实验二影响酶促反应的因素课件.ppt

实验二实验二温度、温度、pHpH值、激活值、激活剂和抑制剂和抑制剂对酶活剂对酶活性的影响性的影响及特异性及特异性实验二温度、pH值、激活剂和抑制剂对酶活性的影响及特异性一、实验目的一、实验目的Ø1 1．通过实验，观察温度、．通过实验，观察温度、pHpH值、激活剂与值、激活剂与抑制剂对酶促反应速度的影响抑制剂对酶促反应速度的影响Ø2 2．能运用所学的生化知识对实验结果进行．能运用所学的生化知识对实验结果进行正确的分析正确的分析一、实验目的1．通过实验，观察温度、pH值、激活剂与抑制剂对二、实验原理二、实验原理•利用淀粉及其水解产物的颜色反应，来比较唾液淀粉酶在利用淀粉及其水解产物的颜色反应，来比较唾液淀粉酶在不同条件下催化淀粉水解的程度，从而判断温度、不同条件下催化淀粉水解的程度，从而判断温度、pHpH、激、激动剂和抑制剂对酶的活性影响动剂和抑制剂对酶的活性影响淀粉淀粉糊精糊精麦芽糖和葡萄糖麦芽糖和葡萄糖蓝色蓝色碘碘紫色紫色→红色红色→无色无色无色无色碘碘碘碘＋＋＋＋＋＋↓↓↓二、实验原理利用淀粉及其水解产物的颜色反应，来比较唾液淀粉酶二、实验原理二、实验原理 u在低温时，酶活性降低，酶促反应速度较慢，甚在低温时，酶活性降低，酶促反应速度较慢，甚至停止；随着温度升高，酶的活性恢复，反应速至停止；随着温度升高，酶的活性恢复，反应速度加快；当达到最适温度时，酶的活性最大，酶度加快；当达到最适温度时，酶的活性最大，酶促反应速度达到最大。

人体内大多数的酶的最适促反应速度达到最大人体内大多数的酶的最适温度在温度在37℃37℃左右温度过高，酶变性失活，酶促左右温度过高，酶变性失活，酶促反应速度下降，甚至停止反应速度下降，甚至停止u每种酶都有最适的每种酶都有最适的pHpH值，在最适值，在最适pHpH值时，酶的活值时，酶的活性最大，酶促反应速度最快；偏离酶的最适性最大，酶促反应速度最快；偏离酶的最适pHpH均均可引起酶蛋白变性而降低或失去活性唾液淀粉可引起酶蛋白变性而降低或失去活性唾液淀粉酶的最适酶的最适pHpH值为值为6.86.8u氯离子对唾液淀粉酶有激活作用；铜离子对唾液氯离子对唾液淀粉酶有激活作用；铜离子对唾液淀粉酶有抑制作用淀粉酶有抑制作用二、实验原理 在低温时，酶活性降低，酶促反应速度较慢，甚至三、实验材料三、实验材料u1.1%1.1%淀粉溶液淀粉溶液 取可溶性淀粉取可溶性淀粉1g, 1g, 加加5ml5ml蒸馏水蒸馏水, , 调成糊状调成糊状, , 再加再加80ml80ml蒸馏水蒸馏水, , 加热并不断搅拌加热并不断搅拌, , 使其充分溶解使其充分溶解, , 放冷放冷, , 最后用蒸馏水稀释至最后用蒸馏水稀释至100ml100ml。

