肺炎新生儿血清二肽基肽酶水平检测及免疫评价价值探析.doc

肺炎新生儿血清二肽基肽酶水平检测及免疫评价价值探析作者：李征，卢宪梅，刘燕，邓景惕，李文【摘要】目的检测肺炎新生儿血清二肽基肽酶(DPP IV/CD26)水平并探讨其在免疫评价中的价值，以寻找灵敏 可靠的新生儿免疫评价指标方法免疫比色法检测肺炎组 (64例)和对照组(30例)血清DPP IV/CD26水平，并测 定两组的T细胞亚群(CD3+T%,CD4+T%,CD8+T%)和免疫球蛋 白(IgG)水平结果 肺炎组血清DPP IV/CD26水平显著低于 对照组(PV0.01),且与CD3+T%,CD4+T%及日龄呈正相关 结论 血清 DPP IV/CD26 较 T 细胞亚群 (CD3+T%,CD4+T%,CD8+T%)和IgG更为敏感,可作为新生儿 免疫评价指标关键词】婴儿，新生；肺炎；二肽基肽酶；T细胞亚群; 免疫球蛋白；免疫[Abstract] Objective To investigate the level and influential factors of dipeptidyl peptidase IV/CD26 (DPP IV/CD26) in serum of neonates with pneumonia in order to offer a sensitive index evaluating the immune function of nenates・Methods Colorimetric method was employed to detect DPP IV/CD26 in the pneumonia group (64 cases) and control group (30 cases)・T cell subset (CD3+T,CD4+T,CD8+T ) and immunoglobulin(IgG) were also detected. Results The level of DPP IV/CD26 in the pneumonia group was signifiesntly lower than the control group (P<0. 01 )emd shew a positive correlation with CD3,CD4 and age. Conclusion DPP IV/CD26 is much more sensitive than T cell subset (CD3+T,CD4+T,CD8+T) and immunoglobulin(IgG) and can be used to evaluate the immune level of neonates・[Key words] infant,newborn；pneumonia；dipeptidyl peptidase IV/CD26；T cell subset；immunoglobulin；immune 长期以来，人们总是将T细胞亚群 (CD3+T%, CD4+T%, CD8+T%)和免疫球蛋白(IgG, IgM, IgA)作 为免疫评价指标，新生儿也不例外。

然而，新生儿免疫系统 发育不完善，虽然T细胞绝对计数已达成人水平，功能方面 却明显不足；同时，免疫球蛋白中绝大部分来源于母亲，自 身合成的各类免疫球蛋白量都很少，甚至难以测出[1, 2] 因此，单纯检测T细胞数量和Ig含量评价新生儿免疫水平 特异性不高二肽基肽酶(dipeptidyl peptidase IV/CD26, DPP IV/CD26)是llOkD的II型细胞膜糖蛋白，因在跨膜信号传导及T、B细胞活化过程中的重要作用而被认为 是T、B细胞的活化标志许多与免疫调节有关的免疫调节 激素、细胞因子，如P物质、神经肽Y、糖脂蛋白-1 (glycolipoprotein-1, GLPT)、调节活化正常T细胞表达 与分 泌的趋化因子 (regula ted on activa tion normal T-cell expressed and secrected, RANTES)等也被证实是 DPP IV/CD26的水解底物，其免疫功能越来越受到人们的重 视［3~6］本文主要检测肺炎新生儿的血清DPP IV/CD26水平，探 讨其与其他临床指标的关系，以期能为临床新生儿免疫水平 的评价提供可靠指标。

1资料与方法1. 1 一般资料取我科新生儿病房64例感染性肺炎患儿 为肺炎组，纳入标准：具有呛奶、气促、口吐泡沫、口周及 鼻根部发青、肺部呼吸音粗等症状和体征，经胸部摄正位X 线片证实肺炎存在；排除肝胆疾病、糖尿病、吸入性肺炎、 免疫性疾病及其他感染性疾病取我院产科30例正常足月 分娩新生儿为对照组，以上两组性别、日龄、胎龄及体重均 无显著差异，具有可比性表1肺炎组与对照组的临床资料 对比注：*为肺炎组与对照组性别组成的x2检验值1.2标本采集 两组新生儿均于股静脉采血，并分作3份 第一份3 000 r/min离心5 min后取血清保存于-80 °C冰箱内，用于DPP IV/CD26的检测，另外两份分别于8 h内用于 检测T细胞亚群和血免疫球蛋白1.3试验方法 血清DPP IV/CD26的检测：取5 ul待测血清，与 71 mM Gly/NaOH (pH 8.3). 0.5 mg/ml 的显色底 物 Gly-Pro-p-硝基苯胺(Sigma, St. Louis, USA)配成 100 u 1 混合液，加入微孔板每个标本均做复孔37 °C培养1 h后，于酶标仪(Labsystems,Finland ) 405 nm波长下读数 umol底物的酶量作为酶的活性单位(U)。

