检验员培训教程系列3（DOC 24）.docx

第三部分 仪器分析法第一章 紫外分光光度法一、原理 可见光光、紫外线照照射某些物质质，主要是由由于物质分子子中价电子能能级跃迁对辐辐射的吸收，而而产生化合物物的可见紫外外吸收光谱基基于物质对光光的选择性吸吸收的特性而而建立分光光光度法或称吸吸收光谱法的的分析方法它它是以朗伯───比耳定律律为基础 1 朗伯——比耳定律 A = lg—- = EECL T式中 A为吸吸收度； TT为透光率；； EE为吸收系数数，采用的表表示方法是（EE），其其物理意义为为当溶液浓度度为1%（gg/ml），液液层厚度为11cm时的吸吸收度数值；； CC为100mml溶液中所所含被测物质质的重量（按按干燥品或无无水物计算），g； LL为液层厚度度，cm二、使用范围 凡具有有芳香环或共共轭双键结构构的有机化合合物，根据在在特定吸收波波长处所测得得的吸收度，可可用于药品的的鉴别、纯度度检查及含量量测定三、仪器 可见--紫外分光光光度计。

其应应用波长范围围为200～～400nm的紫外光光区、4000～850nnm的可见光光区主要由由辐射源（光光源）、色散散系统、检测测系统、吸收收池、数据处处理机、自动动记录器及显显示器等部件件组成本仪器是根据相相对测量的原原理工作的，即即先选定某一一溶剂（或空空气、试样）作作为标准（空空白或称参比比）溶液，并并认为它的透透光率为1000％（或吸吸收度为0），而而被测的试样样透光率（或或吸收度）是是相对于标准准溶液而言，实实际上就是由由出射狭缝射射出的单色光光，分别通过过被测试样和和标准溶液，这这两个光能量量之比值，就就是在一定波波长下对于被被测试样的透透光率（或吸吸收度）本仪器可精密测测定具有芳香香环或共轭双双键结构的有有机化合物、有有色物质或在在适当条件下下能与某些试试剂作用生成成有色物的物物质 使用前前应校正测定定波长并按仪仪器说明书进进行操作四、仪器的校正正 1.波波长的准确度度试验 以仪器器显示的波长长数值与单色色光的实际波波长值之间误误差表示，应应在±1.0nmm范围内 可用仪仪器中氘灯的的486.002nm与656.110nm谱线线进行校正 2.吸吸收度的准确确度试验 3.杂杂散光的试验验 4.波波长重现性试试验 5.分分辨率试验五、测定方法 1.对对照品比较法法 （1）按按各品种项下下的方法，分分别配制供试试品溶液和对对照品溶液，对对照品溶液中中所含被测成成分的量应为为供试品溶液液中被测成分分标示量的1100±10%，所所用溶剂也应应完全一致，在在规定的波长长测定供试品品溶液和对照照品溶液的吸吸收度后，按按下式计算含含量，即得。

（2）计计算式 A样样×G对/稀释倍数数×100×1 含量（%%）= ———————————————-- ×100% A对对×G样/稀释倍数数×100×1 2.吸吸收系数法 （1）按按各品种项下下的方法配制制供试品溶液液，在规定的的波长处测定定其吸收度，再再以该品种在在规定条件下下的吸收系数数计算含量用用本法测定时时，应注意仪仪器的校正和和检定 （2）计计算式 A样 含量（%%）= —————————————————- ×100% G样样/稀释倍数数×(E)对×100×1 3.计计算分光光度度法 采用计计算分光光度度法应慎重本本法有多种，使使用时均应按按各品种项下下规定的方法法进行当吸吸收度处在吸吸收曲线的陡陡然上升或下下降的部位测测定时，波长长的微小变化化可能对测定定结果造成显显著影响，故故对照品和供供试品测试条条件应尽可能能一致若测测定时不用对对照品，如维维生素A测定定法，则应在在测定时对仪仪器作仔细的的校正和检定定。

