植物细胞工程与动物细胞工程的比较.ppt

动物细胞工程概述v动物细胞工程动物细胞培养动物细胞培养动物细胞融合动物细胞融合单单克隆抗体制备应用克隆抗体制备应用胚胎移植胚胎移植核核 移移 植植2.2 动物细胞工程•单克隆抗体等 动物细胞工程常用的技术•动物细胞培养•动物细胞核移植•动物细胞融合是其他动物细胞工程技术的基础为什么要进行动物细胞培养?1.动物细胞培养如何进行细胞培养 ?2.2.1动物细胞培养和核移植技术从动物机体中取出相关组织，将它们分散成 单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些 细胞生长和增殖1.1概念动物细胞培养和核移植技术v动物细胞培养就是从动物机体内取出相关的组 织，将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的 培养基中，让这些细胞生长和增殖1、选材：动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 ，它们细胞增殖能力强，分裂旺盛，分 化程度低，容易培养v在进行动物细胞培养时，用胰蛋白酶 分散细胞，说明细胞间的物质主要是蛋 白质动物细胞培养适宜的PH为7.2— 7.4，此环境下胃蛋白酶（2.0）没有活 性，而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性较高2.分散成单个细胞3.动物细胞生长特性：v细胞贴壁：悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上， 称为细胞贴壁。

要求：培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于 贴附 细胞的接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时， 细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞 的接触抑制1.2 动物细胞培养过程v胚胎或幼龄动物的组织器官细胞悬液10代细胞50细胞剪碎胰蛋白酶洗涤、稀释、 分离原代培养用胰蛋白酶分散 细胞，说明细胞 间的物质主要是 蛋白质动物细 胞培养适宜的 PH为7.2—7.4 ，此环境下胃蛋 白酶（2.0）没 有活性，而胰蛋 白酶(7.2-8.4)的 活性较高比老龄动 物的组织 细胞增殖 能力强， 有丝分裂 旺盛分 化程度越 低，繁殖 能力越强 ，越容易 培养动物细胞培养 不能最终培养 成生物体细胞增殖 缓慢，核 型可能变 化动物组织细胞间隙中含有一定 量的弹性纤维等蛋白质，将细 胞网络起来形成具有一定弹性 和韧性的组织和器官贴壁生长 接触抑制10代以内，保持正常二倍体核型 传代培养细胞 悬浮 液10代 细胞50代 细胞无限传 代原代 培养传代培养细胞株细胞系•原代培养和传代培养、细胞株和细胞系多数组织细胞固定在表面 生长和分裂随细胞增多，细胞就会停止分裂增殖动物胚胎或幼龄动 物的组织、器官胰蛋白酶剪碎单个细胞加培养液制成细胞 悬浮 液细胞株细胞系细胞增值无限传代去掉组织 间蛋白动物细胞培养不能最终培养成生物体多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中， 根据你所学的内环境的知识，思考以下问题： 1.体外培养细胞时需要提供哪些物质？2.体外培养的细胞需要什么样的环境条件？讨 论充足营养适宜温度、PH和气体环境；无菌无毒环境1.3 动物细胞培养的条件（无菌处理和添加抗 生素、更换培养液）与体内相同。

合成培养基：糖、氨基酸、 促生长因子（血清、血浆）、无机盐、微 量元素等（36~37℃、7.2~7.4） （O2、CO2--维持培养液PH）动物细胞培养条件：1、无菌、无毒的环境（添加一定量的抗生素，定期更换培养液） 2、营养（葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清等 3、温度和PH36.5+（-）0.5度, 7.2-7.4 4、气体环境：O2和CO2（95%空气和5% CO2 ）保证细胞顺利的 生长增殖动物细胞培养液的主要成分：葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等 与植物培养基相比其特点是 ：（1）液体培养基（2）含有动物血清动物体细胞大都生 活在液体的环境细胞的全能性细胞株、细胞系植物体培养结果获得细胞或 细胞产物快速繁殖、培育 无病毒植株等培养目的葡萄糖、动物 血清蔗糖、植物激 素培养基特有成分液体培养基固体培养基培养基性质细胞增殖原理动物细胞培养植物组织培养比较项目植物细胞和动物细胞培养的比较动物细胞培养应用v大规模培养生产生物制品（病毒疫苗 、干扰素、单克隆抗体）v作为基因工程中的受体细胞v培养的动物细胞可以用于检测有毒物 质，判断某种物质的毒性v为治疗和预防癌症及其他疾病提供理 论依据二、动物体细胞核移植技术:将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细 胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新 的胚胎，这个新的胚胎最终发育成动物个体。

