仔猪大肠杆菌基因工程疫苗.pdf

仔猪大肠杆菌病基因工程灭活疫苗 （K88ac-ST1-LTB ） 新生仔猪大肠杆菌病是由产肠毒素性大肠埃希氏菌(Enterotoxigenic E.coli，ETEC)引起的一种高度接触性、急性、致死性腹泻，特征是排黄色或黄白色稀粪临床上以 1～7 日龄新生仔猪下痢为主要特征，其中 1—3 日龄最多见个别耐过仔猪经较长时间才能正常生长，但病愈存活后其生长发育和生产性能指标受到严重影响 大肠杆菌性腹泻在我国广泛流行，新生仔猪大肠杆菌性腹泻的发病率和死亡率在不同地区各有差异，发病率为 5.69%～86.5%，死亡率为 17.0%～73.0% 本病是影响养猪业发展的主要疾病之一 产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)有两类致病因子：一类为黏附素（或称定居因子，起吸附固定作用，主要分为 K88、K99、987P、F41 等，其中以 K88为主另一类为肠毒素( 耐热性肠毒素 ST 和不耐热性肠毒素 LT)，是直接导致腹泻的因子细菌通过黏附素固定在肠黏膜表面，大量繁殖后产生 ST 与 LT两种肠毒素，引起剧烈腹泻，脱水、酸中毒、低血钾等 辽宁益康生物股份有限公司科研人员经过大量的流行病学调查，病原菌的分离鉴定，致病因子的研究，从细菌致病机理出发，成功地研发出免疫谱宽，免疫效果好，使用安全的仔猪大肠杆菌基因工程疫苗，从根本上解决了新生仔猪大肠杆菌性腹泻免疫预防这一难题，现将有关情况报告如下。

一、疫苗免疫机理 妊娠母猪临产前进行大肠杆菌基因工程灭活疫苗免疫接种， 产生三种抗体 （抗 ST1抗体、抗 LT抗体、抗 K88抗体） ，仔猪出生后吮食初乳，获得母源抗体产生被动免疫，从而抵抗大肠杆菌在肠道定居增殖，有效中和肠毒素，获得保护力 二、产品特点 1、具有良好的免疫原性 针对致泻因子耐热肠毒素（ST） 、不耐热肠毒素（LT）和主要黏附因子 K88，采用基因工程技术构建的 GE-3菌株，可以有效表达 K88ac-ST1-LTB融合蛋白，并辅以氢氧化铝胶佐剂，在保留了 K88ac 和 LTB良好免疫原性基础上，赋予了 ST1 免疫原性 2、构建菌株优良稳定 通过对菌株的安全性、有效性、菌种限定代次及保存条件、疫苗保存条件及保存期等试验，证实了该菌株是一株良好的疫苗候选株 3、该疫苗生产工艺科学、质量稳定 通过对菌株发酵培养的培养基、诱导剂及其诱导条件、通气量及菌液灭活等进行了筛选和优化，确定了工业化生产工艺，并通过安全性、效力检验等试验，批次间稳定 4、 本疫苗安全性可靠、无毒副作用 采用实验动物模型接种，田间与区域本动物接种等试验进行安全性评价，表明本疫苗无肠毒素活性、无致病性，妊娠母猪临床母猪全部存活，均无流产、死胎和胎儿畸形等现象，分娩正常，所产仔猪生长发育良好。

5、免疫效果确实 经仔猪免疫保护试验证实，灭活疫苗免疫初产怀孕母猪两次，新生仔猪吮食一天初乳后，用大肠杆菌强毒 C83902（K88ac+、ST+和 LT+）株攻击新生仔猪，均获得了较好的免疫保护：保护率为 90~97.4%，比未免疫组高 16.17% ，平均日增重提高 40g 三、安全试验、效力试验及推广应用效果情况 1、安全试验 （1）倍量接种安全试验 于不同猪场随机选取妊娠母猪 200 头，于临产前 15～20 天，颈部肌肉注射本疫苗，每头 10 mL ，分两侧注射所有免疫接种的妊娠母猪均无任何不良反应，也无流产、死胎和胎儿畸形等现象，妊娠母猪分娩正常，所产仔猪生长发育良好 （2）田间扩大安全试验 采用5个批次疫苗， 试验母猪分别于产前 30~35 日和15~20 日各颈部肌肉注射疫苗 5mL ，观察至分娩约 35 日观察期内，试验母猪的临床表现正常，没有出现精神沉郁、厌食或注射局部变化，体温正常 5 批疫苗使用的总体情况显示，疫苗免疫母猪所产仔猪健康，疫苗的使用对免疫猪的产仔率没有影响 5 批疫苗共免疫母猪 1299 头， 共产仔 13627 头， 疫苗免疫母猪平均产仔 10.5头左右；对照组共设置母猪 126 头，共产仔 1249 头，对照母猪平均产仔 9.9 头左右。

