
《临床常用血清酶》PPT课件.ppt
64页第七节第七节 临床常用血清酶、同工酶及其临床常用血清酶、同工酶及其 亚型分析亚型分析 临床上可根据酶浓度的变化用以辅助诊断临床上可根据酶浓度的变化用以辅助诊断若酶浓度变化由细胞坏死或细胞膜通透性变化引若酶浓度变化由细胞坏死或细胞膜通透性变化引起,表示脏器或组织损伤;若为细胞内酶合成增起,表示脏器或组织损伤;若为细胞内酶合成增加所致,提示组织再生、修复、成骨或异位分泌,加所致,提示组织再生、修复、成骨或异位分泌,或提示有恶性肿瘤的可能;若为酶排泄障碍引起或提示有恶性肿瘤的可能;若为酶排泄障碍引起者说明有梗阻存在同工酶的分析与鉴定则能反者说明有梗阻存在同工酶的分析与鉴定则能反应疾病的部位、性质和程度应疾病的部位、性质和程度 由于酶广泛分布于全身各器官、组织,在由于酶广泛分布于全身各器官、组织,在血清中升高的机制又不尽相同,因此单凭某一血清中升高的机制又不尽相同,因此单凭某一酶的活性变化,很难做出独立诊断若同时测酶的活性变化,很难做出独立诊断若同时测定一组性质不同的酶,比较各酶活性的变化,定一组性质不同的酶,比较各酶活性的变化,就能根据酶增高或减少的就能根据酶增高或减少的““谱型谱型””做出诊断,做出诊断,此种同时检测一组酶,称为酶谱。
此种同时检测一组酶,称为酶谱如:如:(1)心肌酶谱心肌酶谱:传统的心肌酶谱由:传统的心肌酶谱由CK、、AST、、LD和和α-HBD组成,这一组合在我国临床化学实验室组成,这一组合在我国临床化学实验室一直应用至今目前最简单而有效的心肌酶谱可由一直应用至今目前最简单而有效的心肌酶谱可由CK、、CK-MB、、CK-MB 型或型或CK-MM 型组成近型组成近年来心肌酶谱在年来心肌酶谱在AMI的早期诊断中的应用价值受到的早期诊断中的应用价值受到了心肌肌钙蛋白的挑战了心肌肌钙蛋白的挑战 (2)肌酶谱肌酶谱:主要用于对骨骼肌疾病的诊断和监:主要用于对骨骼肌疾病的诊断和监护可供选择的酶有护可供选择的酶有CK、、LD、、AST及其各自同工酶及其各自同工酶若能再加若能再加CK-MM亚型则更为理想亚型则更为理想(3)肝酶谱肝酶谱:: 主要是用来判断有无肝实质细胞损伤、主要是用来判断有无肝实质细胞损伤、肝内外胆汁淤积等肝胆疾病肝内外胆汁淤积等肝胆疾病4)肿瘤酶谱肿瘤酶谱:: 具有器官特异性的有具有器官特异性的有ACP及其同工酶、及其同工酶、ALP及其同工酶、及其同工酶、γ-GT及其同工酶、及其同工酶、AFU、、AMY及其同工酶、及其同工酶、LPS等;非器官特异性的有等;非器官特异性的有ALT、、CK同工酶、同工酶、ALD同工酶、同工酶、LD同工酶等。
同工酶等(5)胰酶谱胰酶谱:: 主要用于急性胰腺炎的诊断和鉴别主要用于急性胰腺炎的诊断和鉴别诊断可供选择的有诊断可供选择的有AMY及其同工酶、及其同工酶、LPS、弹力蛋白酶、弹力蛋白酶-1、磷脂酶、磷脂酶A2、尿胰、尿胰蛋白酶原蛋白酶原-2等一、转氨酶及其同工酶一、转氨酶及其同工酶( (一一) )生物化学特性生物化学特性 转氨酶是一组催化氨基在氨基酸与转氨酶是一组催化氨基在氨基酸与α-α-酮酸间转移的酶类,丙氨酸氨基转移酶酮酸间转移的酶类,丙氨酸氨基转移酶(ALT)(ALT)和和( (天天) )门冬氨酸氨基转移酶门冬氨酸氨基转移酶(AST)(AST)是其是其中最重要的两种中最重要的两种 AST广泛存在于多种器官中,按含量多少顺序为广泛存在于多种器官中,按含量多少顺序为心、肝、骨骼肌和肾等,肝中心、肝、骨骼肌和肾等,肝中70%存在于肝细胞线粒%存在于肝细胞线粒体中 AST有两种同工酶有两种同工酶ASTs和和ASTm,, ASTs存在存在于可溶性的细胞质中于可溶性的细胞质中,ASTm存在于存在于线粒体中线粒体中细胞轻度损伤时轻度损伤时ASTs升高显著升高显著,,而严重损伤时,则而严重损伤时,则ASTm大量出现于血清中大量出现于血清中。
正常血清所含正常血清所含AST的同工酶主要的同工酶主要为为ASTs,但在病理状态下,如细胞坏死,则血清中以,但在病理状态下,如细胞坏死,则血清中以ASTm为主 血清血清AST活性升高,多来自心肌或肝脏损伤;肾活性升高,多来自心肌或肝脏损伤;肾脏或胰腺细胞损伤时,也可出现很高的脏或胰腺细胞损伤时,也可出现很高的AST活性 ALT ALT大量存在于肝脏组织中,其次为肾、大量存在于肝脏组织中,其次为肾、心、骨骼肌等血清心、骨骼肌等血清ALTALT活性升高,通常表示活性升高,通常表示肝脏损伤肝脏损伤ALTALT有两种不同活性的同工酶有两种不同活性的同工酶α(ALTs)α(ALTs)、、β(ALTm)β(ALTm),分别存在于细胞质及线,分别存在于细胞质及线粒体,后者的活性为前者的粒体,后者的活性为前者的1616倍肝细胞坏死倍肝细胞坏死血清中以血清中以ALTmALTm为主 ( (二二) )测定方法测定方法 转氨酶的测定多用比色法,以赖氏法最常用 转氨酶的测定多用比色法,以赖氏法最常用目前,国内外实验室多采用连续监测法进行测定目前,国内外实验室多采用连续监测法进行测定。
ALTALT速率法测定中酶偶联反应式为:速率法测定中酶偶联反应式为: ALTL-L-丙氨酸丙氨酸+α-+α-酮戊二酸酮戊二酸 L- L-谷氨酸谷氨酸 + L- + L-丙酮酸丙酮酸 LD LD丙酮酸丙酮酸 + NADH + H + NADH + H+ + L- L-乳酸乳酸 + NAD + NAD+ + AST速率法测定中酶偶联反应式为:速率法测定中酶偶联反应式为: ASTL-门冬氨酸门冬氨酸+α-酮戊二酸酮戊二酸 草酰乙酸草酰乙酸+L-谷氨酸谷氨酸 MD 草酰乙酸草酰乙酸+NADH+H+ L-苹果酸苹果酸+NAD+ 上述偶联反应中,上述偶联反应中,NADH的氧化速率与标本中酶的氧化速率与标本中酶活性呈正比,可在活性呈正比,可在340nm检测吸光度下降速率。
