G 2 蛋白相对表达含量比较分析结果2 6^ 8 C 6 2 ’，抗砷件F ±关系的Ⅻ兜^ B c ( ；29 3 T2 9 3 T - C l1 9 3 ●G一—- ' ， 匕= [ = 口- ▲l ·—- ■- 一图2 72 9 3 T 中A B C G 2 表达的w e s t e r n —b l o t 鉴定结果图2 8 不同组别的A B C G 2 蛋白相对表达含量( F = 7 02 2 9 ，P O ．0 5 ) 有人采用基因芯片技术发现耐药基因并非与每种化疗药物耐药密切相关心引，对于A B C G 2 而言，该蛋白的转运底物广泛而复杂，国内外已有文献证实的药物如下：①葸环类，包括柔红霉素，阿霉素，表柔比星，米托恩醌，比山群，葸比唑②喜树碱类似物，包括拓扑替康，氨基喜树碱，依力替康，甲氨喋呤③核苷类似物，包括叠氮胸苷，拉米夫定④其它药物，包括哌唑嗪，拓扑异构酶1 抑制剂，H E R l 的酪氨酸激酶抑制剂，甲磺酸伊马替尼⑤荧光基团，包括罗丹明等⑥共扼化合物，包括3 一硫酸雌酮等丝氨酸磷脂，脱美叶绿甲酯酸等瞳钆矧根据袁建辉等口¨研究结果表明，A B C G 2 表达增高时，细胞对如紫杉醇、顺铂、长春碱、丝裂霉素、长春地辛等药物仍保持敏感性。

我们的急性砷中毒实验中A B C G G 2 高表达组细胞生存率下降，推测砷可能不是A B C G 2 的特异性底物，这与已发表的A B C G 2 耐药谱相一致一些化学药物女I F T C 、G F l 2 0 9 1 8 、雌激素、A B C G 2 的特异抗体5 D 3 及R N A 干扰技术与核酶技术均能逆转过表达A B C G 2 细胞株的耐药性，但效果仍不是十分满意，关于A B C G 2 的抑制剂尚需要进一步研究王建华等口别研究表明A s ：0 造成线粒体内膜电位差破坏，使A T P合成异常，不能为细胞提供充足能量而A B C G 2 主要通过结合和水解A T P 将胞内的药物泵出，降低胞内药物浓度从而引起耐药有实验表明在脱氧葡萄糖和叠氮化钠去除能量的A B C G 2 与抗砷性产生关系的研究介质中药物蓄积增加，罗丹明1 2 3 排出减少，证明A T P 能量的阻断可抑$ 0 A B C G 2 的转运功能口1 结合上述研究成果，本研究另外一方面推测，砷可能作为一种新型的抑制剂降I ' i 乇A B C G 2转运功能另外就A B C G 2 蛋白自身而言，它是一种半转运物，必须形成同型二聚体后才具有转运底物的活性侧。

