家畜寄生虫病实验室诊断技术论文.doc

动物蠕虫学粪便检查技术学号：113631224姓名：田孟 专业：动物医学 班级：临床112班 日期：2014年6月6日 学校：新疆农业大学 指导老师： 摘要由于蠕虫病的症状缺少特异性，因此，仅仅靠临床症状很难对家畜蠕虫病做出肯定的诊断在很大 程度上耑要依赖实验室的检查，川实验室方法在被检家畜的粪便、尿液、血液等内容物中，寻找虫卵、 幼虫、虫体或虫体碎片，并根据对所发现的虫卵等鉴定做出正确诊断所以掌握动物蠕虫学常见的实验 室粪便虫卵检查技术势在必行关键词：蠕虫、实验室的检查、实验诊断技术、涂片、粪便检查正文一、 实验所需器材载玻片，盖玻片，镊子，平皿，烧杯，塑料杯或纸杯，漏斗，漏斗架，胶帽吸管，离心管，试管， 玻璃棒，粪筛，纱布，平底管（青霉素小瓶），玻璃珠，三角小烧瓶，100ml球状烧瓶，火柴棍，特制 铁丝圈，虫卵计数板，普通离心机，光学显微镜等甘油，饱和食盐水，0. 1N （或4%） NaOH,家畜新鲜粪便等二、 实验方法步骤和操作要领（一） 直接涂片法（Examination of Direct Smears）在清洁的载玻片上滴1-2滴水或1滴甘油与水的等量混合液（加甘油的好处是能使标本清晰，并防 止过快蒸发变干），其上加少量粪便，用火柴棍仔细混匀。

再用镊子去掉大的草棍和濟子等，之后加盖 玻片，置光学显微镜下观察虫卵或幼虫另一方法是直接涂片法的改良法叫回旋法取2〜3g粪样加清水2〜3倍，充分混匀成悬液后用 玻璃棒搅拌0.5 — lmin，使之成回旋运动，在搅拌过程中迅速提起玻璃棒，将棒端附着的液体放于载片 上涂开，加上盖八在镜下检查检查时多収几滴悬液该方法的原理是由于冋旋搅动的结果，可使玻璃 棒端悬液小滴中附有较多量的寄生虫卵或幼虫二） 漂浮法（Method Involving Flotation）其原理是采用比重高于虫卵的漂浮液，使粪便中的虫卵与粪便渣子分开而浮于液体表血，然后进行 检查漂浮液通常多采用饱和盐水，其方法简便、经济、易行饱和盐水漂浮法对大多数线虫卵、绦虫 卵及某些原虫卵囊均有效，但对吸虫卵、后圆线虫卵和棘头虫卵效果较差饱和盐水漂浮方法操作步骤：取新鲜粪便2g放在平皿或烧杯中，用镊子或玻璃棒压碎，加入10 倍量的饱和盐水，搅拌混合，川粪筛或纱布过滤到平底管中，使管内粪汁平于管口井稍隆起力好，但不 要溢出静置30分钟左右，用盖八蘸取后，放于载片上，镜下观察；或用载片蘸収液面后翻转，加盖 片后镜检；也可用特制的铁丝圈进行蘸取检查。

除上述漂浮方法外，还有一种简单的漂浮技术.它可以检查含卵量少的粪便（每g粪便少于50个 虫卵）具体步骤如下：即取3g粪便放于一塑料杯或烧杯内，加进50ml漂浮液后.用玻璃棒搅匀，通 过粪筛或双层纱布过滤到另一个杯中.漂浮10分钟.然后用一试管插在滤液的中央底部，并迅速提起 把附在上面的液滴滴落在载片上，加上盖片镜检三） 沉淀法（Sedimentation Technique）其原理是利用虫卵比重比水大的特点，让虫卵在重力的作用下，自然沉于界器底部，然后进行检查沉淀法可分为离心沉淀法和自然沉淀法两种1. 离心沉淀法通常采用普通离心机进行离心，使虫卵加速集中沉淀在离心管底，然后镜检沉淀 物方法是取5g被检粪便，賈于平皿或烧杯中，加5倍fi的清水，搅拌均匀经粪筛和漏斗过滤到离 心管中賈离心机上离心2-3分钟（电动离心机转速约为500转/分），然后倾去管内上层液体，再加清 水搅匀，再离心这样反S进行2-3次，直至上清液清亮为止，最后倾去大部分上淸液，留约为沉淀物 1/2的溶液量，用胶帽吸管吹吸均匀后，吸取适量粪汁（2滴左右）罝载玻片上，加盖玻片镜检2. 自然沉淀法操作方法与离心沉淀法类似，只不过是将离心沉淀改为自然沉淀过程。