u2.pH3.02.pH3.0缓冲液缓冲液 取取0.2mmol/LNa2HPO40.2mmol/LNa2HPO4溶液溶液205ml205ml，，0.1mol/L0.1mol/L柠檬酸溶液柠檬酸溶液795ml, 795ml, 混合即成混合即成. .u3.pH6.83.pH6.8缓冲液缓冲液 取取0.2mmol/LNa2HPO40.2mmol/LNa2HPO4溶液溶液772ml772ml，，0.1mol/L0.1mol/L柠檬酸溶液柠檬酸溶液228ml, 228ml, 混合即成混合即成. .u4.pH8.04.pH8.0缓冲液缓冲液 取取0.2mmol/LNa2HPO40.2mmol/LNa2HPO4溶液溶液972ml972ml，，0.1mol/L0.1mol/L柠檬酸溶液柠檬酸溶液28ml28ml混合即成混合即成. .三、实验材料1.1%淀粉溶液 取可溶性淀粉1g, 加5mØ5.0.9%NaCl溶液溶液 Ø6.1% CuSO4溶液溶液Ø7.碘液碘液 9.试管架试管架 Ø11.试管夹试管夹 Ø12.滴管滴管 Ø13.白瓷板白瓷板 Ø14.恒温水浴箱恒温水浴箱 Ø15.电炉电炉 Ø16.烧杯烧杯5.0.9%NaCl溶液 【【注意事项注意事项】】1.注意实验器材的干净，避免杂质影响反应注意实验器材的干净，避免杂质影响反应结果结果2.各管反应时间应严格控制，保证一致。

各管反应时间应严格控制，保证一致注意事项】四、实验方法四、实验方法•稀释唾液制备稀释唾液制备 用水漱口，含蒸馏水咀嚼用水漱口，含蒸馏水咀嚼2 2分钟分钟后，把唾液吐进烧杯中备用后，把唾液吐进烧杯中备用注：唾液淀粉酶（注：唾液淀粉酶活性具有个体差异，按下述各实验方法进行实验，活性具有个体差异，按下述各实验方法进行实验，有部分同学可能失败，可重新操作，但在重做过有部分同学可能失败，可重新操作，但在重做过程中，要根据第一次实验结果改变稀释唾液的用程中，要根据第一次实验结果改变稀释唾液的用量，反应太慢，则增加稀释唾液用量，如果反应量，反应太慢，则增加稀释唾液用量，如果反应太快，则减少稀释唾液的用量）太快，则减少稀释唾液的用量）•煮沸唾液的制备煮沸唾液的制备 取上述唾液约取上述唾液约5ml5ml，放入沸水中，放入沸水中煮沸煮沸5 5分钟，取出备用分钟，取出备用四、实验方法稀释唾液制备 用水漱口，含蒸馏水咀嚼2分钟后（一）温度对酶促反应速度的影响（一）温度对酶促反应速度的影响管管 号号 123缓冲液（冲液（pH6.8））20滴滴20滴滴20滴滴1%淀粉溶液淀粉溶液10滴滴10滴滴10滴滴把三支管溶液把三支管溶液摇匀，然后分匀，然后分别放至相放至相应的温度中水浴的温度中水浴预温温预温温度温温度 0℃ 37℃ 37℃预温温5分分钟后取出，后取出，继续向各管加入相向各管加入相应唾液唾液稀稀释唾液唾液10滴滴10滴滴 —煮沸唾液煮沸唾液——10滴滴把三支管把三支管摇匀，然后分匀，然后分别放至相放至相应的温度中水浴的温度中水浴10分分钟，加碘，加碘2滴滴水浴温度水浴温度 0℃37℃37℃结果与分析结果与分析（一）温度对酶促反应速度的影响管 号 •取白瓷板一块，向各凹分别加取白瓷板一块，向各凹分别加1 1滴碘液，每滴碘液，每隔半分钟用滴管或玻棒从隔半分钟用滴管或玻棒从2 2号管取溶液号管取溶液1 1滴，滴，加到已加有碘液的小凹中，观察颜色变化，加到已加有碘液的小凹中，观察颜色变化，直至与碘不呈色时（即只显棕黄色时），直至与碘不呈色时（即只显棕黄色时），向各管加碘液向各管加碘液1 1滴，摇匀观察颜色变化滴，摇匀观察颜色变化( (切切记勿摇动记勿摇动) )。

