【最新】田基黄对荷瘤小鼠抗肿瘤及增效减毒作用的实验研究.doc

1田基黄提取物与5-FU联合应用治疗肝癌的实验性研究1谢佐福， 1蔡娜， 2沙枚，1施文荣，3林久茂，1林雅惠(1福建中医药大学中西医结合学院，2福建中医药大学药学院，3福建中医药大学中西医结合研究院) 【摘要】目的 研究田基黄提取物对H22荷瘤小鼠的抗肿瘤作用及其对化疗药物氟脲嘧啶（5-FU）的增效减毒作用材料与方法采用荷H22肝癌小鼠为模型，在体观察田基黄醇提液和水提液单独应用以及与5-FU联合应用对荷瘤小鼠抑瘤率、脾指数和胸腺指数等的影响结果 田基黄醇体液和水提液对H22移植瘤具有一定的抑制作用，抑瘤率分别为11.49%和21.41%，两者与5-FU联合应用能提高后者对H22移植瘤的抑瘤率，但均无显著意义（P>0.05）田基黄醇提取液和水体液也能显著升高H22荷肝癌小鼠的脾指数和胸腺指数结论 田基黄提取物对肝癌具有一定的抑制作用，对5-FU具有一定的减毒增效作用关键词：田基黄 肝癌 5-FU 减毒增效Experimental study on the anti- Hepatocellular carcinoma effect of Hypericum japonicum Thumb extract and combined with 5-fluorouracil(1Xiezuofu,2 Caina,1 Shamei,etal. 1 Department of Traditional Chinese Medicine ,2 Pharmacy Department ,Fujian University of Traditional Chinese Medicine )【Abstract】Objective: To investigate the antitumor effects of Hypericum japonicum Thumb extract on H22 hepatoma-bearing mice and its synergism and attenuation effects on 5-FU. Methods: Transplanted H22 tumor—bearing mice were used as a model for observing the inhibition rate of tumor、thymus index and spleen index of Hypericum japonicum Thumb extracts alone groups and 5-FU combination groups.Results: Hypericum japonicum Thumb ethanol extracts and distilled water extracts can show a satisfactory function of inhibiting transplanted H22 tumor growth，the inhibition rate was 11.49% and 21.41%, the extracts combined with 5-FU can enhanced the ability of 5-FU to inhibit the growth of sarcoma,but showed no difference (P>0.05). The thymus index and spleen index were significantly elevated in Hypericum japonicum Thumb extract groups. Conclusion: The results indicate that Hypericum japonicum 本文由福建省自然科学基金课题资助（2009J0101）2作者：谢佐福（1957-），男，生理学教授，病理学主任医师，主要研究方向为肿瘤的中西医结合基础研究。

Thumb extract has antitumor effects in vivo and attenuation effects on 5-FU.【Key words】Hypericum japonicum Thumb；Hepatocelluar carcinoma；5-fluorouracil；Synergism and attenuation化学治疗是目前恶性肿瘤综合治疗中较为有效而又普遍使用的方法之一, 但单纯化疗常引起导致严重的毒副作用，如抑制免疫、造血功能、肝肾功能等 [1]中药在对肿瘤化疗减毒增效上具有独特的优势，是中药治疗肿瘤的一个重要方面田基黄原名地耳草，味甘、微苦，性凉，归肝、胆、大肠经，具有清热利湿、散瘀止痛、消肿解毒的功效 [2]它除了具有保肝、增强免疫力、抗病毒等作用外，还能抑制癌细胞 [3， 4] 等作用，临床用于治疗肝炎、原发性肝癌、伤寒、副伤寒等本实验研究田基黄提取液与5-FU联合应对荷瘤小鼠的抗肿瘤作用1 材料与方法1.1 材料 氟脲嘧啶注射液，购于福州肿瘤医院，用生理盐水配置成 25mg／ml置于4℃冰箱保存备用田基黄，购于福建中医药大学国医堂，批号：09021901，经福建中医药大学中药鉴定教研室鉴定为藤黄科金丝桃属植物地耳草的干燥全草。

1.2 实验动物 H 22肝癌腹水型小鼠，由厦门大学实验动物中心提供健康清洁级ICR小鼠（SCXK（沪）2007-0005）72只，雌雄各半，18～22g，福建中医药大学实验动物中心提供实验前适应性饲养1周，给予充足的水和常规动物饲料，室温18—24℃，湿度60％～80％，通风光照良好1.3 田基黄提取液的制备 1.3.1田基黄水提液的制备 加冷水浸泡 30 min，煮沸 60 min，过滤，再煮沸 60 min，再过滤后，将两次所得药液过滤后混匀，置6O℃水浴中浓缩至每 100 ml药液中含生药 160 g1.3.2 田基黄醇提液的制备 加 10 倍药材量的 95%乙醇溶液，回流提取 1.5h，过滤后，置旋转蒸发仪中浓缩，蒸干后以蒸馏水重悬，配成 1ml 含 1.6g 生药的悬液按照相对于成人（60kg）的中药用量，药物浓度相当于成人用量的 80g/60kg，即制备成每毫升含 0.8g 生药的悬液1.4 方法 1.4.1 小鼠 H22 细胞株接种 3选择腹腔接种 H22 细胞株 9 天生长良好的腹水瘤源小鼠颈椎脱臼处死，无菌抽取腹水，以 0.9%含青霉素氯化钠溶液稀释，调整瘤细胞悬液浓度为 1×107/ｍｌ个瘤细胞，每只小鼠右侧腋窝皮下接种 0.2ml（2×10 6细胞） 。