沉淀容器 可用大的试管进行每次沉淀时间约为半小时左右自然沉淀法缺点是所需时间较长，但其优点是不需 要离心机，因而在基层乡下操作较为方便四〉虫卵计数法（Egg Counting Method）虫卵计数法主要用于了解畜禽感染寄生虫的强度及判断驱虫的效來方法有多种，这里介绍二种常 用的计数方法1. 麦克马斯特氏法（McMaster’s Method）计数板的构造：计数板是由二片载玻片组成，其中一片较另一片窄一些（便于加液〉在较窄的玻 片上有lcm见方的刻度区二个，每个正方形刻度区中又平分为5个长方格另有厚度为1. 5mm的儿个玻 璃条垫于二个载玻片之间，以树脂胶粘合这样就形成了二个计数室，每个计数室的容积为0.15ml （0. 15cm3）计数方法：取2g粪便混匀，放入装有玻璃珠的小瓶加入饱和盐水58ml充分振荡混合，通过细 的粪筛过滤，后将滤液边摇晃边用吸管吸出少S:滴入计数室A,賈于S微镜台上，静賈儿分钟后，用低 倍镜将二个计数室内见到的虫卵全部数完，取平均值，再乘以200,即为每克粪便中的虫卵数（EPG）o2. 斯陶尔氏法（Stoll’s Method）用小的特制球状烧瓶,在瓶的下颈部有二个刻度，下面为56ml, 上面为60ml （没有这种球状烧瓶，可用大的试管或小三角烧杯代替，但须事先标好上述二个刻度）。

计数时，先加入0. 1N （或4%） NaOH溶液至56ml处，再徐徐加入捣碎的粪便，使液面达60ml处为 止（大约加进4g粪便）然后加入10多个玻璃小球，充分振荡，使呈细致均匀的粪悬液（也可以过滤） 后用吸管吸取0.15ml賈载玻片上，盖以不小于22X40mm的盖玻片镜检计数（没有大盖片，可用若干张 小盖片代替；或将0.15ml粪液滴于2〜3张载片上，分别进行计数后，再加起来即可）所见虫卵总数 乘以100,即为每克粪便中的虫卵数除上述方法之外，也可以用漂浮法或沉淀法来进行虫卵计数即称取一定量粪便（1〜5g），加入适量（10 倍量）的漂浮液或水后，进行过滤，尔后或漂浮或进行反S水洗沉淀，最后用盖片或裁片沾取表面漂浮 液或吸取沉渣，进行镜检，计数虫卵计数完一片后，再检查第二片、第三片……，直到不再发现虫卵 或沉渣全部看完为止然后将见到的虫卵总数除以粪便克数，即为每克粪便虫卵数四、实验方法1. 直接涂片法做直接涂片时，涂片的厚薄以在载玻片的下而垫上有字的纸时，纸上的字迹隐约可 见为宜直接涂片法的优点是简便、易行、快速、适合于虫卵fi大的粪便检查；缺点是对虫卵含fi低的 粪便检出率低因此在实际工作中，需多检儿片，以提高检出率。

检查虫卵时，先用低倍镜顺序查盖玻 片下所有部分，发现疑似虫卵物时，再用高倍镜仔细观察因一般虫卵（特别是线虫卵）色彩较淡，镜 检时视野宜稍暗一些（聚光器下移）2. 漂浮法饱和盐水漂浮法漂浮时间约为30分钟左右较为适宜时间过短（少于10分钟）漂浮 不完全；时间过长（大于1小时）易造成虫卵变形、破裂，难以识别另外，漂浮液必须饱和；盐类的饱和溶液须保存在不低于13C的情况下，才能保持较高的比重；否则效果难以保证除饱和盐水漂浮液以外，其他一些漂浮液也可用于一些特殊虫卵的检查如饱和硫酸锌溶液（饱和度为1000ml水中溶解920g硫酸锌）漂浮力强，检查猪肺丝虫卵效果较好；饱和硫酸镁溶液（饱和度 为1000ml水中溶解440g硫酸镁）多用于结肠小俊纤毛虫包囊的检查；饱和蔗糖溶液（饱和度为1000ml 水中溶解1280g蔗糖）性温和，可适于多种虫卵和卵囊的漂浮漂浮法检查多例粪便时，如用铁丝圈蘸取漂浮液面,则检查完一例，再蘸取另一例时,需先在酒精 灯上烧过铁丝圈后再用之，以免相互污染，影响结果的准确性另外，如用裁玻片或盖玻片蘸取虫卵， 则使用的载玻片或盖玻片一定要干净无油腻，否则难以蘸取3. 沉淀法沉淀法对各种蠕虫卵及幼虫均可查到，特别适用于检查比重大的虫卵（如吸虫卵等）。