T细胞亚群采用 流式细胞仪(Becton Dichinson FACS Vantage, USA)测定 血免疫球蛋白采用美国Beckman公司Array360特种蛋白仪 进行分析通过P-硝基苯胺水平计算酶活性,以每分钟水解11.4统计学方法所有数据以(x土s)的形式表示，应用SPSS 13.0软件进行统计分析，两组的各指标比较采用x2 检验进行分析，DPP IV/CD26与各指标之间采用双变量相关分析，P<0. 05为差异有统计学意义2结果2. 1肺炎组与对照组血清DPP IV/CD26、T细胞亚群及免 疫球蛋白的比较 见表2O肺炎组与对照组的血清DPP IV/CD26、CD3+T%、CD4+T%均有显著差异，但血清 DPP IV/CD26 水平差异明显高于后两者(t=2. 757,P<0.01； t二-2.167,P <0. 05； t二—2・019,PV0・05)；两组 CD8+T%、IgG 水平差异 无统计学意义(t=1.288,P>0. 05； t=0. 882,P>0. 05)o 由 于体内含量过低，IgM和IgA缺失值过多，未统计表2肺 炎组与对照组血清DPP IV/CD26、T细胞亚群及Ig水平比较 注：与对照组比较,*P<；0. 05, **P<；0. 012.2 DPP IV/CD26与其他指标的相关性分析 见表3。

经 双变量相关分析，血清DPP IV/CD26水平与日龄显著正相关(r=0. 604, PV0. 01),与 CD3+T%、CD4+T%成正相关(r=0. 701, P<0. 05； r=0. 631, P<0. 05),与 CD8、IgG.性别、体重不 具有相关性表3血清DPP IV/CD26与各指标的相关性分 析2.3 DPP IV/CD26及其他指标与日龄的相关性比较 见 表4血清DPP IV/CD26水平与日龄显著正相关，而CD3+T%、 CD4+T%、CD8+T%、IgG与日龄无明显相关性表4血清DPP IV/CD26及其他指标与日龄的相关性比较3讨论1984年Schon在人外周血淋巴细胞表面发现DPP IV/CD26,首次揭示了 DPP IV/CD26的免疫功能［7］研究 发现，DPP IV/CD26可作为协同刺激分子传递跨膜信号，并 进一步促使T细胞活化由于DPP IV/CD26胞质尾区只有6 个氨基酸序列，活化信号的传递需要TCR/CD3. CD2等信号 分子的协助才能完成［3, 8］o有关DPP IV/CD26活化T细胞的具体机制还不明确，现普遍认为酪氨酸磷酸酶/CD45、腺昔脱氨酶(adenosine deaminase,ADA)等酶类可能在其中发挥重要作用［3, 9］,而DPP IV7CD26的酶活性并不参 与T细胞活化过程［4］o有学者认为［8，10］, DPP IV/CD26可激活 CD45 的磷酸酶活性，促进c-Cbl,ZAP70,Erk1/2,p56Lck,TCR/CD32链等T细胞活化信号的酪氨酸活化基序(tyrosinebasedactivation motif，I TAM)磷酸化，提高细胞内52+浓度,扩大体内的免疫反应信号，促进T细胞活化。

DPP IV/CD26-ADA复合物的形成则可促进胸腺细胞的成熟和分化并延缓T细胞的凋亡Ruiz等 在试验中发现DPP IV/CD26的活性随胸腺细胞的成熟而逐渐升高，于CD4+ T/CD8+ T单阳性细胞达最高，并在CD4+ T细 胞优先表达［8, 11, 12］,证实了 DPP IV/CD26在T细胞发 育过程中的重要作用Fan等［4］通过DPP IV/CD26基因敲 除小鼠证实DPP IV/CD26缺陷可导致CD4+ T细胞的发育和 成熟障碍，同时还可降低IgG、鹿E的浓度，但IgM的浓度 没有明显变化，说明DPP IV/CD26也参与B细胞活化过程大量研究已证实［13］,肺炎新生儿免疫水平明显受抑，T细胞亚群以CD3+T、CD4+T降低最为明显，而IgG含量变化 不大本研究发现肺炎组DPP IV/CD26水平的下降较CD3+T、 CD4+T更为显著，且经相关性分析，DPP IV/CD26与CD3+T%、 CD4+T%变化趋势一致，说明DPP IV/CD26可更灵敏、有效地 反映新生儿免疫功能同时由于DPP IV/CD26与日龄具有更 显著的相关性，使其较CD3+ T%、CD4+T%更能适应新生儿免 疫功能动态变化的特点［14, 15］。

另外，本研究发现，DPP IV/CD26不受性别、体重的影响，这与Christine Durinx等［5］的报道基本一致，他们的研究发现性别、体重、血压、 妊娠次数、激素治疗等对DPP IV/CD26均无明显影响考虑 本实验中DPP IV/CD26与IgG不具有相关性的原因，与新生 儿体内IgG含量低且绝大多数为通过胎盘由母体获得有关本文肺炎新生儿血清DPP IV/CD26的检测结果显示DPP IV/CD26可灵敏反映不同周龄新生儿的免疫功能，尤其是活 化T细胞水平，而不仅仅反映T细胞数量的多少，同时也可 反映活化B细胞的水平，弥补依靠检测Ig含量反映B细胞 功能的不足，且不受性别、体重等因素的影响，这与新生儿 免疫功能不成熟、变化快的特点相适应因此，血清DPP IV/CD26对评价新生儿的免疫水平具有重要的临床意义参考文献】1金汉珍，黄德琨，官希吉.实用新生儿学，第3版.北 京：人民卫生出版社，2002, 917-919.2陈同辛，何振娟，吴圣楣，等.CD抗体诱导的新生儿脐 带血淋巴细胞信号传导的研究.中华微生物学和免疫学杂 志,2003, 30(1)： 17-21.3 Simeoni L,Rufini A,Moretti T, et al. Human CD26 expression in transgenic mice affects murine T-Cell populations and modifies their sub。