用核移植的方法得到的动物称为克隆动物核移植胚胎细胞核移植体细胞核移植 （难度高）受体细胞：MⅡ期的 卵母细胞电激处理使供电激处理使供 体核进入受体体核进入受体 卵母细胞构建卵母细胞构建 重组胚胎重组胚胎卵母细胞采集、培养卵母细胞采集、培养MMⅡⅡ期期卵母细胞卵母细胞供体牛供体牛供体细胞注入供体细胞注入 去核卵母细胞去核卵母细胞代孕母牛代孕母牛克隆牛克隆牛体细胞培养体细胞培养去核卵母细胞去核卵母细胞去核去核胚胎胚胎移植移植卵细胞Ａ母绵羊Ｂ母绵羊乳腺细胞细胞质细胞核细胞核移植早期胚胎卵裂C母绵羊子宫胚胎移植多莉羊分娩妊娠多莉羊的培育过程融合后的卵细胞2.2体细胞核移植的过程：思考： 1.核移植的受体细胞是什么？处在什么时期？2.通过什么手段激活受体细胞，构建重组胚胎？ MⅡ中期卵母细胞诱导方法：物理或化学方法激活受体细胞，完成 细胞分裂和发育进程讨论：1.在体细胞的细胞核移植到受体卵母细胞之 前，为什么必须先去掉受体卵母细胞的核？为使核移植的胚胎或动物的遗传物质全部来 自有重要利用价值的动物提供的体细胞，在供体 细胞的细胞核移至受体细胞之前，必须将受体细 胞的遗传物质去掉或将其破坏培养的动物细胞一般当传代至10～50代 左右时，部分细胞核型可能会发生变化，其 细胞遗传物质可能会发生突变，而10代以 内的细胞一般能保持正常的二倍体核型。

因 此，在体细胞核移植中，为了保证供体细胞 正常的遗传基础，通常采用传代10代以内 的细胞2.用于核移植的供体细胞一般都选用传代10 代以内的细胞，想一想，这是为什么？3.你认为用上述体细胞核移植方法生产的克隆动物，是 对体细胞供体动物进行了100%的复制吗？为什么？绝大部分DNA来自于供体细胞核，但其核外还有少 量的DNA，即线粒体中的DNA是来自于受体卵母细 胞此外，即便动物的遗传基础完全相同，但动物的一些 行为、习性的形成与所处环境有很大关系，核供体动 物生活的环境与克隆动物所生活的环境不会完全相同 ，其形成的行为、习性也不可能和核供体动物完全相 同，从这一角度看，克隆动物不会是核供体动物 100%的复制2.3体细胞核移植技术的应用前景：1、在畜牧业中可以加 速家畜遗传改良的进程2、保护濒危物种3、医药卫生领域生产 医用蛋白质及组织器官 的移植4、了解胚胎发育和衰老过程；追 踪研究疾病的发展过程和治疗疾病克隆动物的研究意义1.克隆动物作为生物反应器，生产医用蛋白 2.改良动物品种 3.治疗人类疾病，作为供体 4.保护濒危动物体细胞核移植技术存在的问题：许多克隆动物表现出遗传和生理缺陷， 如体型过大，异常肥胖，发育困难，脏 器缺陷，免疫失调等。

思考与探究2.动物细胞培养要经过脱分化的过程吗？为什么？动物细胞培养不需经过脱分化过程因高度分化 的动物细胞发育潜能变窄，失去了发育成完整个 体的能力，所以，动物细胞也就没有类似植物组 织或细胞培养时的脱分化过程了要想使培养的 动物细胞定向分化，通常采用定向诱导动物干细 胞，使其分化成所需要的组织或器官3.1997年，美国威斯康星州的一个奶牛场有一头名叫卢辛达（ Lucinda）的奶牛，年产奶量为30.8 t，创造了世界奶牛产奶量最 高新纪录目前世界各国高产奶牛场奶牛，年平均产奶量一般为十几 吨，而我国奶牛产奶量年平均水平仅为3～4 t （1）能利用体细胞核移植技术克隆高产奶牛卢辛达吗？请说明理由 卢辛达的产奶量很高，有高产奶的遗传基础 ，利用卢辛达的体细胞克隆的奶牛其遗传物质基本 上全部来自该奶牛，其克隆牛具有高产的遗传基础 ，如果精心培育和饲养，有可能在世界范围内推广 ，克隆牛再与高产的公牛自然繁殖，可得到很多高 产的后代，从而加快奶牛改良进程该克隆牛不能无限制地推广，其数量不宜过多，尤 其是在小范围内不能无限的繁殖，以避免奶牛群出 现近亲繁殖而引起种质衰退2）如果将克隆高产奶牛卢辛达的任务交给你， 你将如何对它进行克隆？从卢辛达耳朵（也可用别的组织、器官，耳朵在活体 上容易取）上剪取一小块组织，在体外培养获得该组 织（如软骨组织）的细胞。