根据检测吸光度下降速率根据线性反应期吸光度下降速率线性反应期吸光度下降速率(-△△A//min),计算出,计算出ALT、、AST的活性浓度的活性浓度( (三三) )临床意义临床意义 ALTALT是反映肝损伤的一个很灵敏的指标,临是反映肝损伤的一个很灵敏的指标,临床上主要用于肝脏疾病的诊断床上主要用于肝脏疾病的诊断 各种急性病毒性肝炎、药物或酒精中毒引起各种急性病毒性肝炎、药物或酒精中毒引起的急性肝损害时,血清的急性肝损害时,血清ALTALT水平可在临床症状水平可在临床症状( (如如黄疸黄疸) )出现之前就急剧升高且出现之前就急剧升高且ALT>ASTALT>AST 急性肝炎时血清急性肝炎时血清ALTALT高低与临床病情轻重相高低与临床病情轻重相平行,且往往是肝炎恢复期最后降至正常的酶,平行,且往往是肝炎恢复期最后降至正常的酶,是判断急性肝炎是否恢复的一个很好指标假如是判断急性肝炎是否恢复的一个很好指标假如能同时测定能同时测定ASTAST,并计算,并计算ASTAST//ALTALT之比,则对于之比,则对于急、慢性肝炎的诊断、鉴别诊断以及判断转归也急、慢性肝炎的诊断、鉴别诊断以及判断转归也特别有价值。
急性肝炎时比值特别有价值急性肝炎时比值<1<1,肝硬化时比值,肝硬化时比值≥2≥2,肝癌时比值,肝癌时比值≥30≥30.. 重症肝炎时由于大量肝细胞坏死,血中 重症肝炎时由于大量肝细胞坏死,血中ALTALT逐渐下降,而胆红素却进行性升高,出现所谓逐渐下降,而胆红素却进行性升高,出现所谓““酶胆分离酶胆分离””现象,常是肝坏死的前兆现象,常是肝坏死的前兆 ASTAST主要存在于心肌,以往多用于主要存在于心肌,以往多用于AMIAMI的诊断AMIAMI发病发病6 6~~8h8h即升高,即升高,4848~~60h60h达到高峰,达到高峰,4 4~~5d5d恢复正常恢复正常但由于但由于ASTAST在在AMIAMI时升高迟于时升高迟于CKCK,恢复早于,恢复早于LDLD,故诊断,故诊断AMIAMI价值不大在急性肝炎时,价值不大在急性肝炎时,ASTAST虽亦显著升高,但虽亦显著升高,但升高程度不及升高程度不及ALTALT,而在慢性肝炎,特别是肝硬化时,,而在慢性肝炎,特别是肝硬化时,ASTAST升高程度超过升高程度超过ALTALT胆道疾患时胆道疾患时ASTAST亦可升高亦可升高 临床上血清 临床上血清ALTALT、、ASTAST表现为轻度增加的有胰腺炎、表现为轻度增加的有胰腺炎、乙醇性脂肪肝、肝硬化、肉芽肿、肿瘤;中度增加的乙醇性脂肪肝、肝硬化、肉芽肿、肿瘤;中度增加的有传染性淋巴增多症、慢性活动性肝炎、肝外胆道梗有传染性淋巴增多症、慢性活动性肝炎、肝外胆道梗塞、心肌梗死;重度增加的有病毒性肝炎、中毒性肝塞、心肌梗死;重度增加的有病毒性肝炎、中毒性肝炎等。
肝硬化、慢性活动性肝炎和心肌梗死常有炎等肝硬化、慢性活动性肝炎和心肌梗死常有AST>ALTAST>ALT 二、二、γ-γ-谷氨酰转移酶及其同工酶谷氨酰转移酶及其同工酶 ( (一一) ) 生物化学特征生物化学特征 γ γ-谷氨酰转移酶-谷氨酰转移酶(γ-GT(γ-GT或或GGT)GGT)又称又称γ-γ-谷谷氨酰转肽酶,是一种线粒体酶组织分布以肾脏氨酰转肽酶,是一种线粒体酶组织分布以肾脏含量最多,其次为胰、肺、肝等含量最多,其次为胰、肺、肝等 血清中的 血清中的γ-GTγ-GT则主要来自肝胆,红细胞中则主要来自肝胆,红细胞中几乎无几乎无γ-GTγ-GT,因此溶血对其测定影响不大因此溶血对其测定影响不大γ-γ-GTGT催化催化γ-γ-谷氨酰基从谷胱甘肽谷氨酰基从谷胱甘肽(GSH)(GSH)或其他含或其他含γ-γ-谷氨酰基物质中转移到另一肽或氨基酸分子谷氨酰基物质中转移到另一肽或氨基酸分子上 ( (二二) )测定方法测定方法 γ-GT γ-GT的测定方法有数种,目前国内外的测定方法有数种,目前国内外多采用连续监测法测定血清多采用连续监测法测定血清γ-GTγ-GT活性。
活性 IFCCIFCC参考方法采用参考方法采用L-γ-L-γ-谷氨酰谷氨酰-3--3-羧基羧基——对硝基苯胺作为底物,以甘氨酰甘氨酸对硝基苯胺作为底物,以甘氨酰甘氨酸( (双甘肽双甘肽) )作为作为γ-γ-谷氨酰基的受体在的条谷氨酰基的受体在的条件下,件下,γ-GTγ-GT催化底物生成催化底物生成γ-γ-谷氨酰双甘肽谷氨酰双甘肽和黄色的和黄色的2—2—硝基硝基-5--5-氨基苯甲酸,在氨基苯甲酸,在410nm410nm波长处直接连续监测,吸光度的增高速率与波长处直接连续监测,吸光度的增高速率与γ-GTγ-GT活性成正比关系活性成正比关系 ( (三三) )临床意义临床意义 γ-GT γ-GT是肝胆疾病检出阳性率最高的酶胆道是肝胆疾病检出阳性率最高的酶胆道疾病如胆石症、胆道炎症、肝外梗阻时,疾病如胆石症、胆道炎症、肝外梗阻时,γ-GTγ-GT不不仅阳性率高,而且升高明显肝实质疾病如肝炎、仅阳性率高,而且升高明显肝实质疾病如肝炎、脂肪肝、肝硬化时脂肪肝、肝硬化时γ-GTγ-GT一般只是中度升高一般只是中度升高(ULN(ULN的的2 2~~5 5倍倍) ),这点有助于肝胆疾病的鉴别诊断。