注意此法粪:W:少，一次粪检最好多看儿片，以提卨检出率另外,也可将离心沉淀法和漂浮法结合起来应用如可先用漂浮法将虫卵和比虫卵轻的物质漂起来， 再用离心沉淀法将虫卵沉下去；或者选用沉淀法使虫卵及比虫卵重的物质沉下去，冉用漂浮法使虫卵浮 起来，以获得更高的检出率4. 虫卵计数法做虫卵计数时，所取粪便应干净，不能掺杂砂土、草根等；操作过程中，粪便必 须彻底粉碎，混合均匀；用吸管吸取粪液时，必须摇匀粪液，在一定深度吸取；采用麦克马斯特氐法计 数时，必须调好微镜焦距（计数室刻度线条可被看到）；计数虫卵时，不能有遗漏和重复为了取得准确的虫卵计数结果，最好在每天的不同时间检查三次，并连续检查三天，然后取其平均 值这样就可以减少寄生虫在每昼夜间排卵不平衡的影响将每克粪便虫卵数乘以24小时粪便的总重呈（g）,即是每天所排虫卵的总数，再将此总数除以已 知成虫每天排卵数（可查节得到），即可得出雌虫的大约寄生数量如寄生虫是雌雄异体的，则将上述 雌虫数再乘以2,便可得出雌雄成虫寄生总数由于粪中虫卵的数目与宿主机体状况、寄生虫的成熟程度、雌虫数目及排卵周期、粪便性状（干湿）、 是否经过驱虫及其•它多种因素有关，所以虫卵计数只能是对寄生虫感染程度的一个大致推断。

五、 饱和盐水的配制把食盐加入沸水锅内，直到食盐不再溶解而出现沉淀为止（即1000ml沸水中加入约400g食盐）， 精制盐配制的饱和盐水一般不必过滤，待冷却后即可使用（冷却后的溶液有食盐结晶析出，即为饱和）; 飢制盐配制的饱和液可用滤纸、纱布或棉花过滤后备用六、 各类蠕虫卵特征描述1. 吸虫卵（Trcmatodc Eggs）吸虫卵多数呈卵圆形或棚圆形，为黄色、黄褐色或灰褐色卵壳由数层卵膜组成，比较厚而坚实大部分吸 ］一端有卵盖，卵盖和卵壳之间有一条不明： 丨（新鲜虫卵在髙倍镜下时可看见）当毛蚴发育成熟时，则顶盖而出；有的吸虫卵无卵盖，毛拗则破壳而出 有的吸虫卵卵壳表而光滑；也有的有各种突出物（如结节、小刺、丝等）新排出的吸虫卵內，有的含 有卵黄细胞所包围的胚细胞有的则含有成形的毛拗2. 绦虫卵（Costode Eggs）园叶目绦虫卵与假叶目绦虫卵构造不同园叶目绦虫卵中央有一椭 圆形具三对胚钩的六钩蚴六钩拗被包在一层紧贴着的膜里，该膜称为A胚膜；还有一层膜位于内胚膜 之外，叫外胚膜A外胚膜之间呈分离状态，中间含有或多或少的液体，并常含有颗粒状A含物有的 绦虫卵的内层胚膜上形成突起，被称之为梨形器（灯泡样结构）。

各种绦虫卵卵壳的厚度和结构有所不 同绦虫卵大多数无色或灰色，少数呈黄色、黄褐色假叶目绦虫卵则非常近似于吸虫卵3. 线虫卵（Nematode Eggs〉一般的线虫卵有四层膜（光学显微镜下只能看见二层）所组成的卵壳，壳A为卵细胞但有的线虫卵随粪排至外界时，已经处于分裂前期；有的甚至已含有幼虫各种线 虫卵的大小和形状不同，常见楠圆形、卵形或近于圆形卵壳的表而也各有所不同，有的完全光滑，有 的有结节，有的有小P1陷等各种线虫卵的色泽也不尽相同，从无色到黑褐色不同线虫卵卵壳的薄厚 不同，蛔虫卵卵壳最厚；其它多数卵壳较薄4.棘头虫卵(Thorny-head Worm Eggs)虫卵多为椭圆或椭圆形卵的有一 椭圆形的胚 胎，在胚胎的一端具有三对胚钩胚胎被三层卵膜包着；最里面的一层常是最柔软的；中间一层常较厚, 大多在两端有显著的压迹；最外一层的构造往往变化较大，有的薄而平，有的厚，并呈现凹凸不平的蜂 窝状构造参考文献[1] 王浩.家禽蠕虫学粪便检查方法及虫卵描述[J].养禽与禽病防治.1984年04期[2] 刘伯淳.成年中的下痢诊断[J].青海畜牧啓医杂志.1986年06期[3] 新疆农业人学动物医学学院.寄生虫实验指导手册.蠕虫学粪便检查法[4] 中国畜牧•&医学会.畜牧啓医学会第十届全国会员大会暨学术年会论文集：畜牧卷 [C].北京：。