实验六__糖的呈色反应.ppt

实验六 糖的呈色反应及 还原糖的检测,目的要求,学习鉴定糖类及区分酮糖和醛糖的方法 了解鉴定还原糖的方法及其原理,糖的概念：含多羟基(2个或以上)的醛(aldehyde)或酮(Ketone)化合物，以及在水解后能形成以上两者之一的有机化合物 由于糖由碳、氢、氧元素构成，在化学式的表现上类似于“碳”与“水”聚合Cn(H2O)n ，故又称之为碳水化合物按糖基数量分为单糖、双糖、寡糖、多糖 单糖按功能团分为醛糖和酮糖 单糖按碳原子个数分为丁糖、戊糖、己糖戊糖和己糖分布最广 常见的戊糖：核糖、木糖、阿拉伯糖（戊醛糖）核酮糖、木酮糖（戊酮糖） 常见的己糖：葡萄糖、半乳糖、甘露糖（己醛糖）果糖（己酮糖）,还原糖：羰基碳（异头碳）没有参与形成糖苷键，能够还原斐林(H.von Fehling)试剂或托伦斯(B.Tollens)试剂(银氨溶液)的糖称为还原糖 所有的单糖，不论醛糖、酮糖都是还原糖大部分双糖也是还原糖，如麦芽糖、乳糖单糖、双糖或寡糖在与苷元生成糖苷后，即成为非还原糖，蔗糖是非还原糖 多糖的还原链末端反应性极差，因此淀粉、纤维素也是非还原糖本实验的试剂： 阿拉伯糖（戊醛糖）； 葡萄糖（己醛糖）； 果糖（己酮糖）； 麦芽糖（由2个葡萄糖以α-1,4糖苷键连接的还原性双糖）； 蔗糖（ 1分子葡萄糖与1分子果糖β糖苷键连接的非还原性双糖）； 淀粉（非还原性多糖）,一、糖的呈色反应,1. Molish反应--α-萘酚反应 2. 蒽酮反应 3. 酮糖的Seliwanoff反应 4. Bial反应（甲基间苯二酚反应）,实验原理: 糖经浓无机酸处理脱水产生糠醛或糠醛衍生物。

戊糖形成糠醛，己糖则形成羟甲基糠醛 这些糠醛衍生物在浓无机酸作用下，能与酚类化合物缩合生成有色物质1. Molish反应—α-萘酚反应,糖在浓硫酸或浓盐酸的作用下脱水形成糠醛及其衍生物,与α-萘酚作用形成紫红色复合物，在糖液和浓硫酸的液面间形成紫环，因此又称紫环反应糠醛,紫红色复合物,单糖、双糖、多糖一般都发生此反应 但氨基糖不发生此反应 丙酮、甲酸、乳酸、草酸、葡萄糖醛酸、各种醛糖衍生物、甘油醛等均产生近似的颜色反应 因此，阴性反应证明没有糖类物质的存在；而阳性反应，则说明有糖存在的可能性，需要进一步通过其他糖的定性试验才能确定有糖的存在 Molish反应非常灵敏，0.001％葡萄糖和0.0001％蔗糖即能呈现阳性反应因此，不可在样品中混入纸屑等杂物当果糖浓度过高时，由于浓硫酸对它的焦化作用，将呈现红色及褐色而不呈紫色，需稀释后再做Molish反应,2.蒽酮反应,实验原理:糖经浓酸作用后生成的糠醛及其衍生物与蒽酮（9，10-二氢-9氧蒽 ）作用生成蓝绿色复合物该复合物在630nm有最大的吸收峰，并且在一定范围内，颜色与糖量的多少成正比 该方法可以用于测定几乎所有碳水化合物的含量，包括戊糖、己糖，多糖等。

不同的糖类与蒽酮试剂反应后的颜色深度不同 果糖呈明显色的蓝绿色，葡萄糖次之，半乳糖和甘露糖较浅，五碳糖更浅蒽 酮 反 应,3.酮糖的Seliwanoff反应,实验原理:酮糖在酸的作用下较醛糖更易生成羟甲基糠醛后者与间苯二酚作用生成鲜红色复合物 醛糖在浓度较高时或长时间煮沸，才产生微弱的阳性反应 该反应是鉴定酮糖的特殊反应果糖与Seliwanoff试剂反应较快，呈鲜红色； 葡萄糖反应所需时间较长，且只能产生红黄色至淡黄色； 戊糖亦与Seliwanoff试剂反应，戊糖经酸脱水生成糠醛，与间苯二酚缩合，生成灰绿色产物，但需要较长时间的煮沸 蔗糖水解产生的果糖也能产生明显的鲜红色反应Seliwanoff反应,4. Bial反应,戊糖与浓盐酸加热形成糠醛，在有Fe 3+存在下，它与甲基间苯二酚（地衣酚）反应，形成蓝绿色溶液 己糖及双糖多糖也能发生反应，但产生灰色、灰绿色沉淀Bial反应,二、还原糖的检验,1. Fehling试验 2. Benedict试验 3. Barfoed试验,1.Fehling试验,实验原理: 费林试剂是含有硫酸铜和酒石酸钾钠的氢氧化钠溶液硫酸铜与碱溶液混合加热，则生成黑色的氧化铜沉淀。

若同时有还原糖存在，则产生黄色或砖红色的氧化亚铜沉淀由于沉淀的速度不同，而形成的颗粒大小也不同，颗粒大的为红色，颗粒小的为黄色氧化铜被还原为氧化亚铜为防止铜离子和碱反应生成氢氧化铜或碱性碳酸铜沉淀，Fehling试剂中加入酒石酸钾钠，它与Cu2＋形成的酒石酸钾钠络合铜离子是可溶性的络离子，该反应是可逆的平衡后溶液内保持一定浓度的氢氧化铜 费林试剂是一种弱的氧化剂，它不与酮和芳香醛发生反应将一定量的甲液和乙液等体积混合时，硫酸铜与氢氧化钠反应，生成氢氧化铜沉淀： 2NaOH + CuSO4 = Cu(OH)2+ Na2SO4,Fehling试验反应过程,在碱性溶液中，所生成的氢氧化铜沉淀与酒石酸钠反应，生成可溶性的络合物酒石酸钾钠铜：,,,在加热条件下，样品中的还原糖与酒石酸钾钠铜反应，酒石酸钾钠铜被还原糖还原，产生红色氧化亚铜沉淀，其反应如下：,糖酸,Fehling试验,2. Benedict试验 （本尼迪特试验）,实验原理： Benedict试剂是Fehling试剂的改良Benedict试剂利用柠檬酸作为Cu2+的络合剂，其碱性较Fehling试剂弱，灵敏度高，干扰因素少。

Benedict试验,3.Barfoed试验 （巴弗德氏试剂 ）,实验原理： 在酸性溶液中，单糖和还原二糖的还原速度有明显差异 单糖在Barfoed试剂的作用下能将Cu2+还原成砖红色的氧化亚铜，时间约为3分钟； 还原二糖若将Cu2+还原，则需20分钟左右 该反应可用于区别单糖和还原二糖当加热时间过长，非还原性二糖经水解后也能呈现阳性反应Barfoed反应,结果要求： 准确记录各个反应的呈色情况，并加以解释下次实验： DEAE-cellulose薄层层析分离鉴定核苷酸,。