这点有助于肝胆疾病的鉴别诊断 若若ALPALP升高而升高而γ-GTγ-GT正常可完全排除正常可完全排除ALPALP的肝来的肝来源,若源,若ALPALP和和γ-GTγ-GT均增加,则应先排除肝外引起均增加,则应先排除肝外引起γ-GTγ-GT增加的原因,一旦排除,则增加的原因,一旦排除,则γ-GTγ-GT增高即为增高即为肝病所致肝病所致 γ-GT γ-GT还可用于判断恶性肿瘤有无肝转还可用于判断恶性肿瘤有无肝转移,肿瘤患者如有移,肿瘤患者如有γ-GTγ-GT的升高,常说明有的升高,常说明有肝转移 γ-GT γ-GT与乙醇的摄取量有关,饮酒时,与乙醇的摄取量有关,饮酒时,由于乙醇对肝细胞线粒体的诱导导致由于乙醇对肝细胞线粒体的诱导导致γ-GT-GT活性升高,故对乙醇性中毒的判定有相当活性升高,故对乙醇性中毒的判定有相当的价值长期接受巴比妥类药物、含雌激的价值长期接受巴比妥类药物、含雌激素的避孕药者常有素的避孕药者常有γ-GTγ-GT升高 用醋纤膜电泳可将用醋纤膜电泳可将γ-GT同工酶分为同工酶分为γ-GTl、、γ-GT2、、γ-GT3和和γ-GT4 四种,正常四种,正常人只见人只见γ-GT2和和γ-GT3。
重症肝胆疾病和肝重症肝胆疾病和肝癌时常有癌时常有γ-GTl出现,乙醇性肝坏死和胆总出现,乙醇性肝坏死和胆总管结石时常有管结石时常有γ-GT2增加,胆总管结石及胰增加,胆总管结石及胰腺炎时腺炎时γ-GT2也增加γ-GT4与胆红素增高与胆红素增高密切相关密切相关 三、肌酸激酶及其同工酶和亚型三、肌酸激酶及其同工酶和亚型 ( (一一) )生物化学特性生物化学特性 肌酸激酶肌酸激酶(CK) (CK) 催化肌酸和催化肌酸和ATPATP或磷酸肌酸和或磷酸肌酸和ADPADP之间的磷酸转移的可逆性反应,所产生的磷酸肌酸含之间的磷酸转移的可逆性反应,所产生的磷酸肌酸含高能磷酸键,是肌肉收缩时能量的直接来源高能磷酸键,是肌肉收缩时能量的直接来源CKCK广泛广泛分布于全身,分布于全身,在骨骼肌含量最高在骨骼肌含量最高,其次是心肌和脑其次是心肌和脑 CK CK是由是由M M和和B B两类亚基组成的二聚体在细胞质内两类亚基组成的二聚体在细胞质内存在存在3 3种同工酶,即种同工酶,即CK-BBCK-BB(CK1)(CK1),,CK-MBCK-MB(CK2)(CK2)和和CK-CK-MMMM(CK3)(CK3)。
在细胞线粒体内还存在另一在细胞线粒体内还存在另一CKCK同工酶,即同工酶,即所谓线粒体所谓线粒体CK(CK-Mt)CK(CK-Mt),也称,也称CK4CK4各种各种CK同工酶还同工酶还可进一步根据所带电荷和等电点不同分离数目不等的可进一步根据所带电荷和等电点不同分离数目不等的亚型 ( (二二) )测定方法测定方法 CKCK的测定方法以的测定方法以酶偶联法酶偶联法最常用,最常用,是是CK的参考的参考方法方法.有两种工具酶及指示酶参与反应原理如下:有两种工具酶及指示酶参与反应原理如下: CK CK磷酸肌酸磷酸肌酸 + ADP + ADP 肌酸肌酸 + ATP + ATP HK HKATP + ATP + 葡萄糖葡萄糖 6-6-磷酸葡萄糖磷酸葡萄糖 + ADP + ADP G6PD6-磷酸葡萄糖磷酸葡萄糖 + NADP+ 6-磷酸葡萄糖酸盐磷酸葡萄糖酸盐 + NADPH +H+ 可在 可在340nm波长下测定波长下测定NADPH生成速率而生成速率而计算计算CK活性浓度。
活性浓度 临床常规测定临床常规测定CK同工酶多用电泳和免疫抑制同工酶多用电泳和免疫抑制法,但两法均会受溶血和巨法,但两法均会受溶血和巨CK的干扰,免疫抑的干扰,免疫抑制法还会受到制法还会受到CK-BB的干扰因此现在推荐用的干扰因此现在推荐用免疫化学方法直接测定免疫化学方法直接测定CK—MBmass,可不受,可不受溶血和巨溶血和巨CK的干扰CK同工酶亚型同工酶亚型(CK-MM 型和型和CK-MB 型型)多用琼脂糖凝胶高压电泳和等多用琼脂糖凝胶高压电泳和等电聚焦电泳等电聚焦电泳等 ( (三三) )临床意义临床意义 CKCK及其同工酶和亚型是目前临床上测定次及其同工酶和亚型是目前临床上测定次数最多的酶之一,主要用于心肌、骨骼肌和脑数最多的酶之一,主要用于心肌、骨骼肌和脑疾患的诊断和鉴别诊断及预后判断疾患的诊断和鉴别诊断及预后判断 AMIAMI时总时总CKCK活性升高显著,约在梗死后活性升高显著,约在梗死后3 3~~8h8h即升高,即升高,1010~~24h24h达峰值,达峰值,3 3~~4d4d恢复正常恢复正常 CKCK极度升高极度升高(>3000U(>3000U//L)L)主要见于全身疾病,主要见于全身疾病,特别是肌肉疾病,此时特别是肌肉疾病,此时CKCK测定有助于肌萎缩病测定有助于肌萎缩病因的鉴别,如进行性肌萎缩时可见因的鉴别,如进行性肌萎缩时可见CKCK显著升高。
显著升高 此外,病毒、细菌、寄生虫感染引起的肌肉感染 此外,病毒、细菌、寄生虫感染引起的肌肉感染性疾病性疾病(如心肌炎、皮肌炎等如心肌炎、皮肌炎等),都能引起,都能引起CK升高但神经疾病引起的肌萎缩,神经疾病引起的肌萎缩,CK活性一般正常 活性一般正常 CK-MM亚型测定对早期亚型测定对早期AMI的检出更为敏感,的检出更为敏感,一般以一般以 CK-MM3/作为诊断/作为诊断AMI的标准,但必须排的标准,但必须排除急性骨骼肌损伤除急性骨骼肌损伤AMI发病发病2~~4h CK-MM3//CK-MM1 即开始升高,即开始升高,8~~12h达峰值CK-MB2亚型在亚型在AMI早期诊断和判断有无再灌注上有很高的灵敏度和早期诊断和判断有无再灌注上有很高的灵敏度和特异性一般/特异性一般/L或或CK-MB2//CK-MBl可作为可作为AMI的的诊断标准之一诊断标准之一 四、乳酸脱氢酶及其同工酶四、乳酸脱氢酶及其同工酶(一)生物化学特征(一)生物化学特征 乳酸脱氢酶乳酸脱氢酶(LD(LD或或LDH)LDH)催化乳酸氧化成丙催化乳酸氧化成丙酮酸,同时将氢转移给辅酶而成为酮酸,同时将氢转移给辅酶而成为NADHNADH,依,依条件不同而有可逆性。