摇匀再观察摇匀再观察取白瓷板一块，向各凹分别加1滴碘液，每隔半分钟用滴管或玻棒从（二）（二）pH对酶促反应速度的影响对酶促反应速度的影响管号管号1231%淀粉溶液淀粉溶液10滴滴10滴滴10滴滴pH5.0缓冲液冲液10滴滴——pH6.8缓冲液冲液10滴滴—pH8.0缓冲液冲液——10滴滴稀稀释唾液唾液5滴滴5滴滴5滴滴把三支管把三支管摇匀，然后放至匀，然后放至 37℃水浴水浴10分分钟，加碘，加碘2滴滴摇匀匀结果与分析结果与分析（二）pH对酶促反应速度的影响管号1231%淀粉溶液10滴1•将各管混匀，放进将各管混匀，放进37℃37℃水浴箱水浴箱中保温•取白瓷板一块，向各凹分别加取白瓷板一块，向各凹分别加1 1滴碘液，每隔半分钟用滴管滴碘液，每隔半分钟用滴管或玻棒从或玻棒从2 2号管取溶液号管取溶液1 1滴，加滴，加到已加有碘液的小凹中，观察到已加有碘液的小凹中，观察颜色变化，直至与碘不呈色时颜色变化，直至与碘不呈色时（即只显棕黄色时），向各管（即只显棕黄色时），向各管加碘液加碘液1 1滴，摇匀观察颜色变滴，摇匀观察颜色变化将各管混匀，放进37℃水浴箱中保温（三）激活剂与抑制剂对酶促反应速度的影响（三）激活剂与抑制剂对酶促反应速度的影响管号管号12341%淀粉溶液淀粉溶液10滴滴10滴滴10滴滴10滴滴pH6.8缓冲液冲液10滴滴10滴滴10滴滴10滴滴蒸蒸馏水水2滴滴———氯化化钠溶液溶液—2滴滴——CuSO4溶液溶液——2滴滴—Na2SO4溶液溶液———2滴滴稀稀释唾液唾液5滴滴5滴滴5滴滴5滴滴把三支管把三支管摇匀，然后放至匀，然后放至 37℃水浴水浴10分分钟，加碘，加碘2滴滴摇匀匀结果与分析结果与分析（三）激活剂与抑制剂对酶促反应速度的影响管号12341%淀粉•将各管摇匀，放进将各管摇匀，放进37℃37℃水水浴箱中保温。

取白瓷板一浴箱中保温取白瓷板一块，向各凹分别加块，向各凹分别加1 1滴碘滴碘液，每隔半分钟用滴管或液，每隔半分钟用滴管或玻棒从玻棒从2 2号管取溶液号管取溶液1 1滴，滴，加到已加有碘液的小凹中，加到已加有碘液的小凹中，观察颜色变化，直至与碘观察颜色变化，直至与碘不呈色时（即只显棕黄色不呈色时（即只显棕黄色时），向各管加碘液时），向各管加碘液1 1滴，滴，摇匀，观察各管颜色变化摇匀，观察各管颜色变化 激活剂与抑制剂激活剂与抑制剂将各管摇匀，放进37℃水浴箱中保温取白瓷板一块，向各凹分别激活剂与抑制剂激活剂与抑制剂五、思考题五、思考题1. 什么是酶的最适温度？什么是酶的最适温度？2. 什么是酶的最适什么是酶的最适pH?3. 激活剂与抑制剂对酶活性影激活剂与抑制剂对酶活性影 响实验中设置第四管的作用响实验中设置第四管的作用 是什么？是什么？4. 什么是酶的特异性？什么是酶的特异性？激活剂与抑制剂五、思考题（四）（四） 酶的专一性对酶促反应的影响酶的专一性对酶促反应的影响加入物加入物1号管号管2号管号管3号管号管PH值值6.8缓冲液缓冲液20滴滴20滴滴20滴滴1%的淀粉的淀粉10滴滴10滴滴——1%的蔗糖的蔗糖————10滴滴煮沸唾液煮沸唾液——5滴滴—— 稀释唾液稀释唾液5滴滴——5滴滴结果与分析结果与分析（（2）混匀，）混匀，37 ℃℃水浴水浴10min，分别加入班氏试剂，分别加入班氏试剂20滴。

滴3）各管摇匀置于沸水煮沸）各管摇匀置于沸水煮沸8-10min，观察结果并记录观察结果并记录四） 酶的专一性对酶促反应的影响加入物1号管2号管3号管酶的专一性酶的专一性酶的专一性。