霉菌水浸标本片的制备与观察.docx

Word文档霉菌水浸标本片的制备与观察 （一）试验目的：学习自制水浸片观看霉菌的形态 （二）试验原理：霉菌的养分体是分枝的丝状体其个体比细菌和放线菌大得多，分为基内菌丝和气生菌丝气生菌丝中又可分化出繁殖丝不同霉菌的繁殖菌丝可以形成不同的孢子 霉菌菌丝较粗大，细胞易收缩变形，且孢子简单飞散，所以制标本时常用乳酸石炭酸棉蓝染色液此染色液制成的霉菌标本片的特点是：细胞不变形，具有杀菌防腐作用，且不易干燥，能保持较长时间，溶液本身呈蓝色，有肯定染色效果 利用培育在玻璃纸上的霉菌作为观看材料，可以得到清楚、完整、保持自然状态的霉菌形态；也可以直接挑取生长在平板中的霉菌菌体制水浸片观看 （三）试验器材 1.活材料：在马铃薯琼脂平板上或用玻璃纸透析培育法培育34天的根霉（Rhizpus sp.）、青霉（Penicillum sp.）、曲霉（Aspergillus sp.）； 2.染色液和试剂：乳酸石炭酸棉蓝染色液（附录二、（一）、10）、50%酒精（V/V） 3.器材：剪刀、镊子、载玻片、盖玻片、解剖针、显微镜 （四）试验方法 1.制水浸制片观看法 在载玻片上滴加一滴乳酸石炭酸棉蓝染色液或蒸馏水，用解剖针从生长有霉菌的平板中挑取少量带有孢子的霉菌菌丝，用50%的乙醇浸润，再用蒸馏水将浸过的菌丝洗一下，然后放入载玻片上的液滴中，认真地用解剖针将菌丝分散开来。

盖上盖玻片（勿使产生气泡，且不要再移动盖玻片），先用低倍镜，必要时转换高倍镜镜检并记录观看结果 2.玻璃纸透析培育观看法 （1）玻璃纸的选择与处理 要选择能够允许养分物质透过的玻璃纸也可收集商品包装用的玻璃纸，加水煮沸，然后用冷水冲洗经此处理后的玻璃纸若变硬，必定是不行用的，只有那些软的可用将那些可用的玻璃纸剪成适当大小，用水浸湿后，夹于旧报纸中，然后一起放入平皿内121℃灭菌30min备用 （2）菌种的培育 按无菌操作法，倒平板，冷凝后用灭菌的镊子夹取无菌玻璃纸贴附于平板上，再用接种环沾取少许霉菌孢子，在玻璃纸上方轻轻抖落于纸上然后将平板置2830℃下培育35天，曲霉菌和青霉菌即可在玻璃纸上长出单个菌落（根霉菌的气生性强，形成的菌落铺满整个平板） （3）制片与观看 剪取玻璃纸透析法培育34天后长有菌丝和孢子的玻璃纸一小块，先放在50%乙醇中浸一下，洗掉脱落下来的孢子，并赶走菌体上的气泡，然后正面对上贴附于洁净载玻片上，滴加12滴乳酸石炭酸棉蓝液，当心地盖上盖玻片（留意不要产生气泡），且不要移动盖玻片，以免搞乱菌丝 标本片制好后，先用低倍镜观看，必要时再换高倍镜留意观看菌丝有无隔膜，有无假根、足细胞等特别形态的菌丝。

留意其无性繁殖器官的外形和构造，孢子着生的方式和孢子的形态、大小等 （五）试验作业： 给出根霉、青霉、曲霉的个体形态图，并注明各部位名称。