反应式如下:条件不同而有可逆性反应式如下:L-L-乳酸乳酸 + NAD + NAD+ + 丙酮酸丙酮酸 + NADH + H + NADH + H+ + LD LD是一种含锌的糖酵解酶,广泛存在于是一种含锌的糖酵解酶,广泛存在于人体各组织中,以肝、心肌、肾、肌肉、红人体各组织中,以肝、心肌、肾、肌肉、红细胞含量较多细胞含量较多 LD是由两种不同亚基是由两种不同亚基(M和和H)组成的四聚组成的四聚体,形成体,形成5种结构不同的同工酶,即种结构不同的同工酶,即LD1(H4),,LD2(H3M),,LD3(H2M2),,LD4(HM3)和和LD5(M4) 这这5种同工酶大致可分为三类:种同工酶大致可分为三类: 一类以一类以LD1为主,主要在心肌为主,主要在心肌,可占总,可占总LD活性活性50%以上,也存在于红细胞内;%以上,也存在于红细胞内; 另一类以另一类以LD5为主,以横纹肌为代表,肝为主,以横纹肌为代表,肝脏脏中也有;中也有; 第三类以第三类以LD3为主,存在于脾、肺为主,存在于脾、肺 ( (二二) )测定方法测定方法 目前根据目前根据LDLD催化反应方向的不同,有两大类催化反应方向的不同,有两大类测测LDLD方法,一大类为以丙酮酸为底物的逆向反应方法,一大类为以丙酮酸为底物的逆向反应( (称称LD-PLD-P法法) );另一大类以乳酸为底物的顺向反应;另一大类以乳酸为底物的顺向反应( (称称LD-LLD-L法法) )。
我国多采用目前我国多采用目前IFCCIFCC参考方法参考方法LD-LLD-L法,用连续监测法进行测定法,用连续监测法进行测定 LD LD同工酶测定以琼脂糖凝胶电泳法更多用同工酶测定以琼脂糖凝胶电泳法更多用一般成年人血中一般成年人血中LDLD同工酶存在如下规律:同工酶存在如下规律:LD2>LDl>LD3>LD4>LD5LD2>LDl>LD3>LD4>LD5,部分正常儿童血中可见,部分正常儿童血中可见LDl>LD2LDl>LD2 ( (三三) )临床意义临床意义 临床上测定临床上测定LDLD及其同工酶常用于诊断和鉴别诊及其同工酶常用于诊断和鉴别诊断心、肝和骨骼肌的疾病断心、肝和骨骼肌的疾病 AMI AMI时,时,LDLD由于分子量较大,在常用心肌酶中升由于分子量较大,在常用心肌酶中升高最迟,通常在梗死高最迟,通常在梗死8 8~~18h18h升高,升高,4848~~144h144h达峰值,达峰值,可显著升高可显著升高(>5ULN)(>5ULN),因其半寿期较长,增高持续时,因其半寿期较长,增高持续时间可达间可达5 5~~10d10d,此时其他酶已恢复正常,在亚急性,此时其他酶已恢复正常,在亚急性心肌梗死诊断上有一定价值。
但其诊断心肌梗死诊断上有一定价值但其诊断AMIAMI特异性差,特异性差,运动后、肾病综合征等可呈现轻度升高运动后、肾病综合征等可呈现轻度升高(<3ULN)(<3ULN)肝炎、休克、白血病、溶血性贫血及晚期恶性肿瘤等炎、休克、白血病、溶血性贫血及晚期恶性肿瘤等均可有中度或显著升高均可有中度或显著升高 测定血清及胸腹水中测定血清及胸腹水中LD含量常用含量常用来鉴别其为漏出液抑或渗出液,若胸水来鉴别其为漏出液抑或渗出液,若胸水LD/血清、腹水/血清、腹水LD/血清为渗出液,/血清为渗出液,反之为漏出液反之为漏出液 临床上测定临床上测定LDLD同工酶同工酶有助于相应组织病变的诊有助于相应组织病变的诊断心肌梗死和心肌炎时断心肌梗死和心肌炎时以以LD1LD1和和LD2LD2升高为主,且升高为主,且绝大多数的绝大多数的AMIAMI患者血中患者血中LDLD同工酶都出现同工酶都出现LDlLDl//LD2>1LD2>1,即所谓,即所谓““反转比率反转比率””现象,且持续的时间长现象,且持续的时间长 骨骼肌和肝细胞损伤时骨骼肌和肝细胞损伤时常出现常出现LD5>LD4LD5>LD4。
肺、胰、脾、淋巴结坏肺、胰、脾、淋巴结坏死和炎症及各种恶性疾病时死和炎症及各种恶性疾病时LD2LD2、、LD3LD3、、LD4LD4升高;升高; 溶血性疾病时溶血性疾病时LD1LD1和和LD2LD2升高,但仍为升高,但仍为LD2>LD1LD2>LD1;恶性;恶性肿瘤如转移到肝脏往往伴有肿瘤如转移到肝脏往往伴有LD4LD4、、LD5LD5升高 五、碱性磷酸酶及其同工酶五、碱性磷酸酶及其同工酶 ( (一一) )生物化学特征生物化学特征 碱性磷酸酶碱性磷酸酶(ALP) (ALP) 广泛存在于各器官组织中,广泛存在于各器官组织中,其含量以肝脏为最多,其次为肾脏、胎盘、小肠、其含量以肝脏为最多,其次为肾脏、胎盘、小肠、骨骼等血清中骨骼等血清中ALPALP主要来自肝脏和骨骼生长期主要来自肝脏和骨骼生长期儿童血清内儿童血清内ALPALP大多数来自成骨母细胞和生长中的大多数来自成骨母细胞和生长中的骨软骨细胞,少量来自肝尿中骨软骨细胞,少量来自肝尿中ALPALP并非来自血液,并非来自血液,而是直接来自肾小管细胞人体各组织而是直接来自肾小管细胞。
人体各组织ALPALP同工酶同工酶可分为可分为3 3大类,即胎盘大类,即胎盘ALPALP、肠、肠ALPALP和肝/骨/肾和肝/骨/肾ALPALP同工酶 ( (二二) )测定方法测定方法 ALP ALP的测定方法有多种,目前国内应用较多的测定方法有多种,目前国内应用较多的方法为连续监测法,以磷酸对硝基酚的方法为连续监测法,以磷酸对硝基酚(4-NPP)(4-NPP)为底物,为底物,2-2-氨基氨基-2--2-甲基甲基-1--1-丙醇丙醇(AMP)(AMP)或二乙醇或二乙醇胺胺(DEA)(DEA)激活型缓冲液为磷酸酰基的受体激活型缓冲液为磷酸酰基的受体4-4-NPPNPP在碱性溶液中为五色,在在碱性溶液中为五色,在ALPALP催化下,催化下,4-NPP4-NPP分裂出磷酸基团,生成游离的对硝基苯酚后分裂出磷酸基团,生成游离的对硝基苯酚后者在碱性溶液中转变成醌式结构,呈现较深的者在碱性溶液中转变成醌式结构,呈现较深的黄色在波长黄色在波长405nm405nm处连续监测吸光度增高速率,处连续监测吸光度增高速率,计算计算ALPALP活性 ( (三三) )临床意义临床意义 在骨生长、妊娠、成长、成熟和脂肪餐后在骨生长、妊娠、成长、成熟和脂肪餐后分泌等生理情况下,分泌等生理情况下,ALPALP活性可增高。