2、效力试验 （1）免疫攻毒 表 1 新生仔猪吮食初乳 4 h 后攻毒保护率对比 妊娠母猪每头免疫剂量 第一次 免疫时间 第二次 免疫时间 仔猪出生后吮食初乳 4h 后攻毒保护率 2.5 mL 产前 30～35 产前 15～20 d 83.9%（47/56 ） 5.0mL 95.8%（46/48 ） 表 2 不同哺乳时间仔猪攻毒保护率对比 （2）田间免疫效果试验 在辽 宁 瑞嘉 原 种猪 场 进行 的 田间 试 验结 果 ：试 验 组（ 免 疫K88ac-ST1-LTB 三价灭活疫苗） 比对对照组 （未免疫） 保护率高 38.22%， 仔猪成活率高 16.17%，平均日增重高 0.08 Kg 表现出了明显的优势 （3）区域免疫效果试验 于辽宁、河北、山东、黑龙江、吉林等地猪场随机选取妊娠母猪 650 头，于产前 30～35 d 和 15～20 d ，经颈部肌肉注射各免疫 1 次，每头 5 mL免疫母猪共产仔猪 7156 头，发生新生仔猪大肠杆菌性腹泻 126 头，发病率为 1.76%，死亡 21 头，死亡率为 0.29%，对照组发病率为 40.29%(139/345) 、死亡率为 20.58%(71/345) ，两组的发病率和死亡率均呈极显着差异(P<0.01) 3、推广应用情况 疫苗 批号 吃乳时间（日） 组别 攻毒数量（头） 存活数量（头） 保护率/ 存活率（%） 200902 1 试验组 20 17 85 对照组 10 0 0 7 试验组 20 19 95 对照组 10 1 10 14 试验组 20 19 95 对照组 10 2 20 28 试验组 20 20 100 对照组 10 2 20 时间才能正常生长但病愈存活后其生长发育和生产性能指标受到严重影响大肠杆菌性腹泻在我国广泛流行新生仔猪大肠毒素性大肠杆菌有两类致病因子一类为附素或称定居因子起吸附固定作用主要分为等其中以为主另一类为肠毒素耐引起剧烈腹泻脱水酸中毒低血钾等辽宁益康生物股份有限公司科研人员经过大量的流行病学调查病原菌的分离鉴定致依据农业部批准《中华人民共和国农业部兽用生物制品临床试验批件，201002 号》 ，于2010 年 02～11 月在辽宁省黑山县、辽阳市、海城市、建平县、营口市 5 个猪场进行了区域性临床试验，试验情况如下。

（1）5 个猪场的试验仔猪与对照仔猪的发病数据显示，试验组共产仔猪 13627 头，发生黄白痢腹泻试验仔猪的数量为 667 头，试验仔猪发生黄白痢腹泻的数量占试验组仔猪总数量的 4.89%（667/13627 ） ；对照组共产仔猪 1249 头，对照仔猪发生黄白痢腹泻的数量为 127头，发生黄白痢腹泻对照仔猪的数量占对照组仔猪总数的 10.17%（127/1249 ） ，试验仔猪的发病率较对照仔猪的发病率低了 5.28 个百分点 （2）5 个猪场对发生黄白痢腹泻的仔猪进行投药治疗后，试验组 667 头仔猪发生黄白痢腹泻死亡 86 头，占发生黄白痢仔猪数量的 12.89%（86/667 ） ；对照组仔猪 127 头发生黄白痢腹泻死亡 23 头，占发生黄白痢仔猪数量的 18.11%（23/127 ） 试验组仔猪黄白痢的发生率降低的同时， 伴随着抗生素的治疗后， 试验仔猪较对照仔猪的黄白痢死亡率低了 5.22 个百分点 （3）5 个试验猪场的母猪全部分娩正常，新生仔猪全部健活5 个试验猪场新生试验仔猪 13627 头，其中包括各种死因在内共死亡 919 头，试验组仔猪断奶存活 12708 头，断奶存活率为 93.26%（12708/13627 ） ，5 个对照猪场新生对照仔猪 1249 头，其中包括各种死因在内共死亡 99 头，对照仔猪断奶存活 1150 头，断奶存活率为 92.07%（1150/1249 ） 。

断奶后仔猪存活率较对照仔猪的存活率高出 1.19 个百分点 四、效益分析 产仔 数/ 胎 发病率 （% ） 发病数 治疗费用/头 治疗 费用 病死 率 （% ） 病死数 仔猪 成本 病死 损失 合计 减少损失 对照 10 10.17 1.02 6.00 6.10 18.11 0.18 230 42.36 48.46 31.03 免疫 10 4.89 0.49 6.00 2.93 12.89 0.06 230 14.50 17.43 说明： 根据临床试验数据统计分析，假设一头母猪按单胎产仔 10 头，仔猪成本 230 元/ 头，跟胎免疫后新生大肠杆菌性腹泻发病率由 10.17%降到 4.89%，药物治疗后大肠杆菌腹泻病死率由 18.11%降到 12.89%，治疗费用节省支出 3.17 元，治疗后因病致死减少 0.12 头，降低损失27.86 元按现市场成本计算，每头母猪免疫疫苗后间接产生经济效益累计31.03 元 五、疫苗使用说明 1、主要成分与物理性状 含灭活的基因工程菌株 GE-3 ， 灭活前至少 1010CFU/ml 静置后， 上层为淡黄色澄明液体，下层为灰白色沉淀，振摇后呈均匀混悬液。

2、作用与用途 用于预防新生仔猪大肠杆菌性腹泻 3、用法与用量 未经本疫苗免疫过的妊娠母猪分别于产前 30～35 日和 15～20 日各肌肉注射 1 次， 每头 5 ml以后产前 15~20 日免疫 1 次，每头 5 ml 时间才能正常生长但病愈存活后其生长发育和生产性能指标受到严重影响大肠杆菌性腹泻在我国广泛流行新生仔猪大肠毒素性大肠杆菌有两类致病因子一类为附素或称定居因子起吸附固定作用主要分为等其中以为主另一类为肠毒素耐引起剧烈腹泻脱水酸中毒低血钾等辽宁益康生物股份有限公司科研人员经过大量的流行病学调查病原菌的分离鉴定致。