1.4.2 实验分组 称重后随机分成 6 组，每组 12 只：模型组、氟脲嘧啶组、田基黄水提液组、田基黄醇提液组田基黄水提液加氟脲嘧啶组和田基黄醇提液加氟脲嘧啶组1.4.3 给药方法依据前期摸索出的药品有效浓度，小鼠接种瘤细胞24 h后，模型组给予生理盐水 0.1 ml／10g，灌胃1次／d；氟脲嘧啶组给予氟脲嘧啶0.1 ml／10g（相当于25mg/kg），腹腔注射1次／d；田基黄水提取液组0.1ml／10g，灌胃1次／d；田基黄醇提液组，给予给予田基黄醇提取液0.1ml／10g，灌胃1次／d；田基黄醇提液组和田基黄醇提液加氟脲嘧啶组，在药液灌胃的同时给予腹腔注射氟脲嘧啶，1次／d连续用药10天后停药并处死，称取瘤重；剥离瘤块、脾脏和胸腺称重1.4.4 评定指标（1）肿瘤抑制百分率（抑瘤率）：抑瘤率（％）＝（模型组平均瘤重—实验组平均瘤重）/模型组平均瘤重）×100%2）胸腺指数、脾指数：胸腺(脾)指数=胸腺(脾)重／净体重(mg／g)3）小鼠给药前后体重1.4.5 统计学处理 实验数据采用 SPSS16.0 统计学软件处理全部数据采取 t 检验，数据（X±S ）表示2 结果 2.1 田基黄提取物对 H22 荷瘤小鼠体重的影响比较给药前小鼠体重与第 11 天取材去瘤后小鼠净体重。

见表 1给药前各组小鼠体重无显著性差异，说明随机分组合理可靠，动物给药前体重不影响实验结果表1 荷瘤小鼠体重的比较（X±S）组 别 动物数/只 给药前体重（g） 去瘤后净体重（g）模型组 10 20.070 ± 1.194 24.472 ± 2.1775-FU 组 10 20.230 ± 1.048 21.550 ± 2.153△*田基黄水提液组 10 20.310 ± 1.227 23.322 ± 4.024 田基黄醇提液组 10 20.480 ± 1.471 24.770 ± 2.837 4田基黄水提液+5-FU 组 10 19.750 ± 1.162 22.293 ± 1.747△*田基黄水提液+5-FU 组 10 19.520 ± 1.326 21.480 ± 2.523△*① △：与模型组比较，P﹤0.05；②*：与田基黄醇提液组比较，P﹤0.05；与模型组比较，5-FU组和田基黄加5-FU组的给药去瘤后小鼠体重均显著下降（P﹤0.05） ，而田基黄水提组和醇提组则没有显著性改变（P﹥0.05） 。

2.2 田基黄提取物对H22荷瘤小鼠的抑制肿瘤生长作用与模型组比较，田基黄醇提组、5-FU 组、田基黄加 5-FU 组的平均瘤重均显著降低（P﹤0.01），但田基黄水提组和醇提组的平均瘤重则显著性低于除模型组之外的其他各组，结果见表 2表2 各组瘤重及抑瘤率的比较（X±S）组 别 动物数/只 瘤重（g） 抑瘤率（%）模型组 10 2.924 ± 0.541 -----5-FU 组 10 1.540 ± 0.392 47.33△田基黄水提液组 10 2.588 ± 0.795 11.49*田基黄醇提液组 10 2.298 ± 0.401 21.41△*田基黄水提液+5-FU 组 10 1.447 ± 0.246 50.51△田基黄醇提液+5-FU 组 10 1.420 ± 0.329 51.43△① △：与模型组相比 P﹤0.01；②*：与 5-FU 组相比 P﹤0.012.4 田基黄提取液对荷瘤小鼠免疫器官的保护作用田基黄水提液、醇提液的胸腺重与胸腺指数，比模型组、5-FU组高，且均有显著性差异 (P﹤0．05)。

见表3表3 各组胸腺重及胸腺指数的比较（X±S）组 别 动物数/只 胸腺重（g） 胸腺指数（×10 -3）模型组 11 0.099 ± 0.018 4.040±0.5495-FU 组 11 0.050 ± 0.012▼ 2.369±0.738▼田基黄水提液组 11 0.118 ± 0.012△* 5.168±0.906△*田基黄醇提液组 11 0.112 ± 0.015△* 4.508±0.764*① △：与模型。