除外上述活性可增高除外上述生理性增高,临床上测定生理性增高,临床上测定ALPALP主要用于骨骼、肝主要用于骨骼、肝胆系统疾病等的诊断和鉴别诊断,尤其是黄疸胆系统疾病等的诊断和鉴别诊断,尤其是黄疸的鉴别诊断对于原因不明的高的鉴别诊断对于原因不明的高ALPALP血清水平,血清水平,可测定同工酶以协助明确其器官来源可测定同工酶以协助明确其器官来源 急性肝炎包括病毒性肝炎和中毒性肝炎,急性肝炎包括病毒性肝炎和中毒性肝炎,ALP增高达增高达2~~5ULN,而肝硬化、胆石症和肿,而肝硬化、胆石症和肿瘤引起的胆汁淤积,瘤引起的胆汁淤积,ALP增高达增高达ULN的的5~~20倍90%以上的肝外胆道阻塞患者血清%以上的肝外胆道阻塞患者血清ALP升升高,升高的程度常和阻塞程度及病程成正比高,升高的程度常和阻塞程度及病程成正比如果血清中如果血清中ALP持续低值,则阻塞性黄疸的可持续低值,则阻塞性黄疸的可能性很小若血清胆红素逐渐升高,而能性很小若血清胆红素逐渐升高,而ALP不不断下降表示病情恶化断下降表示病情恶化 肝外阻塞性黄疸、转移性肝癌、肝脓肿和肝外阻塞性黄疸、转移性肝癌、肝脓肿和胆石症时胆汁胆石症时胆汁ALPALP检出率很高,并伴有肝检出率很高,并伴有肝ALPALP增加,而肝内胆汁淤积、急性肝炎、原发性肝增加,而肝内胆汁淤积、急性肝炎、原发性肝癌等主要表现为肝癌等主要表现为肝ALPALP增多,大多数不出现胆汁增多,大多数不出现胆汁ALPALP。
各种疾病所致骨损伤等,均引起各种疾病所致骨损伤等,均引起ALPALP活性升活性升高,尤其是骨高,尤其是骨ALPALP同工酶增高同工酶增高 六、酸性磷酸酶及其同工酶 六、酸性磷酸酶及其同工酶 ( (一一) )生物化学特征生物化学特征 酸性磷酸酶酸性磷酸酶(ACP) (ACP) 存在于人体不同组织,如前列存在于人体不同组织,如前列腺、红细胞等,主要存在于细胞的溶酶体中,以前列腺、红细胞等,主要存在于细胞的溶酶体中,以前列腺含量最多腺含量最多 正常男性血清中 正常男性血清中ACPACP约主要来自前列腺,其余部分约主要来自前列腺,其余部分及女子血清中的及女子血清中的ACPACP可能来自血小板、红细胞、白细胞可能来自血小板、红细胞、白细胞及破骨细胞等及破骨细胞等 ACPACP同工酶分前列腺同工酶分前列腺ACP(PAP)ACP(PAP)和非前列腺和非前列腺ACP(ACP(如红如红细胞细胞ACPACP、溶酶体、溶酶体ACPACP、破骨细胞或吞噬细胞、破骨细胞或吞噬细胞ACPACP等等) )两两大类,在前列腺中含有丰富的大类,在前列腺中含有丰富的PAPPAP,比其他组织约多,比其他组织约多100100倍。
测定标本应及时分离血清倍测定标本应及时分离血清( (浆浆) )并尽早测定并尽早测定 ( (二二) )测定方法测定方法 ACPACP的测定底物、原理和方法与的测定底物、原理和方法与ALPALP相相似,只是反应似,只是反应pHpH为酸性国外多推荐使用为酸性国外多推荐使用磷酸百里酚酞为底物的比色法,因为磷酸百里酚酞为底物的比色法,因为PAPPAP对对此底物亲和力高,测定结果基本能反映此底物亲和力高,测定结果基本能反映ACPACP含量高低此外还可通过用含量高低此外还可通过用L-L-酒石酸这类酒石酸这类抑制剂鉴别和估量抑制剂鉴别和估量PAPPAP活性由于活性由于ACPACP不稳不稳定,酶活性测定困难,目前已发展一些免定,酶活性测定困难,目前已发展一些免疫学方法特异而灵敏地测定疫学方法特异而灵敏地测定ACP(ACP(特别是特别是PAP)PAP) ( (三三) )临床意义临床意义 ACP ACP及其同工酶测定主要用于诊断前列及其同工酶测定主要用于诊断前列腺癌前列腺癌时血清腺癌前列腺癌时血清ACPACP活性显著升高,活性显著升高,前列腺癌患者血清前列腺癌患者血清PAPPAP也明显增高,其中肿也明显增高,其中肿瘤分化较好者增高尤为显著。
瘤分化较好者增高尤为显著 急性尿潴留、变形性骨炎、癌肿骨转移 急性尿潴留、变形性骨炎、癌肿骨转移及甲亢时及甲亢时ACPACP可轻度升高是否为抗酒石酸可轻度升高是否为抗酒石酸盐的非盐的非PAPPAP增高为毛细胞性白血病的重要鉴增高为毛细胞性白血病的重要鉴别要点 七、淀粉酶及其同工酶七、淀粉酶及其同工酶 ( (一一) )生物化学特征生物化学特征 淀粉酶淀粉酶(AMY)(AMY):人和动物只含:人和动物只含α-AMYα-AMY人体中胰腺含胰腺含AMYAMY最多,由胰泡细胞合成后通过胰管分泌最多,由胰泡细胞合成后通过胰管分泌人小肠,唾液腺也分泌大量人小肠,唾液腺也分泌大量AMYAMY入口腔开始消化多入口腔开始消化多糖化合物糖化合物 AMY AMY是一种需钙的金属酶,其最适是一种需钙的金属酶,其最适pHpH在~之间,在~之间,卤素和其他阴离子有激活作用卤素和其他阴离子有激活作用AMYAMY分子量较小,分子量较小,易由肾脏排出,半寿期很短,约易由肾脏排出,半寿期很短,约2h2h,所以病变时血,所以病变时血清清AMYAMY增高持续时间很短除肝素外,其他抗凝剂增高持续时间很短。
