WHO人类精液检查与处理实验手册.ppt

WHO人类精液检查与处理实验手册（第五版）修订要点及临床应用背景o1980年出版第一版“人类精液及精子—宫颈 精液实验实检验手册”（生育调节）o1987年出版第二版（生育调节、不育症的 诊治）o1992年出版第三版（生育调节、不育症的 诊治、环境污染）o1999年出版第四版（男用避孕病、辅助生 育技术-ICSI、环境污染）背景以往精液分析存在问题：o检测方法不一o结果带有主观性、不客观、不真实o精确度低、重复性差o对男性生育力的评估、临床诊断应用价值很 有限因此，需要一个标准化的手册2010年出版第五版o随着近年来男科学和生殖医学的快速发展， 基于询证医学的证据，不少原有的概念和诊 疗建议需要修订；o为此，WHO组织成立了专门的委员会来负 责这项工作，编写制订了新一版的手册，以 期达到更好的标准化，提高精液分析的质量 修改WHO人类精液检查手册的目的o提高精液分析各参数的准确性o简化方法，提高可操作性o提供质控结果不良时的应对提示及细节o利于实验室间的标准化o提高精液分析各参数的临床应用价值（结果 判断评述）o提高疗效评估的准确性第5版《手册》提纲一、精液分析o标准程序：常规分析、抗体包被精子、非精 子成分；o可供选择的试验：精子多发性缺陷指数、白 细胞免疫细胞化学染色、精子宫颈粘液相互 作用、精桨生化、CASA；o研究试验：活性氧、顶体反应、精子卵细胞 相互作用作用、精子透明带结合、去透明带 仓鼠卵穿透试验、精子染色质检测等。

精液分析”部分的修订主要涉及：o精子浓度和精子总数的测定；o精子活动力分级；o精子形态学评估；o精液参考值范围精子浓度和精子总数的测定o简化精液稀释方法及增加计数池的面积，每 份标本均采用两次取样、两次稀释和两次计 数，每次计数至少200个精子，且两次计数 在95%可信区间内o一次射精中的精子总数能够提供反映睾丸功 能的更为精确的信息，因此，新版手册强调 必须精确地测定精液体积精液采集和体积测定o根据重量间接计算精液体积，假定精液比重 为1g/ml（实际为1.014g/ml)来计算 首选方法） 1.秤取容器的重量， 2.秤取装有精液的容器的重量， 3.计算重量之差（g=ml)精子浓度和精子总数的测定o推荐使用改良Neubauer血细胞计数板；o制备两份分别稀释的样本；o不将同一份稀释样本加入到两个计数池中；o不要两次计数同一个数池精子数低的样本：不必精确测定时o粗略估计如果90度）、主段宽度不规则 、主段卷曲以及上述缺陷的任何组合精子胞浆小滴判断标准 胞浆小滴体积大于精子头部的1/3胞浆小滴体积大于精子头部的1/3WHO第四版与第五版精子形态学评估标准比较研究o研究目的：比较WHO第四版与第五版精子形态学评估标准的变化。

o研究对象： 1000个精子图片，一张精子形态质控版o研究方法： 1.用WHO第四版的评估标准，对上述精子进行评估 2.精子库9名工作人员学习第五版精子形态学评估标准及精子图谱，并进行室内质量控 制，统一评估标准，工作人员之间无显著差异 3.用WHO第五版的评估标准，对上述精子再次进行评估 4.比较上述两种标准分析结果的差异o研究结果： WHO第五版与第四版相比 1.形态正常精子百分率高，头部异常率低，尾部异常率低，有显著差异； 2.颈和中段异常率、胞浆小滴率无显著差异WHO第五版第四版精子形态学评估标准的主要区别1、头部外形轮廓判断变的宽松，仅要求大致成椭圆形 2、对头部空泡的判断更严格，多于2个空泡或者顶体后区 空泡，都判断为异常 3、颈部的长度有原来头部的1.5倍缩短为1倍，并且宽度 比第4版要更细 4、尾部只有尖锐的折角才判断为异常，而不再以弯曲角度 90度为界限 5、胞浆小滴的标准无差异精子形态学评估o正常形态精子百分率与受精率相关o异常形态精子的类型、部位和程度更重要WHO第五版手册中精液参考值的来源o12个月内使女方妊娠的男性精液参数o400-1900份精液标本（来自3大洲，8个国家）o单侧参考范围，第5百分位数作为下限o任何精液参数的高值都不能判断生育力-精浆ɑ- 葡糖苷酶测定o精浆总ɑ-葡糖甘酶的测定检测方法为葡萄糖氧化酶法o精浆中性ɑ-葡糖甘酶的测定精浆中既含有源自附睾的中性ɑ-葡糖苷酶同功酶，也 含有源自前列腺的酸性ɑ-葡糖苷酶同功酶。

前列腺分泌 的酸性ɑ-葡糖苷酶能够被十二烷基硫酸钠（SDS）选 择性抵制，检测过程中加入SDS后，检测出的ɑ-葡糖 苷酶活性即为中性ɑ-葡糖苷酶活性临床意义o附睾是精子运输、储存和成熟的场所临床上对不育患 者的诊断需要了解附睾的功能状态国内处研究表明， 精浆ɑ-葡糖苷酶主要由附睾分泌，是附睾的特异酶和标 记酶，因此，可作为附睾的功能性指标精浆ɑ-葡糖苷 酶分泌可因附睾后的输精管、射精管梗阻而被阻，故在 梗阻性无精子症患者中精浆ɑ-葡糖苷酶显著降低对于 鉴别输精管阻塞病变与睾丸生精障碍所致的无精子症具 有一定的意义精浆肉毒碱的检测o又称肉毒碱，卡尼汀或维生素Bt，相对分子质量为161.2o肉碱广泛存在于自然界中，是一种高极性，小分子季胺类化合 物，为人体必需营养素吸重要的生化功能和临床应用价值oL-肉碱是线粒体膜上唯一的活化脂肪酸载体，主要功能是携带 、转运活化的脂肪酸，特别是长链饱和不饱和脂肪酸穿越线粒 体膜，进入线粒体内进行B氧化和三羧酸循环反应，为机体的 各种代谢活动提供能量oD-肉碱对肉碱乙酰基转移酶和肉碱脂酰转移酶具有竞争性抑制 作用，影响脂肪酸的正常转运，因而对生物体表现出较大毒性。