实验1培养基母液的配制.doc

实验1 培养基母液的配制实验目的二、实验用具o．5二尝二二·揣二二二：蕊；乳誓1004、50n尢、25毗)、细口瓶(1阗0址)药勺、小玻璃棒三、实验药品按培养基配方准备四、培养基母液的配制…(一)大量元素母液的配制 无机盐中大量元素母液，按照培养基配方的尸苎，把各种化合物扩大10倍，用感量为0．01g的扭力天平，分别用50mL苎杯称量，用重蒸馏水溶解以佃配方为例(表1)溶解时在每只烧杯中加A30-40n正重蒸馏水，置于酒精灯上，加热使其溶解(注意温度不可过高，甲～70、)溶解后，在10叩证量筒中，混合定容于1阗0n厶重蒸馏水中苎混苎定容时，必须最后加入氯化钙，因为氯化钙与磷酸二氢钾，形成磷酸三苎：磷酸钙之类不溶于水的沉淀将配好的混合液，倒人细口瓶中，贴好标签保存于冰箱中配制培养基时，每配1咖n止培养基取此液1mn尢…，(二)微量元素母液的配制 无机盐中微量元素母液，按照培养基配方用§的1m倍，用感量为0．0叩1g的电光分析天平，分别用50毗烧杯称量，用苎苎苎水溶解，以肥配方为例(表2)溶解时，在每只烧杯中加入重蒸痴汞A毫升(切勿加多)在酒精灯上缓缓加热以增加溶解速度待全部溶解后，混合定容于100mL容量瓶中保存于冰箱中，配制培养基时，每配制1 000毗培养基取此液1mLoKN％~-hN03Ca02'2H20Mg,~)4'7H20KH：P03化合物名称MnS04．4H20ZnS04．7H20CuS04．5H20~3B03Na2M004．2HzOⅪCOCl2．6H20定容于1 000mL重蒸馏水中，最后加入Caf：12·2H20每升培养取此液100吐 (三)铁盐母液的配制 铁盐不是都需要单独配成母液，如柠檬酸铁，只需和大量元素一起配成母液即可。

目前常用的铁盐是硫酸亚铁和乙二胺四乙酸二钠的螯合物，必须单独配成母液这种螯合物使用起来方便，又比较稳定，不易发生沉淀这种母液的配制方法是：用感量为0．01g扭力天平称取5；57g硫酸亚铁(FeS04．7U20)和7．45g乙二胺四乙酸二钠(Na：—EDTA)，分别用蒸馏水溶解定容于1 000mL蒸馏水中，常温保存配制培养基时，每配制1 000血叔此液5mL · (四)激素及其他有机物母液的配制 激素类、维生素类及用量较小的有机物类，为了使用方便和准确，也应配制成母液母液的浓度，根据培养基配方的需要量灵活确定经常使用的母液浓度为0．2-2吨／mL，但也有例外如肌醇用量较大，可配制成10—20吨／mL的母液浓度这类物质的称量，必须用感量为0．0001 g的电光分析天平咖 5m 栅 I船 1m9 6 4 3 1 溶解各种有机化合物所用的溶剂不同，必须注意例如配制生长素类，如2,4-D、萘乙酸、吲哚乙酸等，应先用少量1—2mL95％酒精溶解，然后用重蒸馏水定容；’配制细胞分裂素时，先用少量的mHCl或mNaOH溶解，然后再用重蒸馏水定容；配制叶酸时，应先用少量稀氨水溶解，然后再用重蒸馏水定容。