除肝素外,其他抗凝剂如枸橼酸、草酸盐及如枸橼酸、草酸盐及EDTAEDTA等都有抑制作用,故等都有抑制作用,故不宜不宜用去钙血浆测定用去钙血浆测定AMYAMY ( (二二) )测定方法测定方法 国内外目前测定国内外目前测定AMYAMY应用较多的是以麦应用较多的是以麦芽多糖为底物的方法,如芽多糖为底物的方法,如2-2-氯氯- -对硝基苯麦芽对硝基苯麦芽三糖苷三糖苷(CNP-G3)(CNP-G3)和亚乙基封闭的对硝基苯麦芽和亚乙基封闭的对硝基苯麦芽庚糖苷庚糖苷(4NP-C7)(4NP-C7)法法( (亦称亦称EPSEPS法法) ),以后者最常,以后者最常用,也是用,也是IFCCIFCC的推荐方法反应最后生成对硝的推荐方法反应最后生成对硝基苯酚,其生成量在一定范围内与基苯酚,其生成量在一定范围内与AMYAMY活性成活性成比,在比,在405nm405nm可以进行连续监测即可测出可以进行连续监测即可测出AMYAMY的的活性 ( (三三) )临床意义临床意义 长时间以来, 长时间以来,AMYAMY水平一直作为评价胰腺水平一直作为评价胰腺外分泌功能的一种辅助诊断指标。
人体胰腺外分泌功能的一种辅助诊断指标人体胰腺和腮腺组织损伤时,血清和尿中的总和腮腺组织损伤时,血清和尿中的总AMYAMY可显可显著增高,肾功能不全患者也有部分著增高,肾功能不全患者也有部分AMYAMY增高 在急性胰腺炎发病后在急性胰腺炎发病后2 2~~3h AMY3h AMY开始升高,多在开始升高,多在1212~~24h24h达峰值,达峰值,2 2~~5d5d下降至正常如持续性升高达数下降至正常如持续性升高达数周,常提示胰腺炎有反复,或有并发症发生周,常提示胰腺炎有反复,或有并发症发生 而尿 而尿AMYAMY约于发病后约于发病后1212~~24h24h开始升高,下降也比开始升高,下降也比血清血清AMYAMY慢,因此在急性胰腺炎后期测定尿慢,因此在急性胰腺炎后期测定尿AMYAMY更有价更有价值 临床上检测 临床上检测AMYAMY用于胰腺炎诊断时,应注意用于胰腺炎诊断时,应注意AMYAMY增增高幅度与病情不成比例,如原高幅度与病情不成比例,如原AMYAMY已升高却发生与症已升高却发生与症状不相应的降低时,常为凶险的坏死性胰腺炎的预兆状不相应的降低时,常为凶险的坏死性胰腺炎的预兆。
AMYAMY水平正常也不能完全排除急性胰腺炎水平正常也不能完全排除急性胰腺炎 八、脂 八、脂 肪肪 酶酶 ( (一一) )生物化学特征生物化学特征 脂肪酶脂肪酶(Lipase(Lipase,,LPSLPS或或LlP) LlP) 是胰腺外分是胰腺外分泌酶LPSLPS可被巯基化合物、胆汁酸、可被巯基化合物、胆汁酸、CaCa2+2+及及辅脂肪酶等激活剂激活,而被重金属、丝氨辅脂肪酶等激活剂激活,而被重金属、丝氨酸所抑制血清中酸所抑制血清中LPSLPS主要来自胰腺,少量来主要来自胰腺,少量来自胃肠粘膜自胃肠粘膜 ( (二二) )测定方法测定方法 迄今测定 迄今测定LPSLPS的方法可分为的方法可分为3 3类:测定产物类:测定产物( (游离脂肪酸游离脂肪酸) )的增加的增加( (如滴定法、比色法、分如滴定法、比色法、分光光度法、荧光法和光光度法、荧光法和pHpH电极法等电极法等) );测定底物;测定底物的减少量的减少量( (如比浊法、扩散法等如比浊法、扩散法等) );测定;测定LPSLPS的的实际质量实际质量( (双抗体夹心免疫分析法、乳胶凝集双抗体夹心免疫分析法、乳胶凝集法法) )。
目前在国内大多实验室主要以滴定法、目前在国内大多实验室主要以滴定法、比浊法和分光光度法为主比浊法和分光光度法为主 比浊法以橄榄油悬液为底物,其与水混合常呈比浊法以橄榄油悬液为底物,其与水混合常呈乳糜状,血清中的乳糜状,血清中的LPSLPS分解橄榄油乳剂生成水溶性的分解橄榄油乳剂生成水溶性的甘油和脂肪酸,浊度随之下降,根据浊度降低的程度,甘油和脂肪酸,浊度随之下降,根据浊度降低的程度,可计算出可计算出LPSLPS活性浓度此类方法可在活性浓度此类方法可在400nm400nm波长下比波长下比浊,测出因橄榄油乳剂的变化吸光度的变化或者以浊,测出因橄榄油乳剂的变化吸光度的变化或者以340nm340nm波长连续监测浊度的变化以连续监测法为常波长连续监测浊度的变化以连续监测法为常用 分光光度法目前有两类比较常用:分光光度法目前有两类比较常用: 一类为酶偶联显色比色法,多用 一类为酶偶联显色比色法,多用1 1,,2-2-甘油甘油二酯为底物,在二酯为底物,在LPSLPS和单酸甘油酯脂肪酶的催化和单酸甘油酯脂肪酶的催化下,水解生成甘油和脂肪酸,甘油通过甘油激下,水解生成甘油和脂肪酸,甘油通过甘油激酶作用生成酶作用生成3-3-磷酸甘油,再通过甘油磷酸氧化磷酸甘油,再通过甘油磷酸氧化酶/过氧化物酶体系和酶/过氧化物酶体系和4-AAP4-AAP色素原体系产生紫色素原体系产生紫红色。
于红色于550nm550nm波长连续监测吸光度的变化即可波长连续监测吸光度的变化即可计算计算LPSLPS活性浓度此类方法特异性高,通过双活性浓度此类方法特异性高,通过双试剂也基本可解决内源性甘油的干扰问题试剂也基本可解决内源性甘油的干扰问题 另一类采用人工合成底物另一类采用人工合成底物1,2-1,2-二月桂基二月桂基- -rac-rac-丙三氧基丙三氧基-3--3-戊二酸试灵酯设计的连续监戊二酸试灵酯设计的连续监测法该底物在碱性环境中,在测法该底物在碱性环境中,在LPSLPS和辅脂肪和辅脂肪酶作用下,水解生成酶作用下,水解生成1,2-1,2-二月桂基甘油和戊二月桂基甘油和戊二酸二酸-6’--6’-甲基试卤灵后者不稳定,可自发甲基试卤灵后者不稳定,可自发分解生成戊二酸和甲基试卤灵甲基试卤灵分解生成戊二酸和甲基试卤灵甲基试卤灵在在577nm577nm波长附近有吸收峰,连续监测其吸光波长附近有吸收峰,连续监测其吸光度变化可定量测定度变化可定量测定LPSLPS活性浓度此法具有简活性浓度此法具有简便、快速、灵敏、稳定和抗干扰能力强等特便、快速、灵敏、稳定和抗干扰能力强等特点 ( (三三) )临床意义临床意义 正常人血清正常人血清LPSLPS含量极少,但在急性胰腺炎时,含量极少,但在急性胰腺炎时,2 2~~12h12h血清血清LPSLPS显著升高,显著升高,24h24h至峰值,可达至峰值,可达10ULN10ULN,甚,甚至至5050~~60ULN60ULN,至,至 48-72h 48-72h可能恢复正常,但随后又可可能恢复正常,但随后又可持续升高持续升高8 8~~15d15d。