A B C G 2 第4 8 2 位精氨酸对膜转运功能至关重要，采用定点突变使该编码序列改变可使A B C G 2 丧失转运功能m 1 在本研究中这些因素是不是对A B C G 2 转运功能的发挥产生了影响，还有待于进一步研究综上：本研究结果初步表明A B C G 2 可能不参与砷的外排转运抗砷细胞A B C G 2 表达下调可能与A B C G 2 的非细胞膜定位有关，或者砷剂可能抑制了A B C G 2 的转运功能，有待于积累资料进一步研究3 7A B C G 20 抗砷性产生关系的研究结论( C o n c l u s i o n )( 1 ) 抗砷细胞内A B C G 2 蛋白表达下调，细胞抗砷性与A B C G 2 表达呈负相关；( 2 ) A B C G 2 高表达是急性白血病患者不利的预后因素；( 3 ) 成功建立过表达A B C G 2 基因的细胞模型；A B C G 2 与抗砷性产生关系的研究参考文献( R e f e r e n c e )[ 1 】V a r m aM V ，A s h o h ' a jY ，D e yC S ，e ta 1 ．P —g l y c o p r o t e i ni n h i b i t o r sa n dt h e i rs c r e e n i n g ：ap e r s p e c t i v ef r o ma v a i l a b i l i t ye n h a n c e m e n t [ J ] ．P h a r m a c o lR e s ，2 0 0 3 ，4 8 ( 4 ) ：3 4 7 —3 5 9 ．【2 】D o y l eL A ，Y a n gW D ，A b r u z z oL V ，e ta 1 ．Am u l t i d r u gr e s i s t a n c et r a n s p o r t e rf r o mh u m a nM C F 一7b r e a s tc a n c e l - c e l l s ．P r o cN a t lA c a dS c iU S A ，19 9 8 ，( 9 5 ) ：15 6 6 5 - 15 6 7 0[ 3 】T o m r i sO ．M e c h a n i s m sa n ds t r a t e g i e st oo v e r c o m em u l t i p l ed r u gr e s i s t a n c ei nc a n c e r [ J 】．F E B SL e t t ，2 0 0 6 ，5 8 ( 1 0 ) ：2 9 0 3 —2 9 0 5 ．[ 4 】A l b e r m a n nN ，S c h m i t z - W i n n e n t h a lF H ，Zq r a q q e nK ，e ta 1 ．E x p r e s s i o no ft h ed r u gt r a n s p o r t e r sM D R l ／A B C B l ，M R P l ／A B C C l ，M R P 2 伽C C 2 ，B C R P ／A B C G 2a n dP X Ri np e r i p h e r a lb l o o dm o n o n u c l e a rc e l l sa n dt h e i rr e l a t i o n s h i pw i t ht h ee x p r e s s i o ni ni n t e s t i n ea n dl i v e r [ J 】．B i o nt h e mP h a r m a c o l ，2 0 0 5 ，7 0 ( 6 ) ：9 4 9 —9 5 8 ．[ 5 ] H o n j oY ，H r y c y n aC A ，Y a nO W ，e ta 1 ．A c q u i r e dm u t a t i o n si nt h eM X R ／B C R P ／A B C Pg e n ea l t e rs u b s t r a t es p e c i f i c i t yi nM X R ／B C R P ／A B C Po v e r e x p r e s s i n gc e l l s [ J ] ．C a n c e rR e s ，2 0 0 1 ；6 1 ：6 6 3 5 - - 。

6 6 3 9 ．[ 6 ] C h e nY ，M u l l e rJ D ，R u aQ ，e ta 1 ．M o l e c u l a rB r i g h t n e s sC h a r a c t e r i z a t i o no fE G F Pi nV i v ob yF l u o r e s c e n c eF l u c t u a t i o nS p e c t r o s c o p y [ J ] ．B i o p h y s ，2 0 0 2 ，8 2 ：1 3 3 ·1 4 4 ．【7 】H o r g a nA M ，S t o r kP J ．E x a m i n i n gt h eM e c h a n i s mo fE r kN u c l e a rT r a n s l o c a t i o nU s i n gG r e e nF l u o r e s c e n tP r o t e i n [ J 】．E x pC e l lR e s ，2 0 0 3 ，2 8 5 ：2 0 8 —2 2 0 ．[ 8 】李晶，孙关林．二种不同砷剂体外对细胞增殖及程序化死亡作用的研究[ J ] ．白血病，1 9 9 8 ，7 ( 3 ) ：1 3 6 ～1 3 9 ．[ 9 】S o i g n e tS L ，F r a n k e lS R ，D o u e rD ，e ta 1 ．U n i t e dS t a t e sm u l t i c e n t e rs t u d yo f a r s e n i ct r i o x i d ei nr e l a p s e da c u t ep r o m y e l o c y t i cl e u k e m i a [ J 】．C l i nO n c o l ，2 0 01 ，19 ：38 5 2 - 38 6 0 ．[ 1 0 】S h e nZ Y ，S h e nW Y ，C h e nM H ，e ta 1 ．R e a c t i v eo x y g e ns p e c i e sa n da n t i o x i d a n t si na p o p t o s i so fe s o p h a g e a lC a n C e rc e l l si n d u c e db yA s 2 0 3 【J ] ．I n tJM o lM e d ，2 0 0 3 ，11 ( 4 ) ：4 7 9 ．4 8 4 ．[ 11 ] S h a oQ S ，Y eZ Y ，L i n gZ Q ，e ta 1 ．C e l lc y c l ea r r e s ta n da p o p t o t i cc e l ld e a t hi nc u l t u r e dh u m a ng a s t r i cc a r c i n o m ac e l l sm e d i a t e db ya r s e n i ct r i o x i d e 【J 】．W o r l dJG a s t r o e n t e r o l ，2 0 0 5 ，1 1 ( 2 2 ) ：3 4 5 1 - 3 4 5 6 ．【12 】H u i l g o lN GAp h a s eIs t u d yt os t u d ya r s e n i ct r i o x i d ew i 。