六、注意事项 1.空空白溶液与供供试品溶液必必须澄清，不不得有浑浊如如有浑浊，应应预先过滤，并并弃去初滤液液 2.测测定时，除另另有规定外，应应以配制供试试品溶液的同同瓶溶剂为空空白对照，采采用1cm的石英英吸收池 3.在在规定的吸收收峰波长±2nm以内测测试几个点的的吸收度，以以核对供试品品的吸收峰波波长位置是否否正确，除另另有规定外，吸吸收峰波长应应在该品种项项下规定的波波长±2nm以内；；否则应考虑虑该试样的真真伪、纯度以以及仪器波长长的准确度，并并以吸收度最最大的波长作作为测定波长长 4.一一般供试品溶溶液的吸收度度读数，以在在0.3～00.7之间的的误差较小 5.吸吸收池应选择择配对，否则则要引入测定定误差在规规定波长下两两个吸收池的的透光率相差差小于0.55％的吸收池池作配对，在在必要的情况况时，须在最最终测量扣除除吸收池间的的误差修正值值 6.由由于吸收池和和溶剂本身可可能有空白吸吸收，因此测测定供试品的的吸收度后应应减去空白读读数，再计算算含量 7.仪仪器的接地必必须良好，一一切裸露的零零件对地电位位不得超过224伏（测电电笔的氖管不不得发亮）。

8.在在使用过程中中，如需开启启试样室盖时时或暂时停止止测试时，必必须及时推入入光门钮杆（使使光电管前光光门关闭），保保护光电管，以以防止光电管管受强光或长长时间照射而而损坏 9.在在测定时或改改测其它检品品时，应用待待测溶液冲洗洗吸收池3～～4次，用干干净绸布或擦擦镜纸擦净吸吸收池的透光光面至不留斑斑痕（切忌把把透光面磨损损） 10..取吸收池时时，应拿毛玻玻璃两面，切切忌用手拿捏捏透光面，以以免粘上油污污使用完后后及时用测定定溶剂冲净，再再用纯化水冲冲净，用干净净绸布或擦镜镜纸擦干，晾晾干后，放入入吸收池盒中中，防尘保存存 11..若吸收池内内外壁沾污，两两池差较大的的处理 （1）可可用绸布缠在在扁竹条外或或用脱脂棉缠缠在细玻璃棒棒上蘸上乙醇醇，轻轻摩擦擦，再用纯化化水冲净 （2）如如上述方法处处理不好，必必要时可用重重铬酸钾-硫硫酸洗液泡洗洗1～2分钟钟，用自来水水冲净，再用用纯化水冲净净 （3）不不得用毛刷刷刷洗或硬物拭拭擦，以防止止表面光洁度度受损影响正正常使用 12..请务必注意意经常保持硅硅胶的干燥，目目的是保护光光学元件和光光电放大器系系统不致受潮潮损坏而影响响仪器的正常常工作，如发发现有的硅胶胶由蓝色变为为粉红色，应应立即更换。

该该仪器干燥剂剂筒有两个：：一个是装在在放大器暗盒盒上，另一个个装在单色光光器暗盒上 13..在更换硅胶胶干燥剂时，应应关闭切断电电源 14..在停止工作作期间，主机机试样室内应应放入袋装或或筒装硅胶干干燥剂用防防尘罩罩住整整个仪器，并并在防尘罩内内放数袋防潮潮硅胶 15..仪器在操作作中，狭缝的的宽度应从小小逐渐开大若若狭缝过大，由由于进入光电电管的光能量量强度过大，将将会使放大器器输出信号达达到饱和，以以至数字显示示出溢出（即即数字闪烁或或示1不变）这这不是仪器有有故障 16..将波长旋转转放在6255nm，铗缝缝关闭在0..02nm附近，选选择按键恢复复在停止工作作部位（即三三个键均弹出出） 17..搬动仪器时时应搬在主体体端，不要搬搬在试样室和和光电管盒端端以及光源灯灯室部位，以以防止仪器狭狭缝或光路部部件受力而发发生变形并并在搬动或运运输时，应将将可动部分固固定，如各旋旋钮可用胶布布贴住，狭缝缝位置开大些些，然后固定定，不要关小小狭缝，以免免运输时振动动使狭缝刀口口受损坏 18..仪器的光栅栅、反射镜绝绝对不能擦拭拭，否则将损损坏仪器光学学表面，增加加杂散光。