由于血清由于血清LPSLPS在急性胰腺炎时活性在急性胰腺炎时活性升高的时间早,上升的幅度的大,持续的时间长,故升高的时间早,上升的幅度的大,持续的时间长,故其诊断价值优于其诊断价值优于AMYAMY临床观察发现,凡血清临床观察发现,凡血清AMYAMY升高升高的病例,其的病例,其LPSLPS均升高;而均升高;而LPSLPS升高者升高者AMYAMY不一定升高,不一定升高,约有约有2 2//3AMY3AMY正常的胰腺炎病人,其正常的胰腺炎病人,其LPSLPS正常;非胰腺正常;非胰腺炎的急腹症有血清炎的急腹症有血清AMYAMY升高而升高而LPSLPS不升高酗酒、乙醇不升高酗酒、乙醇性胰腺炎、慢性胰腺炎、胰腺癌、肝胆疾患等血清性胰腺炎、慢性胰腺炎、胰腺癌、肝胆疾患等血清LPSLPS可有不同程度的升高可有不同程度的升高 九、胆碱酯酶九、胆碱酯酶 ( (一一) )生物化学特征生物化学特征 胆碱酯酶胆碱酯酶(ChE)(ChE)是一类催化酰基胆碱水解的是一类催化酰基胆碱水解的酶类人体主要有两种,即乙酰胆碱酯酶酶类人体主要有两种,即乙酰胆碱酯酶(AChE)(AChE)又称真性胆碱酯酶或胆碱酯酶又称真性胆碱酯酶或胆碱酯酶ⅠⅠ、丁酰、丁酰胆碱酯酶胆碱酯酶(BuChE)(BuChE)又称假性胆碱酯酶或称拟乙酰又称假性胆碱酯酶或称拟乙酰胆碱酯酶胆碱酯酶(PChE)(PChE)或胆碱酯酶或胆碱酯酶ⅡⅡ。
临床常规检查临床常规检查的胆碱酯酶的胆碱酯酶(SChE)(SChE)即指后者,通常简称为即指后者,通常简称为ChEChE AChEAChE主要分布于神经组织、肌肉、红细胞、主要分布于神经组织、肌肉、红细胞、肺等处,其生理功能是催化水解乙酰胆碱,能肺等处,其生理功能是催化水解乙酰胆碱,能使神经细胞反复除极使神经细胞反复除极ChEChE//BuChEBuChE主要在肝脏主要在肝脏合成,也分布于胰脏、心脏、小肠粘膜、大脑合成,也分布于胰脏、心脏、小肠粘膜、大脑灰质、血浆及淋巴液等处灰质、血浆及淋巴液等处ChEChE的真正生理功能的真正生理功能至今尚未阐明许多抑制剂对两种至今尚未阐明许多抑制剂对两种ChEChE有抑制作有抑制作用,如生物碱用,如生物碱( (吗啡、毒扁豆碱吗啡、毒扁豆碱) )、枸橼酸盐、、枸橼酸盐、氟化物、有机磷杀虫剂等氟化物、有机磷杀虫剂等 ( (二二) )测定方法测定方法 主要有两类方法用于临床常规主要有两类方法用于临床常规ChEChE测定,一测定,一类以乙酰胆碱为底物,测定水解反应生成的酸类以乙酰胆碱为底物,测定水解反应生成的酸。
常用指示剂常用指示剂( (如间如间- -硝基酚或溴百里酚蓝硝基酚或溴百里酚蓝) )测测pHpH法特别是纸片法简便快速,适用于急诊有机磷中毒特别是纸片法简便快速,适用于急诊有机磷中毒的快速筛查但此类方法准确度较差另一类以的快速筛查但此类方法准确度较差另一类以人工合成底物测定胆碱衍生物的生成人工合成底物测定胆碱衍生物的生成丁酰硫代胆碱法是目前测定血清丁酰硫代胆碱法是目前测定血清ChEChE最常最常用的方法测定原理如下:用的方法测定原理如下: 丁酰硫代胆碱+H2O * *又称又称EllmanEllman试剂或简称试剂或简称DTNBDTNB 在在405nm405nm波长连续监测测定吸光度值的变化,即波长连续监测测定吸光度值的变化,即可计算血清可计算血清ChEChE的活性浓度的活性浓度 本法简便、快速,易于自动化但只能测定血清本法简便、快速,易于自动化但只能测定血清ChEChE,而不能测定红细胞,而不能测定红细胞AChEAChE (三三) 临床意义临床意义 血浆或血清中血浆或血清中AChE的含量甚微,临床上测定红细胞的含量甚微,临床上测定红细胞中的中的AChE用于有机磷中毒的诊断。
用于有机磷中毒的诊断 由于由于ChE在肝脏合成后立即释放到血浆中,故是评在肝脏合成后立即释放到血浆中,故是评价肝细胞合成功能的灵敏指标,与清蛋白生成有密切关价肝细胞合成功能的灵敏指标,与清蛋白生成有密切关系,故测定血清系,故测定血清ChE一般用作肝功能试验肝、胆疾病一般用作肝功能试验肝、胆疾病时时ALT、、γ-GT均升高,往往难以鉴别,如增加血清均升高,往往难以鉴别,如增加血清ChE测定,可发现测定,可发现ChE降低者均为肝脏疾患,而正常者多为降低者均为肝脏疾患,而正常者多为胆道疾患胆道疾患 血清血清ChE减少主要见于肝病和有机磷中毒,增加主减少主要见于肝病和有机磷中毒,增加主要见于肾病综合征要见于肾病综合征 小小 结结 酶是能催化生物体内化学反应的一类特殊酶是能催化生物体内化学反应的一类特殊蛋白质体内大多数酶为结合酶,除含酶蛋白蛋白质体内大多数酶为结合酶,除含酶蛋白外,还含有辅因子外,还含有辅因子( (辅酶和辅基辅酶和辅基) )酶可分为氧酶可分为氧化还原酶类、转移酶类、水解酶类、裂解酶、化还原酶类、转移酶类、水解酶类、裂解酶、异构酶类和合成酶类等六大类。
酶促反应具有异构酶类和合成酶类等六大类酶促反应具有高效、高度特异性和可调节性等特点,影响因高效、高度特异性和可调节性等特点,影响因素主要有酶浓度、底物浓度、素主要有酶浓度、底物浓度、pHpH、温度、电解、温度、电解质及辅酶、激活剂及抑制剂等其中底物浓度质及辅酶、激活剂及抑制剂等其中底物浓度对酶促反应的影响可用米对酶促反应的影响可用米- -曼氏方程表示曼氏方程表示 血浆酶可分成血浆特异酶和非血浆特异酶血浆酶可分成血浆特异酶和非血浆特异酶两大类,后者可再分为外分泌酶和细胞酶等两大类,后者可再分为外分泌酶和细胞酶等正常情况下血清中酶活性相对恒定但一些病正常情况下血清中酶活性相对恒定但一些病理情况常导致血清中酶活性的改变性别、年理情况常导致血清中酶活性的改变性别、年龄、运动、妊娠、人种及环境因素等可引起人龄、运动、妊娠、人种及环境因素等可引起人血清中某些酶的生理性变化血清中某些酶的生理性变化 酶活性浓度测定是临床酶学分析最为常用的方酶活性浓度测定是临床酶学分析最为常用的方法根据酶促反应中底物的减少量或产物的生成量,法根据酶促反应中底物的减少量或产物的生成量,可计算出酶活性浓度的高低。