从屠宰场取废弃的牛卵巢 ，抽取卵母细胞体外培养成熟用显微针去除卵母细 胞的核，再将耳细胞注入卵母细胞，用电刺激方法使 卵母细胞与体细胞融合，这时供体核就进入了受体卵 母细胞，再用电刺激或化学物质激活注入了体细胞核 的卵母细胞，使其完成减数分裂和发育过程核移植 胚胎在体外短时间培养后，挑选正常卵裂的胚胎植入 经同期发情处理的受体母牛体内4.体细胞核移植技术在研究和应用上还存在什么 问题？请你查阅资料，了解这方面的前沿动态研究方面：克隆动物基因组重新编程的机制尚不清 楚，克隆技术效率低，克隆动物畸形率高、死亡率 高、易出现早衰等问题这些问题尚在研究中应用上：生产克隆动物费用昂贵，距大规模应用还 有一定距离1、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改 变的细胞是 --------------------（ ）A．细胞系 B．细胞株 C．原代细胞 D．传代细胞2、动物细胞工程技术的基础是 ------（ ）A.动物细胞融合 B.单克隆抗体 C.胚胎移植 D.动物细胞培养AD3、用于动物细胞培养的组织和细胞大都取 自胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织 ，其主要原因是这样的组织细胞 （ ）A.容易产生各种变异 B．具有更强的全能性C.取材十分方便 D．分裂增殖的能力强D4.动物细胞培养与植物细胞培养的重要区别在于 ------------------------------（ ） A.培养基不同；B.动物细胞培养不需要在无菌条件下进行；C.动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能；D.动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培养成植株。

A动物细胞融合仙台病毒丧失感染活性 （不感染细胞 ）保留融合活性（ 诱导细胞融合）紫外线物理法化学法生物法融合过程示意图单克隆抗体的概念v单: 单个细胞v克隆: 无性繁殖v抗体: 化学性质单一、特异性强v实验目的:制备单克隆抗体.v实验原理：B淋巴细胞能产生抗体，骨 髓瘤细胞能无限增殖，杂交瘤细胞既能 产生抗体又能无限增殖v实验材料：小白鼠v实验器材：培养皿、针筒等等v实验过程：如下页根据阿根廷科学家米尔斯坦和德国科学家柯根据阿根廷科学家米尔斯坦和德国科学家柯 勒设计的勒设计的 实验方案实验方案: :单克隆抗体制备过程单克隆抗体的应用v主要用于疾病的诊断、治疗和预防与常规 抗体相比，具有特异性强、灵敏度高的优点 如；各种癌症、肝炎病毒、SARS病毒、 细菌及血吸虫等数百种疾病的诊断；在疾病 治疗方面，单克隆抗体犹如人体卫士，能识 别“自己”与“异己”，一旦发现 致病因素便与 之结合将其杀死若在单抗上带上抗癌药物 制成“生物导弹”，将药物定向带到癌细胞所 在部位，既消灭了癌细胞又不会伤害健康细 胞植物细胞工程与动物细胞工程的比较v植物细胞工程的技术手段主要有植物组织 培养和植物体细胞杂交，其中植物组织培 养是植物细胞工程的基础；动物细胞工程 的技术手段主要有动物细胞培养、动物细 胞融合、单克隆抗体的制备、胚胎移植和 核移植，其中动物细胞培养是动物细胞工 程的基础。

动、植物细胞工程的原理和技 术手段有相似之点，但也存在不同之处， 现对两者的主要技术手段加以分析比较：一、植物细胞的组织培养与动物细胞培养 1．过程v⑴植物组织培养再分化 激素、光离体的植物器官、组织或细胞脱分化 营养物、激素愈伤组织根、芽植物体胚状体人工种子人造胚乳和种皮。