19..仪器经过搬搬动请及时检检查并纠正波波长精度，为为保证测定的的准确性请经经常校准波长长精度如有有异常，应立立即报告质量量保证部，但但不得擅自调调整，并及时时做好记录七、结果计算 A E（供供试品） == —— CL E（供供试品） 含量（%%）= ————————————- ×100% E（标标准值或对照照品）八、允许差 仪器分分析方法的误误差限度，除除另有规定外外，其相对偏偏差应在±(2.0～33.0)%第二章 比色色法一、原理及适用用范围 在可见见光区，除某某些物质有吸吸收外，很多多物质本身并并没有吸收，但但可在一定条条件下加入显显色试剂或经经过处理使其其显色后，根根据颜色深浅浅与浓度成正正比关系，则则可用比色法法测定含量二、仪器 可见分分光光度计（或或比色计）其其应用波长范范围为4000～850nnm的可见光光区主要由由辐射源（光光源）、色散散系统（或滤滤光片）、检检测器系统、显显示系统、记记录器及吸收收池等部件组组成。

使用前前应校正测定定波长并按仪仪器说明书进进行操作三、仪器的校正正 按照紫紫外分光光度度法项下的有有关规定及按按仪器说明书书要求进行校校正波长的的准确度应在在±3nm范围内内四、测定方法 1.用用比色法测定定时，应取对对照品同时操操作除另有有规定外，比比色法所用的的空白系指用用同体积的溶溶剂代替对照照品或供试品品溶液，然后后依次加入等等量的相应试试剂，并用同同样方法处理理在规定的的波长处测定定对照品和供供试品溶液的的吸收度后，按按紫外分光光光度法项下“对照品比较较法”的计算式计计算含量 2.当当吸收度和浓浓度关系不呈呈线性时，应应取数份梯度度量的对照品品溶液，用溶溶剂补充至同同一体积，显显色后测定各各份溶液的吸吸收度，然后后以吸收度与与相应的浓度度绘制标准曲曲线，再根据据供试品的吸吸收度在标准准曲线上求出出其含量三、注意事项 测定时时，应取对照照品平行操作作，使所用试试剂用量、反反应温度、酸酸碱度、反应应时间等完全全一致，对随随时间变化影影响显色的品品种应准确控控制读数时间间，操作时应应注意避光第三章 高效效液相色谱法法一、原理 高效液液相色谱法是是用高压输液液泵将具有不不同极性的单单一溶剂或不不同比例的混混合溶剂、缓缓冲液等流动动相，压入装装有固定相的的色谱柱，经经进样阀注入入供试品，由由流动相带入入柱内，在柱柱内各成分被被分离后，依依次进入检测测器，色谱信信号由记录仪仪或积分仪记记录。

二、适用范围 高效液液相色谱法是是一种分离分分析方法，适适用于挥发性性低、热稳定定性差、分子子量大的高分分子化合物以以及离子型化化合物等的定定性、定量分分析中国药药典主要用于于药品的含量量测定、有关关物质检查、杂杂质限度检查查和鉴别等三、仪器 高效液液相色谱仪主主要由输液泵泵系统、进样样器系统、色色谱柱、检测测器、记录器器、显示器及及数据处理机机（或兼有组组分收集系统统）等组成使使用时应按仪仪器的说明书书进行操作四、仪器的校正正 1.高高效液相色谱谱仪的柱箱控控温精度、基基线噪声、基基线漂移、灵灵敏度或检测测限、线性范范围的检。