按检测方法分类主要可计算出酶活性浓度的高低按检测方法分类主要方法有量气法、分光光度法、荧光法和放射性核素方法有量气法、分光光度法、荧光法和放射性核素法、电极法等,以分光光度法最常用法、电极法等,以分光光度法最常用 按反应时间分类,可分为按反应时间分类,可分为定时法定时法和和连续监测法连续监测法两大两大类其中连续监测法是目前临床实验室最常用的方法,类其中连续监测法是目前临床实验室最常用的方法,可分为直接法和间接法两大类可分为直接法和间接法两大类 直接法是在不终止酶促反应条件下,直接通过测定直接法是在不终止酶促反应条件下,直接通过测定吸光度、荧光等,从而计算出酶活性浓度其中以吸光度、荧光等,从而计算出酶活性浓度其中以分光分光光度法光度法应用最为广泛应用最为广泛 间接法以酶偶联法应用最多测定酶活性浓度时可间接法以酶偶联法应用最多测定酶活性浓度时可受到一些如其他酶和物质的干扰、酶的污染、非酶反应、受到一些如其他酶和物质的干扰、酶的污染、非酶反应、分析容器的污染和沉淀形成等因素的影响,可通过试剂分析容器的污染和沉淀形成等因素的影响,可通过试剂空白管检出并加以校正或改用双试剂加以解决。
空白管检出并加以校正或改用双试剂加以解决 通常把酶学分析中作为试剂用于测定化合物浓度通常把酶学分析中作为试剂用于测定化合物浓度或酶活性的酶称为工具酶在临床生物化学检验中,许或酶活性的酶称为工具酶在临床生物化学检验中,许多代谢物浓度的测定往往使用有工具酶的参与的反应,多代谢物浓度的测定往往使用有工具酶的参与的反应,即所谓共通反应途径即所谓共通反应途径 用自动生物化学分析仪进行酶学测定时,要合理选用自动生物化学分析仪进行酶学测定时,要合理选择方法并进行参数的设置在标本的采集、运输与保存择方法并进行参数的设置在标本的采集、运输与保存时要特别注意溶血、抗凝剂及温度等技术因素对测定的时要特别注意溶血、抗凝剂及温度等技术因素对测定的影响 用自动生物化学分析仪进行酶学测定时,要合用自动生物化学分析仪进行酶学测定时,要合理选择方法并进行参数的设置在标本的采集、运理选择方法并进行参数的设置在标本的采集、运输与保存时要特别注意溶血、抗凝剂及温度等技术输与保存时要特别注意溶血、抗凝剂及温度等技术因素对测定的影响因素对测定的影响 酶活性单位有惯用单位、国际单位和 酶活性单位有惯用单位、国际单位和Katal单单位。
临床上习惯用位临床上习惯用U//L来表示体液中酶催化浓度来表示体液中酶催化浓度 酶测定的标准化工作可从使用推荐方法 酶测定的标准化工作可从使用推荐方法和参考方法、使用公认的酶校正物或酶参考和参考方法、使用公认的酶校正物或酶参考物两方面人手近来物两方面人手近来IFCCIFCC决定建立包括参考决定建立包括参考测定方法、参考实验室网络和参考物等要素测定方法、参考实验室网络和参考物等要素在内的酶催化浓度测定的全球参比体系在内的酶催化浓度测定的全球参比体系 临床上还可利用酶的抗原性,通过免 临床上还可利用酶的抗原性,通过免疫化学方法直接进行酶浓度测定与传统疫化学方法直接进行酶浓度测定与传统的酶活性浓度测定法相比,这些免疫化学的酶活性浓度测定法相比,这些免疫化学法具有灵敏度高、特异性强等特点,能用法具有灵敏度高、特异性强等特点,能用于一些不表现酶活性或无活性的酶测定,于一些不表现酶活性或无活性的酶测定,而且特别适用于同工酶的测定而且特别适用于同工酶的测定 同工酶是具有相同的催化功能,但其分子组成、同工酶是具有相同的催化功能,但其分子组成、空间构象、理化性质、生物学性质以及器官分布和细空间构象、理化性质、生物学性质以及器官分布和细胞内定位不同的一类酶。
亚型指基因在编码过程中,胞内定位不同的一类酶亚型指基因在编码过程中,由于翻译修饰差异所形成的多种形式的一类酶往往由于翻译修饰差异所形成的多种形式的一类酶往往在基因编码产物从细胞内释人血浆时因肽酶的降解作在基因编码产物从细胞内释人血浆时因肽酶的降解作用而形成用而形成 同工酶的分析大致可分为两步,即首先精确地分同工酶的分析大致可分为两步,即首先精确地分离出某酶的各同工酶组分,然后测定酶的总活性和各离出某酶的各同工酶组分,然后测定酶的总活性和各同工酶组分的活性常用方法有电泳法、色谱法、免同工酶组分的活性常用方法有电泳法、色谱法、免疫分析法、动力学分析法和蛋白酶水解法等临床常疫分析法、动力学分析法和蛋白酶水解法等临床常规中以电泳法最常用规中以电泳法最常用 临床上以检测血清酶和同工酶应用最广,根据需 临床上以检测血清酶和同工酶应用最广,根据需要也可测定其他各种体液要也可测定其他各种体液( (如尿液、胸腔积液、腹水、如尿液、胸腔积液、腹水、脑脊液等脑脊液等) )中的酶和同工酶或亚型有时单凭某一酶的中的酶和同工酶或亚型有时单凭某一酶的活性变化,很难做出独立诊断若同时测定一组性质活性变化,很难做出独立诊断。
若同时测定一组性质不同的酶,比较各酶活性的变化,就能根据酶增高或不同的酶,比较各酶活性的变化,就能根据酶增高或减少的减少的““谱型谱型””做出诊断,此种同时检测一组酶,称做出诊断,此种同时检测一组酶,称为酶谱常用的如心肌酶谱、肌酶谱、肝酶谱、肿瘤为酶谱常用的如心肌酶谱、肌酶谱、肝酶谱、肿瘤酶谱和胰酶谱等酶谱和胰酶谱等 谢 谢! 谢 谢!。