· · 配制母液必须用重蒸馏水，配制后存放于冰箱中，可保存几个月当发现母液中出现沉淀或霉团时，则不能继续使用烟酸甘氨酸肌醇2．4-D1 nag／mL2 nag／mL20 nag／mL1 mg／mL1 nag／mL0．5 mg／mL20 g／L8 g／L5．8KT 0．5 nag／mL ， 表3 按MS配方需要量和母液浓度计算各种母液吸取量并填入下表名称rvtsiE~-二：笔1 000mL~二二之，二二二，*gcff~素微量元素铁盐维生素B1维生素B6烟酸甘氨酸／llti$2,4-D盯蔗糖琼脂0．4 nag／L0．5 mg／L0．S mg／L2 mg／L100 mg／L0．5 mg／L1 mg／L20 g／L8 g／L10倍液100倍液5 mL／L1 mg／mL1 mg／mL1 mg／mL2mg／mL20mg／mL1 rag／mi,0．5 mS／吐KN03(硝酸钾)Ca(N03)2·4H20(硝酸钙)KCl(氯化钠)MgS04·7H20(硫酸镁)NaaS04(硫酸钠)NaH2P04·21420(磷酸二氢钠)MnS04·4H20(硫酸锰)Na2M004·2H20(钼酸钠)CuS04·5U20(硫酸铜)Pe(C6U507)·3H20(柠檬酸铁)烟酸甘氨酸盐酸吡哆素(维生素B6)盐酸硫铵素(维生素B1)泛酸钙蔗糖NH4N03(硝酸铵)KN03(硝酸钾)KH2P04(磷酸二氢钾)MgS04·7H20(硫酸镁)CaCl2(氯化钙)xFeS04·7H20(硫酸亚铁)xNq皿U＼(乙二胺四乙酸牛内)MnS04·4H20(硫酸锰)ZnS04．9H20(硫酸锌)HaB03(硼酸)Ⅺ(碘化钾)Na2M004·2H20(钼酸钠)CuS04·5H20(硫酸铜)CoC小6H20(氯化钴)．甘氨酸盐酸硫胺素(维生素B1)盐酸吡哆素(维生素B6)烟酸肌—肌醇蔗糖琼脂0．05·0．05 101．257．50．250．250．25200000．250．0250．025 2 0．4 0．5 0．5 1003000010000如何配制培养基母液?    培养基母液的配制一般用蒸馏水，用于茎尖分生组织培养用的培养基母液，特别是一些激素和有机物母液，在有条件的单位最好用重蒸馏水或无离子水配制。

下面以MS培养基为例，详细介绍各种母液的制备    大量元素：大量元素用量相对较大，可以以每种试剂单独配制成母液，配制时以100倍的用量分别称出并分别进行溶解定容，制备培养基时每升培养基取每种母液10毫升，MS培养基大量元素母液配制(见表6)表6 MS基本培养基大量元素母液配制MS培养基母液配制母液代号试剂培养基含量（毫克/升）母液含量（克）蒸馏水定容（毫升）每升培养基用母液量（毫升）KKNO31900190100010NH4NH4NO31650 165MgMgSO4370 37P KH2PO4 17017CaCaCl2·2H20 44044    微量元素：微量元素因用量少，首先将各种试剂单独配制成母液，然后以100倍的用量混合定容制成微量元素母液，配制培养基时每升培养基取母液10毫升，MS培养基微量元素母液配制(见表7)表7 MS基本培养基微量元素母液配制MS培养基母液配制母液代号试剂培养基含量（毫克/升）母液浓度（毫克/毫升）母液用量（毫升）蒸馏水定容（毫升）每升培养基用母液量（毫升）B MnSO4·4H2O223010022.3100010 ZnSO4·7H2O860100 8．6 H3BO36201062．0 KI83108．3 NaMoO4·2H2O25102．5 CuSO4·5H202．51 2．5 CoCl2·6H202．5 1 2．5    铁盐：铁盐母液的配制(见表8)，两种试剂分别称量并分别加热溶解，待两种试剂均溶解后混合，混合后的溶液继续加热使其充分整合，冷却后定容备用，每升培养基用铁盐母液5毫升。

表8 MS基本培养基铁盐母液配制 MS培养基母液配制母液 代号试剂培养基含量（毫克/升）母液称量（克）蒸馏水定容（毫升）每升培养基用母液量（毫升）FeNa2-EDTA 3．7305005 FeSO4·7H20  2.780    有机物：有机物质常以100倍的用量分别称量分别溶解，然后混合定容，配制培养基时每升培养基取母液10毫升，MS培养基有机物母液配制(见表9)表9 MS基本培养基有机物母液配制 MS培养基母液配制母液 代号试剂培养基含量（毫克/升）母液称量（克）蒸馏水定容（毫升）每升培养基用母液量（毫升）C 甘氨酸2．0200100010盐酸噻胺0．440盐酸比哆素0．550烟酸 0．550肌醇10010000。